815例少精无精症患者在不育中的细胞遗传学分析
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张建 明 龙 海
【 摘要 】 目的
王鹏程
李丽 海 熊延安
通过对 ５４例无精症 、３ 例少精症患者进行 细胞遗传 学检 查分析 ， 讨无精症少精症 ８ ２１ 探
与染色体异常的关系及分 析研究染 色体异常在男性不育 中的诊断意义。方法 外 周血 染色体常规制 备方法
对染色体进行核型分析 ， 并采用 聚合酶链反应对 ３例 Ｙ染色体结构 异常患者 的 Ａ ＦＢ 区（ｚｏｐｒ ｉ ｆ — Ｚ Ａ 。 ａｏｓｅｍ ａ ａ ｃ ｃ ｔ ，Ｚ ） ｏ Ａ Ｆ 进行检测 。结果 ｒ ５４例无精症 患者 中检 出异 常核型 ８ ８ ７例 （ ４９ ％） 主要涉及染色体异 常 （ 目 １． ０ ， 数
能产 生精 子 ， 一类是 睾丸能产 生精子 ， 由于输 精管 阻塞 ， 另 但 使
精子不能排出体外 。少 精子 症可 由各种原 因造成 ， 如生 殖道 阻 滞（ 精索静脉 曲张 ） 内分 泌功 能紊 乱 、 殖道感染 、 量元素 缺 、 生 微 乏 、 色体异常等 。针对 以上 问题我实验室对 ２ １ 染 ００年 ｌ ２月 ６日 至 ２ １ 年 １ 月 １日来 自云南省各 地州市 医院 的 ５ ４例无 精症 ０１ １ ８ 和 ２１ ３ 例少精症 的患者进行 了染色体核型分析 ， 对其 中 ３例 Ｙ 并 染色体结构异常者 的 Ａ Ｆ 。 Ｚ 区进行检测 ， 以探讨无精 和严重少 精症 患者 的遗传缺 陷与精子发生 障碍 的关系 。
细胞遗传学 国际命名体制》 描述染色体异 常核型 。
Ｙ染色体 Ａ Ｆ微缺失 的 Ｐ Ｒ检 测按 常规 法从 外周 血淋 巴 Ｚ Ｃ
细胞提取 Ｄ Ａ Ｎ 。选 择位 于 Ａ Ｆ内的 １ Ｚ ５个位点为 Ｐ Ｒ扩增检测 Ｃ
项 目， 以 Ｓ Ｙ的扩 增 为 Ｐ Ｒ检 测 的质控 对 照。正 常男 性 的 并 Ｒ Ｃ Ｄ Ａ与每批患 者 Ｄ Ａ同 时进行 以上 各位 点 的单重 或 多 重法 Ｎ Ｎ Ｐ Ｒ扩增 ， Ｃ 作为正常对照。增覆 盖所有 Ａ Ｆ区域 的 ｌ Ｚ ５个 Ｓ Ｓ序 Ｔ
列标签 ， 中 Ａ Ｆ 其 Ｚ 有 ３个 序 列标 签 ， Ｚ 有 ６个 序 列标 签 ， ＡＦ
Ａ Ｆ 有 ４个序列标签 ， Ｚ 。有 ２个序列标签 。 Ｚ ＡＦ 样 品 处 理 （ 本 制 备 区 ）（ｐ ｃ ｅ ｒ ｅｓ ｇ ： １ 标 ｓｅｉ ｎ ｐｏ ｓｉ ） （ ）在 ｍ ｃ ｎ ２ ０Ｉ 抗凝血 中加入 ２ ｌ 白酶 Ｋ， ０ ｌ ｘ ０ 蛋 加入 ２ ０ 的缓 冲液 Ｇ ０ ｌ Ｂ， 充分颠 倒混匀 ，６℃水 浴 １ ｎ 中途上下混匀 几次 ； ２ 加 入 ５ ０ｍｉ， （）
中华 临床 医师 杂 志 （ 电子 版 ）０２年 ６月第 ６卷第 ｌ 期 ２１ ｌ
Ｃ ｉ Ｃｉｉ ａｓ Ｅｅｔ ｎｃＥ ｉｏ ）Ｊｎ ， １ ， ｏ ６，ｏ １ ｈｎＪ ｌ ｃ ｎ （ ｌｃ ｏ ｄｔｎ ， ｅ１２ ２ Ｖ １ Ｎ ．１ ｎｉ ｒｉ ｉ ｕ ０ ．
・
短篇论著 ・
８ ５例 少精 无精 症 患者在 不 育 中的细胞 遗传 学分析 １
来， 对生精障碍的遗传病因进行了广泛 的研 究 ， 发现 了包括染色 体异 常在 内的一些相关 的遗传 因素 ＿ ， 有关文献报道 ， 白种 １据 ｊ 在 人群 中大约有 １． ％ 的原发无精 症和 ４６ 的严重寡精 症患者 ３７ ．％ 出现染色体异 常。精子 发生是指生精 上皮 的干细胞 发育到成熟 精子 的一系列 变化 过程 ， 中任何 一个 环节异 常均可导 致男 性 其 不育。无精 子症有 两种 原 因， 一种 是睾 丸生精细胞 萎缩 退化 不 制备方法对 染色体进行核 型分析 ， Ｇ显 带分析计数 ２ ０个 中期分 裂象 ， 分析 ５个细胞核型 ， 对异常核型增加分析倍数 ， 根据《 人类
异常和结构异常） 和染色体异态 （ Ｙ染色体异态 ９号 １号染色体 臂间倒位） ２ １例严重 少精症患者 中检出异 ；３ 常核型 １ （． ３ ， ９例 ８ ２ ％） 涉及染色体异 常和染色体 多态性 。对 ３例 Ｙ染色体结 构异常 者的 Ａ Ｆ Ｂ 区检测 ， Ｚ Ａｃ 。
Ａ Ｆ微 缺 失 ３例 分 别 为 Ａ Ｆ （ Ｙ ３ Ｙ ５ Ｙ ４ Ｓ ２ ４ Ｚ Ｚ ｃ Ｓ ２９ Ｓ ２ ５ Ｓ ２ Ｙ ５ ）＋Ａ Ｆ （ Ｙ ５ ） Ａ Ｆ （ Ｙ ５ ） Ａ Ｆ （ Ｙ ４ Ｚ Ｄ Ｓ １２ ； Ｚ Ｄ 的无水 乙醇 ， 分颠 倒 混匀 ， 液体 移 ５０ 至吸 附柱 ０ 充 将 ０ Ｃ ３中（ Ｂ 吸附柱放人收集管 中） １ ０ ｍｎ离 心 １ｍｎ （ ） ，３００ｒ ｉ ／ ｉ； ３ 倒
去收集管 中液体 ， ５０ 缓 冲液 Ｇ 加 ０ ｌ Ｄ至吸附柱 内，３０ ０ｒｍ ｎ １ ０ ｉ ／ 离心ｌｍ ｎ （ ） 去收集管 中液体 ， ７ ０ 漂洗液 Ｐ 至 吸附 ｉ ；４ 倒 加 ０ Ｗ
、
资料与方法
柱 内，３００ｒｍｎ离心 ３ ；５ 倒去 收集管 中液体 ， ５ ０ ｌ １ ０ ／ ｉ ０Ｓ （ ） 加 ０ 漂洗液 Ｐ 至吸 附柱 内 ，３０ ０ｒｍ ｎ离 ， ｉ； ６ 将 吸 附柱 Ｗ １ ０ ／ ｉ ｆ ３ｍ ｎ （ ） ｌ
移人一个 干 净 的离 心 管 中， 入 ２０ １的洗 脱 缓 冲 液 Ｔ 加 ０ Ｂ，
Ｓ８） Ｙ ６ 。结论
男性少精症无精症原因很多且复杂 ， 而染色体 异常是影 响男性 少精及无精 的重要 因素 ， 因此
对男性不育症患者进行细胞遗传学检查是必要的。
【 关键词 】 无 精子症 ； 少精子症 ； 染色体缺失
不育是人类面 临的一个 日益严 重的健康 问题 。全世 界范 围 内大约有 １％ 一１ ％的夫妇不育 ， 中近一半是男性不育所致 。 ０ ５ 其 遗传 因素导致 的生 精 障 碍是 男性 不 育患 者 常见 的类 型 。近年
【 摘要 】 目的
王鹏程
李丽 海 熊延安
通过对 ５４例无精症 、３ 例少精症患者进行 细胞遗传 学检 查分析 ， 讨无精症少精症 ８ ２１ 探
与染色体异常的关系及分 析研究染 色体异常在男性不育 中的诊断意义。方法 外 周血 染色体常规制 备方法
对染色体进行核型分析 ， 并采用 聚合酶链反应对 ３例 Ｙ染色体结构 异常患者 的 Ａ ＦＢ 区（ｚｏｐｒ ｉ ｆ — Ｚ Ａ 。 ａｏｓｅｍ ａ ａ ｃ ｃ ｔ ，Ｚ ） ｏ Ａ Ｆ 进行检测 。结果 ｒ ５４例无精症 患者 中检 出异 常核型 ８ ８ ７例 （ ４９ ％） 主要涉及染色体异 常 （ 目 １． ０ ， 数
能产 生精 子 ， 一类是 睾丸能产 生精子 ， 由于输 精管 阻塞 ， 另 但 使
精子不能排出体外 。少 精子 症可 由各种原 因造成 ， 如生 殖道 阻 滞（ 精索静脉 曲张 ） 内分 泌功 能紊 乱 、 殖道感染 、 量元素 缺 、 生 微 乏 、 色体异常等 。针对 以上 问题我实验室对 ２ １ 染 ００年 ｌ ２月 ６日 至 ２ １ 年 １ 月 １日来 自云南省各 地州市 医院 的 ５ ４例无 精症 ０１ １ ８ 和 ２１ ３ 例少精症 的患者进行 了染色体核型分析 ， 对其 中 ３例 Ｙ 并 染色体结构异常者 的 Ａ Ｆ 。 Ｚ 区进行检测 ， 以探讨无精 和严重少 精症 患者 的遗传缺 陷与精子发生 障碍 的关系 。
细胞遗传学 国际命名体制》 描述染色体异 常核型 。
Ｙ染色体 Ａ Ｆ微缺失 的 Ｐ Ｒ检 测按 常规 法从 外周 血淋 巴 Ｚ Ｃ
细胞提取 Ｄ Ａ Ｎ 。选 择位 于 Ａ Ｆ内的 １ Ｚ ５个位点为 Ｐ Ｒ扩增检测 Ｃ
项 目， 以 Ｓ Ｙ的扩 增 为 Ｐ Ｒ检 测 的质控 对 照。正 常男 性 的 并 Ｒ Ｃ Ｄ Ａ与每批患 者 Ｄ Ａ同 时进行 以上 各位 点 的单重 或 多 重法 Ｎ Ｎ Ｐ Ｒ扩增 ， Ｃ 作为正常对照。增覆 盖所有 Ａ Ｆ区域 的 ｌ Ｚ ５个 Ｓ Ｓ序 Ｔ
列标签 ， 中 Ａ Ｆ 其 Ｚ 有 ３个 序 列标 签 ， Ｚ 有 ６个 序 列标 签 ， ＡＦ
Ａ Ｆ 有 ４个序列标签 ， Ｚ 。有 ２个序列标签 。 Ｚ ＡＦ 样 品 处 理 （ 本 制 备 区 ）（ｐ ｃ ｅ ｒ ｅｓ ｇ ： １ 标 ｓｅｉ ｎ ｐｏ ｓｉ ） （ ）在 ｍ ｃ ｎ ２ ０Ｉ 抗凝血 中加入 ２ ｌ 白酶 Ｋ， ０ ｌ ｘ ０ 蛋 加入 ２ ０ 的缓 冲液 Ｇ ０ ｌ Ｂ， 充分颠 倒混匀 ，６℃水 浴 １ ｎ 中途上下混匀 几次 ； ２ 加 入 ５ ０ｍｉ， （）
中华 临床 医师 杂 志 （ 电子 版 ）０２年 ６月第 ６卷第 ｌ 期 ２１ ｌ
Ｃ ｉ Ｃｉｉ ａｓ Ｅｅｔ ｎｃＥ ｉｏ ）Ｊｎ ， １ ， ｏ ６，ｏ １ ｈｎＪ ｌ ｃ ｎ （ ｌｃ ｏ ｄｔｎ ， ｅ１２ ２ Ｖ １ Ｎ ．１ ｎｉ ｒｉ ｉ ｕ ０ ．
・
短篇论著 ・
８ ５例 少精 无精 症 患者在 不 育 中的细胞 遗传 学分析 １
来， 对生精障碍的遗传病因进行了广泛 的研 究 ， 发现 了包括染色 体异 常在 内的一些相关 的遗传 因素 ＿ ， 有关文献报道 ， 白种 １据 ｊ 在 人群 中大约有 １． ％ 的原发无精 症和 ４６ 的严重寡精 症患者 ３７ ．％ 出现染色体异 常。精子 发生是指生精 上皮 的干细胞 发育到成熟 精子 的一系列 变化 过程 ， 中任何 一个 环节异 常均可导 致男 性 其 不育。无精 子症有 两种 原 因， 一种 是睾 丸生精细胞 萎缩 退化 不 制备方法对 染色体进行核 型分析 ， Ｇ显 带分析计数 ２ ０个 中期分 裂象 ， 分析 ５个细胞核型 ， 对异常核型增加分析倍数 ， 根据《 人类
异常和结构异常） 和染色体异态 （ Ｙ染色体异态 ９号 １号染色体 臂间倒位） ２ １例严重 少精症患者 中检出异 ；３ 常核型 １ （． ３ ， ９例 ８ ２ ％） 涉及染色体异 常和染色体 多态性 。对 ３例 Ｙ染色体结 构异常 者的 Ａ Ｆ Ｂ 区检测 ， Ｚ Ａｃ 。
Ａ Ｆ微 缺 失 ３例 分 别 为 Ａ Ｆ （ Ｙ ３ Ｙ ５ Ｙ ４ Ｓ ２ ４ Ｚ Ｚ ｃ Ｓ ２９ Ｓ ２ ５ Ｓ ２ Ｙ ５ ）＋Ａ Ｆ （ Ｙ ５ ） Ａ Ｆ （ Ｙ ５ ） Ａ Ｆ （ Ｙ ４ Ｚ Ｄ Ｓ １２ ； Ｚ Ｄ 的无水 乙醇 ， 分颠 倒 混匀 ， 液体 移 ５０ 至吸 附柱 ０ 充 将 ０ Ｃ ３中（ Ｂ 吸附柱放人收集管 中） １ ０ ｍｎ离 心 １ｍｎ （ ） ，３００ｒ ｉ ／ ｉ； ３ 倒
去收集管 中液体 ， ５０ 缓 冲液 Ｇ 加 ０ ｌ Ｄ至吸附柱 内，３０ ０ｒｍ ｎ １ ０ ｉ ／ 离心ｌｍ ｎ （ ） 去收集管 中液体 ， ７ ０ 漂洗液 Ｐ 至 吸附 ｉ ；４ 倒 加 ０ Ｗ
、
资料与方法
柱 内，３００ｒｍｎ离心 ３ ；５ 倒去 收集管 中液体 ， ５ ０ ｌ １ ０ ／ ｉ ０Ｓ （ ） 加 ０ 漂洗液 Ｐ 至吸 附柱 内 ，３０ ０ｒｍ ｎ离 ， ｉ； ６ 将 吸 附柱 Ｗ １ ０ ／ ｉ ｆ ３ｍ ｎ （ ） ｌ
移人一个 干 净 的离 心 管 中， 入 ２０ １的洗 脱 缓 冲 液 Ｔ 加 ０ Ｂ，
Ｓ８） Ｙ ６ 。结论
男性少精症无精症原因很多且复杂 ， 而染色体 异常是影 响男性 少精及无精 的重要 因素 ， 因此
对男性不育症患者进行细胞遗传学检查是必要的。
【 关键词 】 无 精子症 ； 少精子症 ； 染色体缺失
不育是人类面 临的一个 日益严 重的健康 问题 。全世 界范 围 内大约有 １％ 一１ ％的夫妇不育 ， 中近一半是男性不育所致 。 ０ ５ 其 遗传 因素导致 的生 精 障 碍是 男性 不 育患 者 常见 的类 型 。近年