肝糖原地提取、鉴定与定量-第七实验室
肝糖原的提取和鉴定
肝糖原的提取和鉴定一、实验目的1、学会和掌握肝糖原提取和鉴定的原理和方法。
2、正确掌握使用离心机的方法步骤。
二、实验原理三、实验步骤（一）、肝糖原提取1、用脱臼法处死白鼠，立即取出肝脏，迅速以滤纸吸取附着的血液。
称取肝组织约2g，置研钵中，加入10%三氯乙酸2ml，用剪刀把肝组织剪碎，再加石英砂少许，研磨5min。
2、再加5%三氯乙酸4ml，继续研磨1min，至肝脏组织已充分磨成糜状为止，转入离心管，然后以2000r/min离心10min。
3、小心将离心管上清液转入另一个离心管中，加入同体积的95%乙醇，混匀后，此时糖原成絮状沉淀析出。
4、溶液以2000r/min离心10min。
弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上1~2min。
5、在沉淀内加入蒸馏水2ml，用细玻璃棒搅拌沉淀至溶解，即成糖原溶液。
（二）、鉴定1、取2支小试管A、B，一支A加糖原溶液10滴，另一支B加蒸馏水10滴，然后在两管中各加碘-碘化钾溶液1滴，混匀，比较两管溶液颜色有何不同。
2、再取2支小试管，将剩余的糖原溶液平分倒入两试管，试管甲加浓盐酸3滴，试管乙加蒸馏水3滴，将两管在沸水浴中加热10min以上。
取出冷却，试管甲中逐滴加入20%NaOH溶液，并且PH试纸检验，直至溶液成中性。
试管乙中加入同等滴数的蒸馏水。
3、向甲、乙两试管各加入班氏试剂2ml，再置沸水浴中加热5min，取出冷却。
观察有无沉淀生成。
注意事项：1、实验小白鼠在实验前必须饱食。
2、脱臼法处死小白鼠：手提着小白鼠将其小白鼠尾巴将其从笼子里取出，使其四脚着地，另一支手按着小白鼠耳后，尾巴向外拉，使其脊柱断节，背部脊髓断裂，致使四肢瘫痪。
3、肝脏离体后，所得肝脏必须迅速以三氯乙酸处理。
4、研磨应充分，这是实验成败的关键。
5、离心时与另一组同学的离心管平衡，对称放入离心机。
6、鉴定的第（2）步，试管甲中溶液必须调至中性或偏碱性。
四、实验结果试管A 试管B棕红色黄色试管甲试管乙砖红色沉淀无沉淀分析：1、实验小白鼠在实验前必须饱食，因为空腹时，血糖含量降低，肝糖原分解来提高血糖含量，肝糖原含量易于减少或耗尽。
肝糖原的提取鉴定
肝糖原的提取鉴定
肝糖原是一种由多个葡萄糖分子组成的多聚物，主要储存在肝脏
细胞中，是机体维持血糖平衡的重要物质之一。
以下是肝糖原的提取
和鉴定方法：
提取肝糖原方法：
1. 取新鲜肝脏切成细小的碎片，放入0.5 mol/L HClO4（冰醋酸也可）中。
2. 在4°C下振荡24小时，然后离心提取上清液。
3. 上清液的pH值调节至中性，加入4倍体积的85%乙醇，混合
均匀并放置于-20°C冷藏过夜。
4. 离心沉淀，用冷酒精洗涤沉淀，干燥后即为纯净的肝糖原。
鉴定肝糖原方法：
1. 在一定pH条件下用碘化钾溶液反应：将一定量的肝糖原溶液
和一定量的碘化钾溶液混合静置片刻，待溶液变为淡黄色时即可鉴定。
如果混合产生的沉淀呈现棕色，则肝糖原的存在得到证明。
2. 用酚-硫酸法鉴定：将一定量的肝糖原加入稀硫酸中，加入冷
的浓酚溶液，混合均匀后加入冷水，混合均匀后加入棕红色的浓硫酸，最后出现紫色圈即可证明肝糖原存在。
肝糖原的提取、鉴定与定量-第七实验室
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级:组别:生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称Folin—酚试剂法测定蛋白质含量实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的1、学习并掌握肝糖原提取和鉴定原理和方法；2、学习并掌握蒽酮比色测定糖原含量的原理、注意事项和操作方法;3、学习并掌握刻度吸管和微量加样枪的使用方式；4、正确掌握使用离心机的方法步骤；5、熟练运用溶液混匀的各种方法；6、正确掌握溶液转移的操作；7、正确掌握使用分光光度计的方法步骤二、实验原理实验1肝糖原的提取与鉴定糖原是生物的主要储能物质之一,主要储存与肝细胞中，采用研磨匀浆等方法可以使肝细胞破碎。
肝细胞破碎，细胞内容物流出.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶并且使蛋白质沉淀，糖原则能够稳定地保存在上清液中，从而达到分离糖原与蛋白质等其他成分的目的。
糖原不溶于乙醇但可溶于热水，故可以先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中,依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
此外，糖原还可以被酸水解成葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可以判定肝组织中糖原的存在。
糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min后会出现砖红色沉淀。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(OH)2↓2Cu(OH）2 + C6H12O6 = 2CuOH +氧化型葡萄糖+ H2O2CuOH = H20 + Cu2O↓ （红色）Cu（OH)2 ==== H2O + CuO↓ （黑色）实验2肝糖原定量测定糖原在浓碱溶液中非常稳定，故可将肝组织先置于浓碱中加热,以破坏其他成分，保留肝糖原。
[精华版]实验五、肝糖原的提取与鉴定
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性偏碱性 斑氏试剂2ml 沸水浴5min 冷却 观察现象。
三.实验结果 四.分析讨论
谢谢观看
离心管中） 混匀、静置10min 弃去上清夜、留沉淀 加蒸馏水1ml
学习和掌握提取肝糖原的方法；
搅拌溶解而得
加入等体积95%乙醇
离心
粗阿袖镣叙镶韭嗅婚费戴荒傻巨之迪慷嫡争剿茅嫡兜插灭奇妮哟狠抠疥泥实验五、肝糖原的提取与鉴定实验五、肝糖原的提取与鉴定
取试管2支
各加1滴I2液、混匀 观察现象
弃去上清夜、留沉淀 搅拌溶解而得 本剩实余验 肝通糖过原对液动内物+浓肝H脏C研L3磨滴，在三沸氯水醋浴酸10作m用in下冷一却使其加中入的1蛋0%加白N质蒸aO被馏H沉3水-淀4滴，1m至二中l使糖原水解酶失活，从而过滤得到糖原。
取试管2支
各加1滴I2液、混匀 观察现象
赡右畴材撮顶移亿纪洋咖埠吊炊泛欢敦颤裔纵谷稠芭卷究部颈谱价砍祟佛实验五、肝糖原的提取与鉴定实验五、肝糖原的提取与鉴定
糖原溶液待用。
二、鉴定：ห้องสมุดไป่ตู้
1.取试管2支
加入肝糖原溶液10滴 加蒸馏水10滴
各加1滴I2液、混匀 观察现象
2.剩余肝糖原液内+浓HCL3滴 沸水浴10min 冷却 加入10%NaOH3-4滴至中
学习和掌握肝糖的一些特殊化学性质和鉴定方法。
醋酸2ml 过滤（滤液收集在带刻度的 学本习实和 验掌通握过肝对糖动的物一肝些脏特研殊磨化，学在性三研质氯磨和醋鉴酸至定作肉方用糜法下。一状使其中的蛋白质被沉淀，二使糖原水解酶失活，从而过滤得到糖原。
实验六、肝糖原的提
取与鉴定
肝糖原理的糖在体内的重要储存形式之一，是体内糖的重要来源之一，糖原 是一高分子化合物。
079-肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告
生物化学实验报告姓名：符含敏学号： 3140090079专业年级： 2014级预防医学组别：第三实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期2015-1-8 实验地点第三实验室合作者杨锐指导老师朱利娜评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的：提取鸡肝中的肝糖原进行肝糖原的定性以及定量实验二、实验原理：1.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，使糖原能很好地保存在上清液中，95%的乙醇能将滤液中的糖原沉淀。
2.糖原溶液遇碘呈红棕色，糖原水解成的葡萄糖与班氏试剂水浴加热可变黑色。
3.糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸可使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物，它再与蒽酮试剂脱水缩合生成蓝色的化合物。
4.糖含量在10-100μg，溶液颜色深浅与可溶性糖含量成正比。
三．实验材料：1.鸡肝乙醇 5%三氯醋酸 50%NaOH 12mol/LHCl 碘试剂班氏试剂普通离心机室温至100℃恒温箱可见光分光光度计天平剪刀镊子研钵试管架10ml离心管刻度吸量管白瓷反应板2. 30%KOH 标准葡萄糖溶液 90%浓硫酸蒽酮显色剂四．实验步骤：1.肝糖原的提取与鉴定：鸡肝约1.5 g，剪碎＋5%CClCOOH 1 ml3研磨至乳状＋5%CClCOOH 3 ml3研磨成肝匀浆3分钟（4000 r / min）3 ml）＋3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟5分钟（4000 r / min）＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀糖原溶液1ml＋浓HCl 5滴加碘试剂沸水浴糖原溶液2滴滴呈色对比＋班氏试剂4滴沸水浴2分钟，观察变化2.肝糖原的定量测定：鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml （用吸量管)沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液取3支试管，按下表操作:试剂（ml）空白管标准管样品管标准葡萄糖溶液— 1.0 —糖原提取液—— 1.00.2%蒽酮溶液2.5 2.5 2.5（用吸量管）混匀，沸水浴10分钟，冷却c。
肝糖原的提取、鉴定与定量
生物化学实验报告姓名：汪煜灵学号： 3130010071 专业年级： 2013级临床医学组别：第2实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定、分离实验日期2014-12-25 实验地点第2实验室合作者陈海玲指导老师朱利娜评分教师签名批改日期一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4、熟练运用溶液混匀的各种方法。
5、正确掌握溶液转移的操作。
6、正确操作使用分光光度计。
二、实验原理●肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。
●糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(OH)22Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O2CuOH = H20 + Cu2O (红色)Cu(OH)2 ==== H2O + CuO (黑色)●肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处有最大吸收。
糖含量在10—100mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量的标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。
肝糖原测定
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1.掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3.掌握吸量管和微量移液器的使用方法。
4.掌握各种溶液混匀及转移的方法。
5.正确掌握使用离心机和分光光度计的方法步骤。
二、实验原理1.肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。
2.糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4+ Cu(OH)2↓2Cu(OH)2 + C6H12O6= 2CuOH +氧化型葡萄糖+H2O2CuOH = Cu2O↓(红色) + H2OCu(OH)2⍙ CuO↓ (黑色) + H2O3.肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处有最大吸收。
糖含量在10—100mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量的标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。
三、实验材料1.样品鸡肝2.试剂95%乙醇、0.31mol/L(5%)三氯醋酸溶液、0.15mol/L NaCl溶液、浓HCl、12.5mol/L(50%)NaOH、碘试剂、班氏试剂、30%KOH溶液、标准葡萄糖液（50mg/L）蒽酮显色剂3.仪器和器材1、普通离心机，室温至100℃恒温水浴箱，722型分光光度计，天平2、剪刀、镊子、研钵3、试管架，离心管，试管4、刻度吸量管（2ml ,5ml），1000μl微量可调取液器5、100ml容量瓶6、白瓷反应板四、实验方法（一）实验流程1.肝糖原提取、鉴定实验流程：鸡肝约1.50 g，剪碎＋5%CCl3COOH 1 ml研磨至乳状＋5%CCl3COOH 3 ml研磨成肝匀浆，离心3分钟（4000 r / min）上清液（取2 ml）＋2ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟分钟（4000 r / min）＋蒸馏水1 ml沸水浴2糖原溶液1ml＋浓HCl 250μl加碘试剂2沸水浴糖原溶液2滴250μl 呈色对比糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化2.肝糖原定量实验流程：鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml （用吸量管）沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液糖原的测定（二）操作步骤1.肝糖原提取、鉴定（见表1）表1肝糖原的提取与鉴定实验步骤2.肝糖原定量测定（见表2）表2 肝糖原定量测定实验步骤（三）注意事项1.肝糖原提取、鉴定（1）肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的95％乙醇后，务必注意混匀。
肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。
4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5．正确掌握溶液转移的操作。
6．正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中, 依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的存在。
2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)g范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先臵于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。
三、材料与方法：以流程图示意1、材料(1)样品:鸡肝(2)试剂:95%乙醇、5%(W/V)三氯乙酸、浓盐酸、12.5mol/L(50%)NaOH溶液、碘试剂、班氏试剂、5.35mol/L(30%)KOH溶液、标准葡萄糖液(50mg/L)、蒽酮显色剂(3)仪器和器材:普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100mm*15mm试管、刻度吸量管(2ml、5ml)、1000μl微量可调取液器、100ml容量瓶、白瓷反应板2、操作方法（1）肝糖原提取与鉴定鸡肝约1.5 g，剪碎COOH 1 ml＋5%CCl3研磨至乳状COOH 3 ml＋5%CCl3研磨成肝匀浆全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min）沉淀（弃去）上清（取约3 ml）＋3ml （等量）95%乙醇，混匀，静置10分钟离心5分钟（4000 r / min）上清（弃去）沉淀＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀白瓷板孔穴中糖原溶液1ml＋浓HCl 250μl加碘试剂2滴加碘试剂2滴沸水浴15分钟，冷却糖原溶液2滴呈色对比糖原水解液2滴糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化（2）肝糖原定量实验鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液糖原的测定取3支试管，按下表操作。
实验五、肝糖原的提取与鉴定
通过动物实验等方法检测肝糖原的生物活性。例如，给实验动物注射一定量的肝糖原后，观察其血糖水 平的变化情况，以判断肝糖原的生物活性。
04
实验结果与数据分析
实验结果展示
肝糖பைடு நூலகம்提取量
通过实验，成功从肝脏组织中提取出一定 量的肝糖原，提取量符合预期。
肝糖原纯度
经过纯化步骤，所得肝糖原的纯度较高， 杂质含量较低。
生物学活性验证
将提取的肝糖原与标准品进行生物学活性比较，如血糖调节活 性等。结果显示，提取的肝糖原具有良好的生物学活性，与标 准品相似。
05
实验讨论与结论
实验结果讨论
01
肝糖原提取效率
本次实验中，我们采用了XX方法提取肝糖原，通过对比不同提取条件
下的得率，发现XX条件下提取效率最高，为后续实验提供了可靠的基
实验原理
肝糖原是一种多糖类物质 ，主要存在于动物肝脏和 肌肉中，是动物体内的重 要能量来源之一。
肝糖原在肝脏中合成并储 存，当机体需要能量时， 肝糖原可分解为葡萄糖并 释放到血液中，以维持血 糖水平的稳定。
本实验通过提取肝脏中的 肝糖原，并利用其理化性 质进行鉴定，以深入了解 其在动物体内的功能和作 用。
肝糖原的鉴定
物理性质鉴定
通过观察肝糖原的颜色、气味、溶解性等物理性质进行初步鉴定。肝糖原应为白色或类白色粉末，无臭、无味，易溶 于水。
化学性质鉴定
利用肝糖原的还原性进行化学鉴定。可采用斐林试剂等还原糖试剂与肝糖原反应，观察颜色变化判断其还原性。同时 ，可利用肝糖原与碘的反应呈现蓝紫色等特性进行鉴定。
鉴定试剂
用于鉴定提取的肝糖原，如碘液等。
仪器与设备
匀浆器
用于将肝脏样本匀浆化，以便于提取肝糖 原。
-肝糖原的提取、鉴定与定量
生物化学实验报告姓名：范嘉俊学号： 3140070081专业年级： 2014级中西医临床五年制组别：第四实验室生物化学与分子生物学实验教学中心1.实验原理（1）肝糖原提取与鉴定①提取：1.糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，释放出糖原。
2. 5%三氯醋酸溶液能使用糖原与蛋白质分离，糖原保存于上清液，而蛋白质沉淀。
3.糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
②鉴定：糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖。
利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。
（2）肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糖醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
（1）实验样品：鸡肝。
（2）主要试剂：肝糖原的提取与鉴定：95%乙醇，0.31mol/L(5%)三氯醋酸溶液，0.15mol/LNaCl溶液，浓盐酸，NaOH溶液，碘试剂。
肝糖原定量测定：30%KOH溶液，0.5mg/ml的葡萄糖溶液，蒸馏水，蒽酮显色剂。
（3）主要仪器与器材：可见光分光光度计，恒温水浴箱，试管架，三支支试管，加样枪，加样枪架，普通离心机，研钵，刻度吸量管，白瓷反应器，100ml容量瓶。
3.实验步骤（1）实验流程①肝糖原的提取与鉴定注意事项：①在提取肝糖原中，向上清液中加入乙醇后，要充分混匀（可以用玻璃棒搅拌）。
②糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基的多少有关。
肝糖原分支中葡萄糖残基在20个以下，吸附碘后呈现红棕色。
肝糖原的实验报告
一、实验目的1. 学习肝糖原的提取方法。
2. 掌握肝糖原的鉴定技术。
3. 了解肝糖原在生物体内的重要作用。
二、实验原理肝糖原是动物体内的一种重要储能物质，主要储存于肝脏中。
当血糖水平下降时，肝糖原可以被分解为葡萄糖，以维持血糖的稳定。
本实验通过提取肝糖原，并对其进行鉴定，来了解肝糖原在生物体内的代谢过程。
三、实验材料与仪器材料：1. 小鼠肝脏2. 三氯醋酸3. 乙醇4. 碘液5. 水浴锅6. 移液器7. 离心机8. 显微镜仪器：1. 电子天平2. 研钵3. 研钵杵4. 烧杯5. 烧瓶6. 漏斗7. 滤纸四、实验步骤1. 肝糖原提取- 称取新鲜小鼠肝脏约0.5g，用剪刀剪碎，置于研钵中。
- 加入少量三氯醋酸，研磨至肝组织完全破碎。
- 将研磨物转移至烧杯中，加入适量的水，用玻璃棒搅拌。
- 将混合物过滤，收集滤液。
- 将滤液置于水浴锅中加热，使蛋白质变性沉淀。
- 取上清液，加入适量的乙醇，静置过夜。
- 次日，用滤纸过滤，收集滤液，即为肝糖原粗制品。
2. 肝糖原鉴定- 将肝糖原粗制品溶解于适量的水中，配制成一定浓度的溶液。
- 取少量溶液，加入碘液，观察颜色变化。
- 将肝糖原溶液滴在载玻片上，用显微镜观察其形态。
五、实验结果与分析1. 肝糖原提取- 通过研磨、过滤、加热和沉淀等步骤，成功提取了肝糖原。
2. 肝糖原鉴定- 碘液与肝糖原反应，溶液呈现蓝色，证明肝糖原存在。
- 显微镜下观察，肝糖原呈颗粒状，大小不一。
六、实验讨论1. 本实验成功提取了肝糖原，并对其进行了鉴定，证明了肝糖原在生物体内的重要作用。
2. 在肝糖原提取过程中，三氯醋酸起到了破坏肝组织中的酶和蛋白质的作用，使肝糖原得以保留。
3. 碘液与肝糖原反应，是肝糖原鉴定的常用方法，操作简单，结果明显。
七、实验总结本实验通过肝糖原的提取与鉴定，使我们了解了肝糖原在生物体内的代谢过程和重要作用。
在实验过程中，我们学会了肝糖原的提取方法，掌握了肝糖原的鉴定技术。
-肝糖原的提取、鉴定与定量
生物化学实验报告姓名：范嘉俊学号： **********专业年级： 2014级中西医临床五年制组别：第四实验室生物化学与分子生物学实验教学中心1.实验原理（1）肝糖原提取与鉴定①提取：1.糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，释放出糖原。
2. 5%三氯醋酸溶液能使用糖原与蛋白质分离，糖原保存于上清液，而蛋白质沉淀。
3.糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
②鉴定：糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖。
利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。
（2）肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糖醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
（1）实验样品：鸡肝。
（2）主要试剂：肝糖原的提取与鉴定：95%乙醇，0.31mol/L(5%)三氯醋酸溶液，0.15mol/LNaCl溶液，浓盐酸，NaOH溶液，碘试剂。
肝糖原定量测定：30%KOH溶液，0.5mg/ml的葡萄糖溶液，蒸馏水，蒽酮显色剂。
（3）主要仪器与器材：可见光分光光度计，恒温水浴箱，试管架，三支支试管，加样枪，加样枪架，普通离心机，研钵，刻度吸量管，白瓷反应器，100ml容量瓶。
3.实验步骤（1）实验流程①肝糖原的提取与鉴定注意事项：①在提取肝糖原中，向上清液中加入乙醇后，要充分混匀（可以用玻璃棒搅拌）。
②糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基的多少有关。
肝糖原分支中葡萄糖残基在20个以下，吸附碘后呈现红棕色。
生化实验报告肝糖原测定
生化实验报告肝糖原测定生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：*** 实验教学中心第一部分一、实验目的掌握程度实验主要目的1.掌握肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法2.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器3.熟练运用溶液混匀的各种方法（试情况而定，采用合适的混匀方法）4.正确掌握溶液转移的操作5、正确操作使用分光光度记二、实验原理掌握程度实验内容及原理实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验时间*** 实验地点*** 指导老师赵***组员*** 评分批改日期肝糖原的提取与鉴定糖原储存在细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶乙醇而溶于热水，故先用95%的乙醇将滤液中的糖原沉淀，再溶于热水中。
糖原水溶液呈现乳样光泽，遇碘变红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判断肝组织中糖原的存在。
CuSO 4 +2NaOH=Na 2 SO 4 +Cu(OH)2 2Cu(OH)2 +C 6 H 12 O 6 =2 CuOH+氧化型葡萄糖+H 2 O 2 CuOH= Cu 2 O(红色)+ H 2 O Cu(OH)2 = CuO（黑色）+ H 2 O肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在10~100ug,溶液颜色的深浅可与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，可得到样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。
生化实验报告肝糖原
一、实验目的1. 理解肝糖原的生理功能和代谢途径。
2. 掌握肝糖原的提取方法。
3. 学习使用比色法对肝糖原进行定量分析。
4. 通过实验验证肝糖原在生物体内的作用。
二、实验原理肝糖原是动物体内的一种多糖，由葡萄糖分子通过α-1,4-糖苷键和α-1,6-糖苷键连接而成。
它是生物体内重要的能量储存形式之一，主要存在于肝脏和肌肉组织中。
在血糖浓度降低时，肝糖原可以被分解为葡萄糖，以维持血糖稳定。
本实验采用酸水解法提取肝糖原，通过比色法测定肝糖原的浓度。
比色法的基本原理是利用肝糖原在特定条件下与硫酸铜反应生成蓝色复合物，根据蓝色复合物的颜色深浅与肝糖原浓度成正比，从而计算出肝糖原的浓度。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 新鲜肝组织- 95%乙醇- 2%醋酸溶液- 1%硫酸铜溶液- 标准葡萄糖溶液- 碘液- 氢氧化钠溶液- 水浴锅- 离心机- 移液器- 分光光度计- 烧杯- 试管- 滴定管2. 实验试剂：- 磷酸氢二钠- 磷酸二氢钠- 硫酸铜- 氢氧化钠- 碘液- 标准葡萄糖溶液四、实验步骤1. 肝糖原提取：- 将新鲜肝组织剪成小块，用95%乙醇浸泡10分钟，以去除脂肪。
- 将肝组织放入烧杯中，加入2%醋酸溶液，用玻璃棒充分研磨。
- 将研磨好的肝组织悬液离心，取上清液。
- 将上清液加入硫酸铜溶液，煮沸5分钟，以去除蛋白质。
- 将煮沸后的溶液冷却，加入氢氧化钠溶液调节pH至4.6。
- 将溶液离心，取沉淀物。
2. 肝糖原鉴定：- 将沉淀物加入碘液，观察颜色变化，若呈现蓝色，则证明肝糖原存在。
3. 肝糖原定量：- 配制一系列标准葡萄糖溶液。
- 将标准葡萄糖溶液和肝糖原提取液分别加入硫酸铜溶液，煮沸5分钟。
- 将溶液冷却，加入氢氧化钠溶液调节pH至4.6。
- 使用分光光度计测定溶液的吸光度，以标准葡萄糖溶液为对照，绘制标准曲线。
- 根据肝糖原提取液的吸光度，从标准曲线上查得肝糖原的浓度。
五、实验结果与分析1. 肝糖原提取：- 通过实验，成功提取了肝糖原。
南方医科大学-肝糖原提取-2015级临床医学二-第3实验室
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：级第二临床医学院临床医学组别：第7实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定、分离实验日期2016-12-29 实验地点第7实验室指导老师陆远芳评分教师签名批改日期一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法并了解相关注意事项。
2、掌握肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和操作方法以及相关注意事项3、掌握正确使用可调微量取液器与刻度吸管的方法。
4、正确行使溶液转移作业。
5、掌握分光光度计的正确用法。
二、实验原理1、肝糖原提取储存于肝细胞内的糖原在对肝细胞采用淹没匀浆等方法破碎细胞并在低浓度的三氯醋酸环境中让肝组织中的酶被破坏、蛋白质被沉淀析出后，能稳定地保存在上清液中。
以此让糖原与其他组分分离。
糖原溶于热水而不溶于乙醇，故先用95%乙醇沉淀绿叶中的糖原，再溶于热水中。
2、糖原的鉴定糖原水溶液为乳样光泽，遇碘变红棕色。
糖原葡萄糖长链分子间引力吸附碘分子后呈现出的颜色。
糖原尚可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。
反应式如下：CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(OH)22Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O2CuOH = H20 + Cu2O (红色)Cu(OH)2 ==== H2O + CuO (黑色)3、肝糖原定量浓酸中，糖原水解成葡萄糖，浓硫酸使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物，即5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处呈现最大吸收峰。
糖含量于10—100mg范围内时，溶液颜色的深浅正比于可溶性糖含量。
利用此反应下的实验现象与同样处置后的已知糖含量的葡萄糖标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中稳定，故在显色之前，肝组织宜先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。
生化实验报告-肝糖原测定
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：***实验教学中心第一部分一、实验目的二、实验原理一、材料与方法1、实验材料2、实验流程肝糖原的提取与鉴定：鸡肝约1.5 g，剪碎＋5%CCl3COOH 1 ml研磨至乳状＋5%CCl3COOH 3 ml研磨成肝匀浆3分钟（4000 r / min）3 ml）＋3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟4000 r / min）＋蒸镏水1 ml沸水浴2糖原溶液1ml＋浓HCl 5滴加碘试剂2沸水浴糖原溶液2滴滴呈色对比糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化肝糖原定量测定鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液取3支试管，按下表操作。
试剂（ml）空白管标准管样品管蒸馏水 1.0 ——标准葡萄糖溶液— 1.0 —糖原提取液—— 1.00.2%蒽酮溶液 2.5 2.5 2.5混匀，沸水浴10分钟，冷却c。
在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。
4、注意事项第二部分一、实验结果与处理1、实验现象2、实验数据记录在分光光度计620nm波长处，测定各管溶液的分光度（A），记录结果如下：各管吸光值测定次数空白标准样品1 0.0000.3500.0102 0.0000.3510.0113 0.0000.3530.0133、实验结果肝糖原的提取与鉴定：显色反应中，碘液由黄色变为红棕色（不明显），说明所提供材料中含糖原成分，但含量低；加入班氏试剂的溶液无明显的颜色变化；肝糖原定量测定（1）鸡肝所取质量：0.15g（2）各管吸光值各管吸光值测定次数 空白 标准 样品1 0.000 0.350 0.0102 0.000 0.351 0.0113 0.000 0.353 0.013 平均值 0.000 0.351 0.011 标准管吸光度平均值0.351；样品管平均吸光度 0.011；由公式计算：11.1*1000100*g 100*05.0*100/g ）肝组织重（标准样品肝组织）肝糖原（A A g 注：1.11为此法测得的葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，因为用蒽酮试剂显色时，110ug 糖原与100ug 葡萄糖显色程度相当。
肝糖原的提取、鉴定与定量-实验报告-第四实验室
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级： 2015级护理本科组别：第四实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期2016-12-20 实验地点第四实验室合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
2、了解离心管和分光光度计使用的原理并掌握操作步骤。
3、熟悉吸量管、可调式微量移液器的操作步骤。
4、熟悉溶液的转移操作；熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5、了解呈色反应。
二、实验原理(一) 肝糖原的提取与鉴定1.糖原的分离采用研磨匀浆使细胞破碎，用低浓度的三氯醋酸使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶从而使其沉淀，而糖原仍稳定保持在上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故用95%乙醇溶液将糖原沉淀，再用热水溶解。
2.糖原的鉴定(1)糖原螺旋链吸附碘分子：糖原水溶液呈乳样光泽，其长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子，呈现出红棕色。
(2)呈色反应——利用葡萄糖的还原性：①CuSO4+2NaOH = NaSO4 + Cu(OH)2↓②2Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖+ H2O③2CuOH = Cu2O↓(红色) + H2O④Cu(OH)2 = C u O ↓（黑色）+ H2O（二）肝糖原定量测定1.糠醛衍生物的生成及其性质糖原的水解产物葡萄糖可以在浓硫酸的作用下生成糠醛衍生物-5-羟甲基呋喃甲醛，其可以和蒽酮生成蓝色的化合物，该物质在620nm处有最大吸收。
2.标准对照法进行定量糖含量在10μg～100μg，溶液颜色的深浅与可溶性糖的含量成正比，利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
三、材料与方法：（一）肝糖原的提取与鉴定1.实验材料：（1）样品：鸡肝（2）试剂：5%三氯乙酸溶液、95％乙醇溶液、蒸馏水、浓盐酸、50%氢氧（3）仪器和器材：剪刀、天平、镊子、圆纸片、研钵、试管、离心机、刻2.实验流程3.实验步骤（二）肝糖原定量测定1.实验材料：（1）样品：鸡肝（2）试剂：30%氢氧化钾溶液、蒸馏水、标准葡萄糖溶液、蒽酮显色剂（3）仪器和器材：剪刀、天平、镊子、圆纸片、试管、刻度吸量管（移液2.实验流程3.实验步骤见下表混匀，沸水浴10分钟，冷却c。
肝糖原提取、鉴定与定量实验流程
肝糖原提取、鉴定实验流程吸取1ml量溶液时使用可调微量移液器，吸取1ml以上量溶液时使用刻度吸量管。
鸡肝约1.5 g，剪碎
＋5%CCl3COOH 1 ml
研磨至乳状
＋5%CCl3COOH 3 ml
研磨成肝匀浆
3分钟（4000 r / min）
上清（取约3 ml）
3ml （等量）95%乙醇，混匀，静置10分钟
分钟（4000 r / min）
＋蒸镏水1 ml
沸水浴2
糖原溶液1ml
＋浓HCl 5滴250ul
加碘试剂2沸水浴
糖原溶液2滴滴250ul 呈色对比糖原水解液
＋班氏试剂4滴
混匀
沸水浴2分钟，观察变化
肝糖原定量实验流程
鸡肝0.15 g
＋30%KOH 1.5ml （用吸量管）
沸水浴15分钟
冷却，全部转入100 ml容量瓶中
加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液
取3支试管，按下表操作。
试剂（ml）空白管标准管样品管
蒸馏水 1.0 ——
标准葡萄糖溶液— 1.0 —
糖原提取液—— 1.0
0.2%蒽酮溶液
2.5 2.5 2.5
（用吸量管）
混匀，沸水浴10分钟，冷却至室温。
在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。
饱食鸡肝的肝糖原含量为：2～3g/100g肝组织。
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样品：0.15g的鸡肝
试剂：30%KOH溶液、蒸馏水、标准葡萄糖溶液和0.2%蒽酮溶液显色剂
仪器和器材：室温-100℃恒温水浴箱、比色皿、100ml容量瓶、分光光度计、试管、剪刀、镊子、刻度吸管和微量加样枪
3、实验步骤与方法
（1）肝糖原的提取与鉴定：
图一：肝糖原的提取与鉴定实验流程
③糖原水解液与班氏试剂混合后溶液变深蓝。沸水浴加热2min后，产生浑浊，砖红色沉淀不明显，说明样品鸡肝中糖原含量少。
图五：糖原水解液与班氏试剂混合沸水浴后
实验二：肝糖原的定量测定
空白管、标准管和样品管混匀呈现如下颜色反应
图六：加入蒽酮溶液并且水浴过后的空白管、标准管、样品管（由左至右）对比
2、吸光度数据记录：
620nm波长吸收度值记录
测定次数
各管吸光度值A620
空白管
标准管
样品管
1
0
0.672
0.099
2
0
0.671
0.101
3
0
0.672
0.102
各管平均值
0
0.672
0.101
表二：620nm波长吸收度值记录表
3、结果计算：
根据公式：肝糖原（g/100g肝组织）=
计算结果得样品肝糖原（g/100g肝组织）=0.56g/100g肝组织
故本次实验结论为：该鸡肝样品含有肝糖原，且肝糖原含量为0.56g/100g肝糖原含量为：2～3g/100g肝组织，而本次实验测得肝糖原=0.56g/100g肝组织，即本次实验测得的肝糖原含量偏低。
5、讨论总结
（1）与碘试剂反应时：加入糖原的孔穴并没有出现预期的明显红棕色。究其原因，在取糖原沉淀时，沉淀很少，糖原含量也很少。而又因为碘试剂本身是黄色的，本来现象就不是很明显，这样一来，几乎看不到反应会产生的红棕色了，说明糖原含量极少。
实验1 肝糖原的提取与鉴定
糖原是生物的主要储能物质之一，主要储存与肝细胞中，采用研磨匀浆等方法可以使肝细胞破碎。肝细胞破碎，细胞内容物流出。低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶并且使蛋白质沉淀，糖原则能够稳定地保存在上清液中，从而达到分离糖原与蛋白质等其他成分的目的。糖原不溶于乙醇但可溶于热水，故可以先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。此外，糖原还可以被酸水解成葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可以判定肝组织中糖原的存在。糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min后会出现砖红色沉淀。
四、结果与讨论： 结果：实验数据、现象、图谱； 讨论：以结果为基础的逻辑推论，并得出结论。
1、实验现象
实验一：肝糖原的提取与鉴定
①所获糖原溶液如下图：
图三：所获糖原溶液
所获糖原溶液呈乳样光泽。
②将糖原溶液滴到碘试剂中可以勉强看到溶液出现浑浊，砖红色沉淀不明显，说明样品鸡肝中糖原含量少。
图四：糖原溶液与碘试剂反应
（4）由资料可知饱食鸡肝糖原含量宜在2～3g/100g肝组织，而本次实验测得肝糖原为0.56g/100g肝组织，偏低。究其原因，实验中操作没有失误，与其他小组和其他实验室对比，发现各小组结果均偏低，可以推测，实验现象不明显原因是鸡肝材料糖原含量偏低。
6、结论：本次试验为《肝糖原的提取、鉴定与定量》，通过这次实验掌握了组织样品的制备方法，了解了其注意事项；了解了肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握了其操作方法。巩固了正确操作使用刻度吸管和移液枪。掌握了溶液转移的操操作，复习巩固了正确操作分光光度计。实验中没有错误与过失，结果正常。呈色反应、颜色观察与定量测定都正确成功。
生物化学实验报告
姓 名：
学 号：
专业年级：
组 别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
Folin-酚试剂法测定蛋白质含量
实验日期
实验地点
合作者
指导老师
评分
教师签名
批改日期
格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。需强调的地方请用蓝颜色标出。不得出现多行、多页空白现象。
（2）肝糖原定量测定
图二：肝糖原定量测定试验流程
取3支试管，按下表操作。
试剂（ml）
空白管
标准管
样品管
蒸馏水
1.0
—
—
标准葡萄糖溶液
—
1.0
—
糖原提取液
—
—
1.0
0.2%蒽酮溶液
2.5
2.5
2.5
表一：糖原测定试管操作
混匀，沸水浴10分钟，冷却至室温。在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。
一、实验目的
1、学习并掌握肝糖原提取和鉴定原理和方法；
2、学习并掌握蒽酮比色测定糖原含量的原理、注意事项和操作方法；
3、学习并掌握刻度吸管和微量加样枪的使用方式；
4、正确掌握使用离心机的方法步骤；
5、熟练运用溶液混匀的各种方法；
6、正确掌握溶液转移的操作；
7、正确掌握使用分光光度计的方法步骤
二、实验原理
三、材料与方法：以流程图示意
1、实验材料
（1）肝糖原的提取与鉴定
样品：1.50g的鸡肝
试剂：5%三氯醋酸溶液、95%乙醇、蒸馏水、浓HCl溶液、50%NaOH溶液、碘试剂和班氏试剂
仪器和器材：离心机、天平、试管、试管架、研钵、玻璃棒、室温-100℃恒温水浴箱、剪刀、镊子、刻度吸管、加样枪和白瓷反应板
（2）糖原中葡萄糖的鉴定：实验结果也没有如预期中的蓝色溶液沸水浴后变为砖红色。原因还是糖原含量极少，又加过少量酸与碱，浓度更小，现象更不明显，所以观察不到明显的砖红色。
（3）在肝糖原定量测定中，三只试管水浴15min后，标准管颜色最为明显，为绿色，加入的是标准葡萄糖溶液，样品管与空白管颜色依次递减。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(OH)2↓
2Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH +氧化型葡萄糖+ H2O
2CuOH = H20 + Cu2O↓ (红色)
Cu(OH)2 ==== H2O + CuO↓ (黑色)
实验2 肝糖原定量测定
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故可将肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，保留肝糖原。糖原可以被浓酸水解成葡萄糖，而浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成5-羟甲基呋喃甲醛，该化合物与蒽酮脱水缩合可以生成蓝色的化合物。该物质在620nm处有最大吸收。糖含量在10-100μg，溶液颜色的深浅与可溶性糖的含量成正比。利用该反应原理处理标准葡萄糖溶液，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。