泡腾片中的Vc含量测定

高压液相色谱法测定维生素C泡腾片中维

生素C的含量

摘要目的文章建立了高压液相色谱测定维生素C泡腾片中维生素C含量的方法，以检测所选用的Vc泡腾片产品中的Vc含量是否符合标示规格。方法采用0.02%的草酸溶液为溶剂；色谱中采用C18色谱柱，以0.02%的草酸溶液为流动相；流速1ml/min，检测波长为254nm，进样量20ul。结果维生素C在0.1mg/ml~0.9mg/ml的范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，平均回收率为102.4%。结论应用该方法测定维生素C的含量具有简便、快速、可靠的有点，可重复性好；经测定，所选用的力度伸维生素C泡腾片每片所含维生素C约0.95g，与厂家标示的1g/片基本相符。

关键字维生素C泡腾片；高压液相色谱；维生素C

1 前言

高压液相色谱（HPLC）系统由输液泵，进样器，色谱柱，检测器，数据处理和计算机控制系统以及恒温装置组成。由于使用的色谱柱填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，所以称高压液相色谱。溶于流动相中的各组分经过固定相时，与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出，在色谱图上出峰时间有先后，保留时间不同。本实验使用反相色谱法，采用C18柱，根据样品中各组分在固定相与流动相中分配系数的不同样品中各物质得到分离，在流出曲线上表现不同的峰及保留时间。

维生素C泡腾片作为一种保健品，具有崩解迅速、起效快、口服吸收良好、生物利用率高等优点，兼具固体制剂和液体制剂的特长且携带和使用方便。它可用于增强机体抵抗力, 预防和治疗各种急、慢性疾病、坏血病或其他疾病, 常用于病后恢复期、创伤愈合期及过敏性疾病的辅助治疗。

本次试验选择了力度伸维生素C泡腾片，希望通过高压液相色谱法来检测每片泡腾片维生素C的实际含量，以确定是否与厂家标示的Vc含量相符。

2 仪器与试药

高压液相色谱仪，紫外检测器，电子天平，研钵，烧杯，玻璃棒；0.02%草酸溶液（0.2g草酸粉末溶于1L去离子水,抽滤后超声脱气30min），维生素C标准对照品，甲醇（超声脱气30min），去离子水

3方法与结果

3.1色谱条件

色谱柱C18柱；流动相：0.02%的草酸溶液；流速：1ml/min；检测波长：254nm；柱温为室温；进样量：20ul。

3.2线性关系考察

精密称取维生素C标准品0.5mg，1.5mg，2.5mg，3.5mg，4.5mg分别加5ml流动相溶液即0.02%草酸溶液配制成浓度分别为100ug/ml，300ug/ml，500ug/mll，700ug/ml，900ug/ml的标准品溶液，用0.45um滤膜过滤。在上述色谱条件下准确进样20ul。以标准品溶液浓度对峰面积作图，其线性回归方程为y=32238x，R^2=0.9972，线性范围为0.1~0.9mg/ml。

图1 维生素C标准品色谱图

（棕色色谱峰：900ug/ml标准品溶液，深蓝色：700ug/ml，绿色：500ug/ml,

淡蓝色：300ug/ml,紫色：100ug/ml）

图2 维生素C的标准工作曲线

3.3精密度实验

精密吸取900ug/ml的标准品溶液20ul，连续进样3次，结果峰面积分别为29230578、29812116、29463544(见图3)，平均峰面积为29502079.33，RSD为0.9%。HPLC系统设备稳定性、精确性良好。

图3 精密度试验色谱图合成图

（红、黄、蓝色色谱峰分别为第一、第二、第三次进样结果）

3.4 稳定性实验

在标准品溶液（900ug/ml的标准品溶液）第一次进样后4小时再次进20ul。第一次进样测得900ug/ml的标准品溶液色谱峰面积为9155820，4小时后测得结果为8868664。结果显示，4个小时后维生素C样品溶液有3%

的损失。

图4 稳定性试验流出曲线对照图

（红色色谱峰由该标准品溶液第一次检测产生，蓝色色谱峰由同一样品

4小时候后再次进样产生）

3.5 重复性试验

取维生素C泡腾片样品两片，于干净研钵中研碎。精密称取4.6mg三份，

分别加5ml流动相溶液配置成供试品溶液1,2,3，使用0.46um滤膜过滤，

分别进样20ul。测得供试品溶液1,2,3的色谱峰面积分别为

6147210,6428546,6238013，RSD为0.22%（图5）。

图5 重复试验样品色谱图合成图

3.6 加样回收试验

称取样品4.6mg 与适量维生素C 标准品混合溶解成5ml ，使得配置好的溶液的维生素C 浓度分别比待测样品溶液的维生素C 浓度大100ug/ml 与大200ug/ml （分别编号a 、b ），均进样20ul 。测定回收率，结果如表一所示，得到本实验的平均回收率为102.4%。

表1 回收率试验数据表

3.7 样品含量测定

取维生素C 泡腾片样品两片，于干净研钵中研碎，精密称取4.6mg ，用0.02%的草酸溶液溶解，使用0.46um 滤膜过滤,进样20ul 。结果中色谱峰面积为6271256，结合2.2得到的线性回归方程计算得供试样品的Vc 浓度为194.53mg/ml 。

由于样品回收率为102.4%，所以一片维生素C 泡腾片（约为4.6g/片）含维生素C 0.95g 。

4 讨论

4.1

使用标准品溶液进行初始尝试的色谱条件流动相为0.02%草酸溶液：甲醇=95:5；流速1ml/min;检测波长：254nm;进样量：20ul 。得到的色谱图（图一）有三个部分交叠的峰，会对峰面积的积分产生影响，造成实验结果的不准确。出现杂峰的原因可能为使用的维生素C 标准品保存时间过长，已有部分Vc 氧化分解。当使用新鲜的Vc 标准品后，杂峰消失。也可能是第一次标准品称量等处理过程中带入了污染。

回收率结果

样品编号

样品（mg）标准品加入量（ug/ml）测得量（mg）回收率（%）平均回收率（%）a

4.6100298.1103.5b 4.6200397.2101.3102.4