滴金法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体
幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A及细胞空泡毒素A与胃及十二指肠疾病的关系
幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A及细胞空泡毒素A与胃及十
二指肠疾病的关系
张玲霞
【期刊名称】《陕西医学杂志》
【年(卷),期】1998(027)008
【摘要】自1983年Warren和Mashall发现幽门螺杆菌(HP)以来,普遍认为HP 与慢性胃炎及消化性溃疡密切相关,近来更认为HP是致胃癌的强危险因子。
在人群中约有一半的人受到HP感染,不少人发展为慢性胃炎。
然消化性溃疡及胃癌的发生毕竟为少数,这除了与人类的个体差异等因素有关外,还与HP感染的类型有关,即某些菌株可产生细胞毒素。
在HP诸多的致病因素中,细胞毒素相关蛋白A(CagA)及细胞空泡毒素A(VacA)备受关注。
【总页数】3页(P485-487)
【作者】张玲霞
【作者单位】西安市中心医院消化科
【正文语种】中文
【中图分类】R573
【相关文献】
1.幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A、细胞毒素相关蛋白E、细胞空泡毒素A基因型与上消化道疾病的关系 [J], 蒋闵仁;黄英;宋佳鸿;叶圆圆
2.幽门螺杆菌细胞毒素相关基因、空泡毒素基因及其表达产物与儿童胃十二指肠疾
病的关系 [J], 陈肖肖;尚世强;欧弼悠;曲一平
3.幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白、空泡毒素基因与儿童胃十二指肠疾病的关系 [J], 胡伟国;黄开宇;朱欢;徐辉;徐彰;黄爱芬;程芹芹;陶洪群;谢小志;杨锦红
4.幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A、空泡毒素基因A抗体与胃十二指肠疾病的关系[J], 张丽萍;张岫兰;卢启明
5.细胞毒素相关蛋白与儿童幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的关系 [J], 胡伟国;黄开宇;徐辉;程芹芹;黄爱芬;陶洪群;谢小志;杨锦红
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定量检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因A方法的建立
定量检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因A方法的建立阎小君;张沥;韩锋产;江梅;苏成芝【期刊名称】《胃肠病学》【年(卷),期】1997(000)003【摘要】目的:建立定量检测细胞毒素相关蛋白基因A（cagA）阳性幽门螺杆菌（Hp）的方法。
方法:利用含Hp cagA的质粒(P<sup>MC3</sup>)作为外参照品,在微孔板中对PCR扩增cagA的产物进行辣根过氧化物酶标记的探针杂交及酶促显色。
结果:当PCR反应体系中原始模板为1～10<sup>5</sup>拷贝、循环次数小于或等于25时,原始模板以相对固定的指数形式增加,在该范围内适宜定量分析。
通过对20份已知Hp菌株cagA的检测符合率达100％,观察结果的敏感度较电泳法提高了200倍。
定量检测不同胃粘膜组织中cagA阳性Hp,检出底限为6拷贝/mg组织。
结论:本方法特异性强,敏感度高,对研究Hp与消化道疾病的关系有实用价值。
【总页数】4页(P187-190)【作者】阎小君;张沥;韩锋产;江梅;苏成芝【作者单位】第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所;西安市中心医院消化内科;第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所 710032;710006;710032;710032【正文语种】中文【中图分类】R446.5【相关文献】1.幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A、细胞毒素相关蛋白E、细胞空泡毒素A基因型与上消化道疾病的关系 [J], 蒋闵仁;黄英;宋佳鸿;叶圆圆2.定量检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因A方法的建立 [J], 阎小君;张沥;韩锋产3.幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A及细胞毒素相关蛋白A研究进展 [J], 吴炜景;赵亚刚4.抗Ⅰ型幽门螺杆菌IgY和黄连及太子参联合抗活性空泡细胞毒素A+和细胞毒素相关蛋白A+幽门螺杆菌的实验 [J], 李娟;傅颖媛;黎健5.用噬菌体展示技术筛选幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因结合蛋白的研究 [J], 王克霞;陈琳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
儿童幽门螺杆菌四种毒力因子表达的相关性研究
儿童幽门螺杆菌四种毒力因子表达的相关性研究幽门螺杆菌是一种具有高毒力的细菌，被认为是引起胃溃疡和胃及十二指肠癌等消化系统疾病的主要原因之一。
幽门螺杆菌的毒力主要与其四种重要的毒力因子相关，包括细胞毒素型A（CagA）蛋白、幽门螺旋杆菌刈割氨基酸鲁双酯酶（H.pylori vacA）蛋白、幽门螺杆菌达弗信号化调节因子（H.pylori dupA）蛋白和细菌外膜蛋白（OMP）。
CagA蛋白是幽门螺杆菌最重要的毒力因子之一。
研究表明，CagA能够进入宿主胃上皮细胞并改变宿主细胞信号传导通路，导致细胞内酪氨酸激酶活化，从而诱导细胞异常增殖和癌化。
研究还显示，CagA蛋白表达与胃溃疡和胃癌风险增加之间存在相关性。
H.pylori vacA蛋白是幽门螺杆菌另一个重要的毒力因子。
该蛋白能够在宿主细胞膜上形成离子通道，干扰细胞内钙离子平衡，导致细胞凋亡和炎症反应。
研究发现，H.pylori vacA蛋白的不同亚型与幽门螺杆菌引起的疾病类型和严重程度之间存在显著相关性。
H.pylori dupA蛋白是幽门螺杆菌最近发现的毒力因子之一。
研究发现，H.pylori dupA阳性菌株与幽门螺杆菌相关性胃溃疡和胃癌的发生率之间存在负相关。
这表明，H.pylori dupA蛋白可能具有一定的保护作用，能够降低幽门螺杆菌对宿主胃黏膜的损害。
OMP是幽门螺杆菌的外膜蛋白，具有多种功能。
研究发现，OMP能够与宿主细胞黏膜表面的受体结合，从而进入宿主细胞并刺激炎症反应。
研究还显示，不同亚型的OMP与幽门螺杆菌相关性胃溃疡和胃癌发生率之间存在相关性。
幽门螺杆菌四种毒力因子的表达与幽门螺杆菌相关性胃溃疡和胃癌的发生率之间存在明显的相关性。
进一步研究这些毒力因子的表达调控和作用机制，有助于深入理解幽门螺杆菌致病机制，并为幽门螺杆菌相关性疾病的预防和治疗提供新的策略和靶点。
幽门螺旋杆菌细胞毒素相关蛋白A真核表达载体的构建与表达
幽门螺旋杆菌细胞毒素相关蛋白A真核表达载体的构建与表达万小勇;杨登元【期刊名称】《成都医学院学报》【年(卷),期】2013(8)5【摘要】目的构建幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)细胞毒素相关蛋白A(cytotoxin-associated protein,CagA)基因表达载体并表达其编码蛋白.方法从胃黏膜活检标本中分离Hp,提取核酸,采用RT-PCR技术扩增CagA基因,将其克隆至pEGFP真核表达载体中,构建Hp CagA基因真核表达载体并转染293-T细胞表达其编码蛋白.结果通过PCR、双酶切、测序鉴定证实CagA基因的真核表达载体构建成功,免疫印迹法证实CagA蛋白的表达.结论成功构建了Hp CagA基因真核表达载体并表达其编码蛋白,为后期功能研究提供了材料和基础.【总页数】4页(P604-607)【作者】万小勇;杨登元【作者单位】南京市市级机关医院消化内科,南京210018;南京市市级机关医院普外科,南京,210018【正文语种】中文【中图分类】R573【相关文献】1.人精子顶体膜相关蛋白32真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达[J], 臧卫东;陈雪梅;任秀花;赵青赞;曹静;郝莉2.白细胞相关免疫球蛋白样受体2(CD306)真核表达载体构建及蛋白的纯化与鉴定[J], 王春艳;康振华;谢鑫;李妍;金伯泉3.单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录子蛋白读码框2真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达 [J], 杨慧兰;赵举峰;樊建勇;周翠;黄小晏;齐维4.汉滩病毒糖蛋白与人溶酶体相关膜蛋白重组真核表达载体的构建表达鉴定及作为基因疫苗的免疫安全性评价 [J], 张锦鹏;张冠文;宣国云;孟强;谢文宇;高宏;姜东伯;杨琨5.努比亚山羊脂肪和肥胖相关蛋白基因克隆分析及真核表达载体构建 [J], 邹菊红;申玉建;高小童;黄艳娜;蒋钦杨因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与动脉粥样硬化的相关性研究进展
炎症损伤 、 血脂代谢紊乱、 免疫反应和直接作用等多种途径影响动脉粥样硬化的病理演变过程。 但亦有一些研究持
相 反 的观 点 。 认为 Ｃ ａ ｇ Ａ ＋ Ｈ ｐ菌株感 染 与 动脉 粥样 硬 化 的发 生 无关 ， 其并 未 参 与动 脉粥样 硬 化 的形成 过 程 ， 因此 。
ｄ ｅ ｐ ｔ ｈ ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ，ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｂ ｙ ，ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｄ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｏ ｒ ｅ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｆ ｏ ｕ ｎ ｄ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙ ｏ ｆ ａ ｔ ｈ ｅ ｒ ｏ ｓ ｃ ｌ ｅ ｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ．
ｓ ｉ ｓ ｉ ｓ ｕ ｎ ｋ ｎ ｏ ｗｎ ． Ｍｏ ｓ ｔ ｓ ｔ ｕ ｄ ｉ ｅ ｓ ｈ ａ ｖ ｅ ｏｕ ｆ ｎ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｉ ｔ ｍａ ｙ ｐ ｒ ｏ ｍｏ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ａ ｔ ｈ ｅ ｒ ｏ ｓ ｃ ｌ ｅ ｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｉ ｍｐ ｏ ￣ａ ｎ ｔ ｒ ｉ ｓ ｋ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｏ ｆ ａ ｔ ｈ ｅ ｒ ｏ ｓ ｃ ｌ ｅ ｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ，ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｍａ ｙ ｂ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｅ ｄ ｔ ｈ ｒ ｏ ｕ ｇ ｈ ｉ ｎ ｌ ｆ ａ ｍｍａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｌ ｅ ｓ ｉ ｏ ｎ ｓ ，ｌ ｉ ｐ ｉ ｄ ｍｅ ｔ ａ ｂ ｏ ｌ ｉ ｓ ｍ ｄ ｉ ｓ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ，ｉ ｍｍｕ ｎ ｅ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｓ ｅ ，ｄ ｉ ｒ ｅ ｃ ｔ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｅ ｔ ｃ ．Ｈｏ ｗｅ ｖ ｅ ｒ ，ｔ ｈ ｅ ｏ ｐ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｅ ｐ ｏ ｉ ｎ ｔ ｏ ｆ ｖ ｉ ｅ ｗ ｔ ｈ ｏ ｕ ｇ ｈ ｔ ｔ ｈ ａ ｔ Ｈｐ— Ｃａ ｇ Ａ— ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ
滴金免疫测定法在检测血清抗幽门螺旋菌抗体中的应用
滴金免疫测定法在检测血清抗幽门螺旋菌抗体中的应用
韩松;沈霞
【期刊名称】《陕西医学检验》
【年(卷),期】1994(009)003
【摘要】以幽门螺旋菌（HP）提取液为抗原，用胶体金标记的A蛋白为显示剂，建立了检测血清抗HP抗体的简便快速滴金免疫测定法。
与美因Bio－Rad抗HP 抗体IgGELISA试剂盒对比测定血清标本87份，方法的相对特异性和相对敏感性分别为92．9％和93．2％，符合率达93．1％。
【总页数】1页(P129)
【作者】韩松;沈霞
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R446.62
【相关文献】
1.检测血清弓形虫IgG抗体的滴金免疫测定法的建立及应用 [J], 徐霞;谢瑾灼;陈柏铭
2.滴金免疫测定法在检测日本血吸虫抗体中的应用 [J], 裘丽姝;韩松;陶义训;曹锡坤;张永红;朱恩元
3.滴金免疫测定法检测血清弓形虫IgG抗体的研究 [J], 徐霞;谢瑾灼;陈柏铭
4.快速检测布鲁氏菌抗体的滴金免疫测定法的建立及应用 [J], 徐卫民;朱明东;王衡;洪林娣;金行一;施晓华;杨洋;朱姝娟
5.捕获式滴金免疫法检测血清抗-HAV IgM抗体 [J], 吴玮;徐德忠;谭天祚;杜遵宪;门可;闫永平;张景霞
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儿童幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A检测的意义
儿童幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A检测的意义王琳琳;唐清;梁淡湄;姜海行;陆红【期刊名称】《中华实用儿科临床杂志》【年(卷),期】2006(021)019【摘要】目的探讨儿童幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相关基因A(cagA)的流行情况,分析其与胃十二指肠疾病的关系.方法对80例患儿经胃黏膜快速尿素酶试验和Warthin-Starry银染色,聚合酶链式反应(PCR)法检测Hp尿素酶C基因及血清抗Hp-IgG确诊为Hp感染儿童采用PCR法检测胃黏膜cagA.结果 80例患儿胃黏膜Hp菌株应用cagA的5对不同引物分别扩增cagA DNA 400、280、349、298 bp 和191 bp 5个片段,cagA检出率分别为43.8%、20.0%、55.0%、32.5%和61.2%,它们之间有显著性差异.cagA总检出率为83.7%.轻度与中重度炎症cagA 检出率无显著性差异.慢性浅表性胃炎及消化性溃疡两组cagA检出率无显著性差异.结论南宁地区儿童Hp以cagA阳性为主.cagA基因与胃黏膜炎症程度无关,且cagA基因不能作为南宁地区Hp菌株毒力强弱的指标.【总页数】2页(P1293-1294)【作者】王琳琳;唐清;梁淡湄;姜海行;陆红【作者单位】广西医科大学第一附属医院,儿科,南宁,530021;广西医科大学第一附属医院,儿科,南宁,530021;广西医科大学第一附属医院,儿科,南宁,530021;广西医科大学第一附属医院,儿科,南宁,530021;广西医科大学第一附属医院,儿科,南宁,530021【正文语种】中文【中图分类】R725.7【相关文献】1.幽门螺杆菌细胞毒素相关基因、空泡毒素基因及其表达产物与儿童胃十二指肠疾病的关系 [J], 陈肖肖;尚世强;欧弼悠;曲一平2.广东地区幽门螺杆菌细胞毒素相关基因及其临床意义 [J], 高翔;何瑶3.不同地区0～14岁儿童幽门螺杆菌及其细胞毒素相关基因蛋白A阳性菌株感染状况 [J], 卢文洁;李林;郭莉;刘健超;陈婉玲;曾厚洋;吕建楠4.核因子κB及幽门螺杆菌和细胞毒素相关基因A在特发性血小板减少性紫癜发病中的临床意义 [J], 吴友伟; 高瑛; 史丽萍; 赵素平5.患消化性溃疡出血的非甾体类抗炎药使用者中幽门螺杆菌的细胞毒素相关基因A 状态的临床意义:一项多中心病例对照研究 [J], Tzourmakliotis D.;Economou M.;Manolakopoulos S.;赵天智因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A蛋白不同片段对胃癌细胞γH2AX表达的影响
幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A蛋白不同片段对胃癌细胞γH2AX表达的影响贾岑岑;王琴容;周建奖;程薇;赵艳【期刊名称】《贵州医科大学学报》【年(卷),期】2022(47)2【摘要】目的探讨幽门螺杆菌(H.pylori)细胞毒素相关基因A(CagA)蛋白不同片段对胃癌细胞磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)表达的影响。
方法取前期分离的H.pylori 东亚株GZ7及其CagA敲除株H.pylori GZ7ΔCagA感染的癌细胞株AGS,采用免疫荧光方法检测DNA双链断裂标志物γH2AX的表达;构建不同序列的CagA表达载体(载体a、b、c、d、e),转化大肠杆菌,提取质粒后测序鉴定,将鉴定后的载体转染AGS,采用免疫荧光方法检测γH2AX的表达,并通过流式细胞术检测细胞周期。
结果成功鉴定了含不同片段的CagA载体;H.pylori GZ7感染的胃癌细胞AGS核内γH2AX的表达高于H.pylori GZ7ΔCagA感染的细胞(P<0.05);与NC组比较,不同序列CagA载体转染后胃癌细胞AGS中γH2AX表达均有增加(P<0.05或P<0.01),且载体b、c及d表达增加较明显(P<0.01);载体a和c转染后的胃癌细胞AGS的G0/G1期细胞比例升高(P<0.05),载体b、c、d及e转染后胃癌细胞AGS的G2/M期比例明显升高(P<0.01)。
结论CagA是H.pylori感染诱导胃癌细胞DNA双链断裂的重要因素,CagA中的EPYIA基序是这种DNA损伤的重要结构。
【总页数】8页(P133-140)【作者】贾岑岑;王琴容;周建奖;程薇;赵艳【作者单位】贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室;贵州医科大学附属医院血液科【正文语种】中文【中图分类】R735.2;R365【相关文献】1.幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A、细胞毒素相关蛋白E、细胞空泡毒素A基因型与上消化道疾病的关系2.幽门螺杆菌重组空泡细胞毒素A片段对人胃腺癌AGS细胞腺嘌呤核苷酸转移酶1基因表达的影响3.人乳头瘤病毒16幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A和尿素酶基因A基因型感染与胃癌的相关性分析4.幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A及细胞毒素相关蛋白A研究进展5.慢性肾功能不全患者幽门螺杆菌细胞毒素相关基因蛋白(CagA)的表达因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A对人胃腺癌上皮AGS细胞蛋白质组的影响
幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A对人胃腺癌上皮AGS细胞蛋白质组的影响葛振;朱永良;钟献;余捷凯;郑树【期刊名称】《细胞生物学杂志》【年(卷),期】2006(28)4【摘要】为明确幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A(CagA)在致病过程中对宿主细胞蛋白质表达的影响及其与CagA磷酸化的相关性,分别用野生型cagA质粒和磷酸化位点突变型cagA质粒转染人胃腺癌上皮AGS细胞,应用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术,分析细胞蛋白质组的改变。
结果表明,在可捕获的400多个蛋白质中,野生型CagA可使AGS细胞质荷比为4229、4714、4728、5129、6546、6657、8162、9084、13803、14021的10个蛋白质表达上调,质荷比为2013、4286、8563、9952、11085、11645的6个蛋白质表达下调。
突变型CagA只能使质荷比为4714、4728、6546和6657的蛋白质表达上调。
这些结果提示,这16个差异表达蛋白质可能参与了CagA的致病过程,其中质荷比为4714、4728、6546和6657蛋白质表达的改变与CagA的磷酸化作用无关,而其余12个蛋白质表达的改变则都依赖于CagAEPIYA重复序列酪氨酸位点的磷酸化。
这些发现为进一步探讨CagA的致病机制提供了实验依据。
【总页数】8页(P603-610)【关键词】细胞毒素相关蛋白A;磷酸化;SELDI-TOF-MS;蛋白质芯片【作者】葛振;朱永良;钟献;余捷凯;郑树【作者单位】浙江大学医学院附属第二医院肿瘤研究所;浙江大学医学院附属第二医院消化科【正文语种】中文【中图分类】Q785;TS254.7【相关文献】1.幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A对人胃腺癌AGS细胞生物学行为的影响 [J], 宋鑫;陈惠新;陈洁;白爱平;李晓艳;陈为;陈旻湖2.幽门螺杆菌重组空泡细胞毒素A片段对人胃腺癌AGS细胞腺嘌呤核苷酸转移酶1基因表达的影响 [J], 黄增荣;王建华;兰春慧3.幽门螺杆菌毒素相关蛋白A的EPIYA多态性对胃上皮细胞AGS形态及IL-8表达的影响 [J], 刘鹿;王艳春;陶好霞;袁盛凌;王令春;刘纯杰4.胃癌高发区幽门螺杆菌对胃上皮细胞系GES1蛋白质组的影响 [J], 魏思思;邓晓晴;王苋;薛永娴;黄永胜;赵连梅;单保恩5.幽门螺杆菌与胃上皮细胞不同作用时间点蛋白质组的差异分析 [J], 宋衍燕;赵飞;肖迪;马广源;孟凡亮;何丽华;张建中因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
滴金法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体
滴金法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A 抗体试剂盒的研制及应用侯 瑜1,张 菊2,李质馨1,田洪艳1,刘晓冬1,徐 冶1(1.第四军医大学吉林军医学院组胚教研室,吉林 132013;2.第四军医大学全军基因诊断技术研究所,陕西西安 710033)摘要:目的 建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌(Hp )细胞毒素相关蛋白A (CagA )抗体的胶体金免疫渗滤法(DIGFA )。
方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记葡萄球菌A 蛋白(SPA ),将重组的CagA 抗原固定于硝酸纤维素膜上,制成免疫渗滤试剂盒。
血清中抗CagA 抗体与试剂盒上金标记物及硝酸纤维素膜上的固相抗原结合后,形成肉眼可见的红色斑点。
结果 用DIGFA 与酶联免疫吸附试验(EL ISA )试剂盒对比检测了326份血清标本中抗CagA 抗体,本方法的特异性为95.8%,敏感性为97.3%,两种方法符合率为96.6%。
结论 DIGFA 检测血清中的抗CagA 抗体特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值。
关键词:幽门螺杆菌;细胞毒素相关蛋白A ;胶体金;渗滤法;抗体中图分类号:R573 文献标识码:B 文章编号:176128259(2003)0520520202收稿日期:2002210216 修回日期:2003201202作者简介:侯瑜(19642),女(汉族),学士,实验师. 幽门螺杆菌(helicobacter pylori ,Hp )的发现是20世纪80年代医学史的重大事件,它为认识某些胃肠疾病的病因及发病机制带来了新的概念。
现已确认HP 是慢性胃炎的主要致病因子,与消化性溃疡的发生密切相关1,世界卫生组织已将其列为一类致癌因子。
目前,根据HP 菌株是否产生细胞空泡毒素(vaculating cytotoxinA ,VacA ),将HP 分为毒性株与非毒性株两大类。
产毒株HP 除产生VacA 外,还往往含有细胞毒素相关蛋白基因A (cytotoxin associated gene A ,CagA ),CagA 可能与VacA 的转录、折叠、运转及功能有关2,3。
CagA抗体检测用于鉴定幽门螺杆菌高毒株感染的评价
CagA抗体检测用于鉴定幽门螺杆菌高毒株感染的评价李能;李妮【期刊名称】《中国热带医学》【年(卷),期】2007(7)12【摘要】目的探讨通过检测血清CagA抗体鉴定幽门螺杆菌高毒株感染的可行性。
方法采集本地区临床门诊行胃镜检查的胃活检标本,作病理检查和幽门螺杆菌(Hp)培养,同时采集病人的血清。
采用PCR法检测分离所得的HpcagA基因,用EIA法测定患者血清CagA抗体,分析cagA基因的检出与消化性疾病的关系,比较cagA基因与CagA抗体的检测结果,评价应用CagA抗体检测Hp高毒株感染的可行性。
结果分离获得80株Hp,其中54株检出cagA基因,阳性率为67.50%。
各病理类型胃病患者cagA基因阳性率分别为:浅表性胃炎77.42%,萎缩性胃炎62.86%,胃溃疡58.33%,胃癌50.00%,各组间无显著差异(P>0.05);EIA法检测CagA抗体的阳性率为55.00%,敏感度为74.07%,特异度为84.62%,约登指数(Youden's index)58.69%,调整一致性77.68%。
结论检测血清CagA抗体用于诊断高毒力Hp感染存在局限性。
【总页数】3页(P2199-2201)【关键词】幽门螺杆菌;细胞毒素相关基因A;抗体;酶免疫检测【作者】李能;李妮【作者单位】福建医科大学基础医学院病原生物学系【正文语种】中文【中图分类】R378【相关文献】1.胃癌高、低发区人群中幽门螺杆菌感染儿童抗CagA抗体的比较 [J], 陈为;曾志荣;彭仲生;胡品津2.血清CagA抗体鉴定幽门螺杆菌高毒株感染的评价 [J], 李能;李妮;佘菲菲3.幽门螺杆菌cagA基因片段原核表达载体的构建及其cagA基因和CagA蛋白及感染者血清抗体的检测 [J], 王媛;罗依惠;严杰4.胃癌高、低发区幽门螺杆菌感染人群中儿童抗CagA抗体及组织病理学的比较[J], 曾志荣;胡品津;陈旻湖;何瑶;陈为5.消化性溃疡、慢性胃炎患者幽门螺杆菌产毒株抗体检测分析 [J], 张华金;卢艺涛;李娜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
胶体金免疫层析法检测抗幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体
胶体金免疫层析法检测抗幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体韩锋产;阎小君;侯瑜;肖乐义;郭晏海;苏成芝【期刊名称】《世界华人消化杂志》【年(卷),期】1999(7)9【摘要】目的建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白Ａ（ＣａｇＡ）抗体的胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ）．方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ），将重组的ＣａｇＡ抗原划线固定于硝酸纤维素膜上，制成免疫层析检测试条．血清中ＩｇＧ与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条．结果用ＧＩＣＡ与ＥＬＩＳＡ试剂盒对比检测了３２６份血清标本中抗ＣａｇＡ抗体，本方法的特异性为９５－８％，敏感性为９７－３％，两法符合率为９６－６％．结论ＧＩＣＡ检测血清中的抗ＣａｇＡ抗体特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值．【总页数】3页(P743-745)【关键词】螺杆菌,幽门;细胞毒素相关蛋白A/分析;胶体金;免疫层析;抗体/分析【作者】韩锋产;阎小君;侯瑜;肖乐义;郭晏海;苏成芝【作者单位】中国人民解放军第四军医大学全军基因诊断技术研究所【正文语种】中文【中图分类】R573.04;R378.99【相关文献】1.ELISA 与胶体金免疫层析法检测血清抗 CCP 抗体在 RA 诊断中的比较 [J], 田卫花;马文媛;李莎莎2.酶联免疫吸附法与胶体金免疫层析法检测抗环瓜氨酸肽抗体方法学的比较和性能评估 [J], 瞿国英3.胶体金免疫层析法检测抗-CCP抗体的性能评价及临床意义 [J], 黄湘宁;冯彩莲;黄瑜璇;邹燕4.胶体金渗滤法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体 [J], 侯瑜;张菊;李质馨;田洪艳;刘晓冬;徐冶5.酶联免疫吸附试验联合胶体金免疫层析法在类风湿关节炎患者血清抗环瓜氨酸肽抗体检测中的应用价值 [J], 王逸群;张超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A、细胞毒素相关蛋白E、细胞空泡毒素A
道疾病患者 胃黏膜组 织中的 Ｈ ｐ菌株呈现 ｃ ａ ｇ Ａ、 ｃ ａ ｇ Ｅ、 ｖ ａ ｃ Ａ ｓ ｌ ／ ｍ ２等基 因亚 型的优势表达 ， 说明这些毒力因子表型在 Ｈ ｐ引发和 促进上消化道疾病的过程中具有重要的作用 ， 但 与上 消化道疾病类型缺乏相关性 。 关键词 ：幽门螺杆菌 ；细胞毒素相关蛋 白 Ａ；细胞毒素相关 蛋白 Ｅ；细胞空泡毒素 Ａ；基因分型 ；上消化道疾病
中 图 分 类 号 ：Ｒ ５ ７ ３ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ６ ７ ２ － ２ ３ ５ ３ （ ２ ０ １ ７ ） １ ３ － ０ ３ ６ － ０ ４ ＤＯ Ｉ ： １ ０ ． ７ ６ １ ９ ／ ｊ ｅ ｍ ｐ ． ２ ０ １ ７ １ ３ ０ １ ０
Ｒｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｈ ｉ ｐ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ｃ ｙ ｔ ｏ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ Ａ， ｃ ｙ ｔ ｏ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ Ｅ ，ｖ ａ ｃ ｕ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｃ ｙ ｔ ｏ ｔ ｏ ｘ ｉ ｎ
蒋 闵仁 ， 黄 英 ，宋佳 鸿 ，叶 圆 圆
（ １ ．同济大 学附属第 十人 民医院 消化 内科 ， 上海 ， ２ ０ ０ ０ ７ ２ ； ２ ．民航上海 医院 一 瑞 金医院古北分院消化 内科 ，上海 ， ２ ０ ０ ３ ３ ６ ）
摘 要 ：目的 分析幽门螺杆菌（ Ｈ ｐ ） 的 细 胞 毒 素 相 关 蛋 白 Ａ（ ｃ ａ ｇ Ａ） 、 细 胞 毒 素 相 关蛋 白 Ｅ（ ｃ ａ ｇ Ｅ） 、 细 胞 空 泡 毒 素 Ａ（ ｖ ａ — 选取 １ １ ２例 上 消 化 道 疾 病 患者 ， 对 其 胃黏 膜 组 织 中 Ｈｐ 菌株的 ｃ ａ ｇ Ａ、 ｃ ａ ｇ Ｅ、 ｖ ａ ｃ Ａ基 因
幽门螺杆菌及其细胞毒素相关蛋白A与胃癌形成的关系及可能机制
幽门螺杆菌及其细胞毒素相关蛋白A与胃癌形成的关系及可能机制汪强武;王启之;于东红;燕善军;周蕾;吴炎;田怡;承泽农【摘要】Objective By detecting the expression of Helicobacter pylori (Hp), cytotoxic-associated gene A (CagA), P53 and iNOS in chronic superficial gastritis (CSG) , chronic atrophic gastritis (CAG) , intestinal metaplasia (IM) , Dysplasia (DYS) and gastric cancer (GC), we explored the correlation between the expression of Hp, CagA, P53, iNOS and GC, as well as the possible mechanism. Methods The expression of Hp was examined by rapid urease test, gram staining of tissue sections and serum HpCagA antibodies. The expression of CagA gene of Hp was tested by polymerase chain reaction (PCR). The expression of mutant P53 and iNOS proteins was detected by immunohistochemical staining. Results The positive rates of Hp were 46. 7%, 67.2%, 70.0%, 75.3% and 53.8% in CSG, CA, IM, DYS and GC respectively, while the positive rates of CagAgene were 34. 3%, 59. 0%, 65. 7%, 69.1% and 76.8% in the corresponding tissues. The infection rates of Hp in GC groups showed significant differences compared with those in DYS groups (P<0. 05) , and the infection rates of Hp in CAG, IM and DYS groups were significantly different compared with those in CSG groups (P<0. 05). The infection rates in CagA-positive cases of IM,DYS and GC groups were higher than those in CSG groups (P<0. 01-P<0. 05) , and higher in GC groups than in CAG groups (P<0. 05). In the evolution of gastric mucosa from CSG to GC, the expression rates of mutant p53 andiNOS in CagA-positive cases were gradually increasing. Beyond CSG, the expression rates of mutant p53 in CagA-positive cases were significantly higher than those in CagA-nega-tive cases (P<0. 005-P<0. 05). In all five groups, the expression rates of iNOS in CagA-positive cases were consistently higher than those in CagA-negative cases (P<0. 005-P<0. 05). Conclusion Hp and especially CagA are related to the genesis OF of GC and contribute to its development through abnormal expression of iNOS and P53 gene mutation. However, P53 gene mutation is a relatively late event in the development of GC.%目的通过检测慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)、肠上皮化生(IM)、不典型增生(DYS)、胃癌(GC)组织幽门螺杆菌(Hp)和细胞毒素相关蛋白A(CagA)基因、P53、一氧化氮合成酶(iNOS)的表达,探讨Hp、CagA基因、P53、iNOS与胃癌相关性及其参与胃癌形成的可能机制.方法应用快速尿素酶试验和组织切片革兰氏染色和血清HpCagA抗体检测Hp表达,用PCR检测HpCagA基因表达,用免疫组化SP法检测上述组织的突变P53蛋白、iNOS 表达.结果 CSG、CAG、IM、DYS、GC组织中Hp检出率分别为46.7%、67.2%、70.0%、75.3%和53.8%,相应组织中HpCagA检出率分别为34.3%、59.0%、65.7%、69.1%和76.8%,GC组Hp感染率与DYS组相比差异显著(P＜0.05),而CAG、IM、DYS组与CSG组Hp感染率相比差异显著(P＜0.05).IM、DYS、GC组CagA+株感染率则高于CSG组(P＜0.01-P＜0.05),GC组CagA+株感染率则高于CAG组(P＜0.05).从CSG到GC胃粘膜演变中,CagA基因阳性组中的突变P53、iNOS表达逐渐升高;除CSG外,CAG、IM、DYS、GC组CagA基因阳性组突变P53表达明显高于CagA基因阴性组突变P53表达(P＜0.005-P＜0.05);CSG、CAG、IM、DYS、GC组CagA基因阳性组iNOS表达均高于CagA基因阴性组iNOS表达(P＜0.005-P＜0.05).结论 Hp特别是CagA基因与胃癌形成有关,Hp、CagA引起iNOS表达增高,P53基因突变,在形成胃癌中发挥作用,但P53基因突变在胃癌形成中属于较晚期事件.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2013(022)003【总页数】6页(P260-265)【关键词】幽门螺杆菌;细胞毒素相关蛋白A基因;胃癌;胃炎;肠化生;P53基因;iNOS【作者】汪强武;王启之;于东红;燕善军;周蕾;吴炎;田怡;承泽农【作者单位】蚌埠医学院第一附属医院消化科,安徽233004;蚌埠医学院第一附属医院消化科,安徽233004;蚌埠医学院病理学教研室,安徽,233003;蚌埠医学院第一附属医院消化科,安徽233004;蚌埠医学院病理学教研室,安徽,233003;广东省深圳市南山区中心医院消化科,深圳,518052;上海市闵行区中心医院消化科,上海,201100;蚌埠医学院病理学教研室,安徽,233003【正文语种】中文【中图分类】R735.2胃癌是最常见的恶性肿瘤，探讨胃癌的病因学和发病机制一直是科研工作者研究热点。
幽门螺杆菌相关性胃疾病患者末梢血中Hp-CagAIgG的检测
幽门螺杆菌相关性胃疾病患者末梢血中Hp-CagAIgG的检测张玲霞;张沥;刘永国;张宁霞【期刊名称】《临床内科杂志》【年(卷),期】1999(016)002【摘要】目的了解细胞毒素相关蛋白A在Hp相关性胃疾病中的检出情况,并对所采用的方法进行评价.方法采用斑点金免疫渗滤试验(DIGFA),对168例胃粘膜活检组织快速尿素酶试验、PCR检测及Warthin-Starry染色任二项Hp阳性者的末梢血进行Hp-CagAIgG检测.结果 168例Hp阳性者中,142例Hp-CagAIgG阳性(84.52%),其中慢性浅表性胃炎65.63%(21/32),慢性萎缩性胃炎78.57%(33/42),十二指肠球部溃疡94.74%(36/38),胃溃疡91.67%(33/36),胃癌95%(19/20).结论DIGFA能够快速诊断CagA阳性Hp感染,与ELISA法相比除具有较高的特异性及敏感性外,还具有简便、快速、准确等特点.【总页数】2页(P82-83)【作者】张玲霞;张沥;刘永国;张宁霞【作者单位】陕西省西安市中心医院;陕西省西安市中心医院;陕西省西安市第一医院,710003;陕西省西安市中心医院【正文语种】中文【中图分类】R5【相关文献】1.探讨口腔幽门螺杆菌（HP）感染与胃HP感染的相关性及其对根除胃HP治疗的影响 [J], 冯运生2.重庆市渝北区城乡居民胃相关性疾病患者感染幽门螺杆菌细胞毒素相关基因分布特征 [J], 周洪;袁伟;李琼;梁英格3.幽门螺杆菌相关性胃疾病端粒酶活性检测和分析 [J], 高华;戴文颖;王兰;董明;袁媛4.cagⅡ在胃十二指肠疾病患者幽门螺杆菌中的检出率及其与幽门螺杆菌相关性疾病的关系 [J], 刘炯;许国铭;龚燕芳;屠振兴;李兆申;纪徐淮5.血清胃蛋白酶原联合肿瘤坏死因子-α检测在幽门螺杆菌相关性胃疾病诊断中的意义 [J], 边春红;梁乐;王永刚;尚杰;郭胜香;潘玥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A在脑梗死中的作用
幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A在脑梗死中的作用张淼;王世民【期刊名称】《中风与神经疾病杂志》【年(卷),期】2006(23)4【摘要】目的探讨幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A(Cag-A)与脑梗死发生的关系.方法使用酶联免疫法测定100名患者和50名健康对照者Cag-A抗体,并对脑梗死患者检测CagA-HP-IgG阳性及阴性情况下颈动脉斑块和脑梗死相关因素水平.结果脑梗死组血清CagA-HP-IgG阳性率为62%,而对照组为38%,两组相比有显著性差异(P＜0.05).脑梗死组CagA-HP-IgG阳性100%存在颈动脉斑块;而CagA-HP-IgG阴性者仅55%存在颈动脉斑块,两者之间存在显著性差异(P＜0.05).CagA-HP-IgG阳性的脑梗死患者CRP水平及血纤维蛋白原水平均显著高于CagA-HP-IgG阴性者(P＜0.05).结论 Cag-A阳性菌株感染与脑梗死的发生有关,是其发病的危险因素.【总页数】2页(P425-426)【作者】张淼;王世民【作者单位】天津市环湖医院神经内科,天津,300060;天津市环湖医院神经内科,天津,300060【正文语种】中文【中图分类】R74【相关文献】1.幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与脑梗死的关系 [J], 朱敏姿;徐彬2.中青年脑梗死患者幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A阳性率及血清同型半胱氨酸水平的变化 [J], 张瑞彪;李莉娜;孙建光3.幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与动脉粥样硬化性脑梗死的关系 [J], 吕建萌;袁婕;雷琦;潘雅娟;宋允章;杨谦4.幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A在特发性血小板减少性紫癜发病机制中的作用[J], 雷瑚仪;赵谢兰5.老年脑梗死患者血清细胞毒素相关蛋白阳性幽门螺杆菌抗体、内皮素以及超敏C-反应蛋白的表达及其相关性分析 [J], 李莉娜;李素花;付唆林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌细胞毒素的鉴定方法
幽门螺杆菌细胞毒素的鉴定方法
王化冰;董秀云
【期刊名称】《北京大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2000(032)006
【摘要】目的:探讨幽门螺杆菌临床分离株的毒素鉴定方法.方法:临床分离幽门螺杆菌HB1菌株,以国际标准株NCTC 11637(VacA+ CagA+)和NCTC
11639(VacA- CagA+)为参照,运用细胞培养、PCR、Western blot等技术对HB1进行细胞毒素鉴定.结果:HB1菌株可诱导HeLa细胞发生空泡变性,经PCR检测含cagA基因,Western blot显示87×103及130×103处有蛋白条带.结论:HB1菌株为VacA+ CagA+菌株.
【总页数】3页(P564-566)
【作者】王化冰;董秀云
【作者单位】卫生部北京医院消化科;北京大学第三医院消化科,北京,100083
【正文语种】中文
【中图分类】R939.1
【相关文献】
1.定量检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因A方法的建立 [J], 阎小君;张沥;韩锋产
2.幽门螺杆菌培养方法的改良和鉴定 [J], 刘代华;罗宜辉;梁健成;练海燕;李运泽;黄义昆
3.幽门螺杆菌培养和鉴定方法探讨 [J], 毛德超;王宁;陶娅琳;王峰;包锐;王星花;冷丽;
钱龄蓉
4.定量检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因A方法的建立 [J], 阎小君;张沥;韩锋产;江梅;苏成芝
5.应用PCR-RFLP方法鉴定幽门螺杆菌菌株 [J], 杨学文;王礼文;李克涓;陈云峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A及细胞毒素相关蛋白A研究进展
幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A及细胞毒素相关蛋白A研究
进展
吴炜景;赵亚刚
【期刊名称】《实用医学杂志》
【年(卷),期】2008(24)19
【摘要】1983年．澳大利亚学者Marshall和Warren从慢性胃炎患者的胃黏膜活检标本中分离出幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，以下简称耶），成为胃细菌学研究领域的重要突破。
25年来，人们对坳从基础到临床进行了深入细致的研究，逐步认识到咖与慢性胃炎、消化性溃疡、胃MALT淋巴瘤、胃癌以及某些胃肠道外疾病有密切关系。
1994年，世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）正式将耶列为Ⅰ类（即肯定的）致癌原。
据2000年资料统计．全球每年约有65万人因胃癌死亡．
【总页数】3页(P3439-3441)
【作者】吴炜景;赵亚刚
【作者单位】广州中医药大学;510010,广州军区广州总医院
【正文语种】中文
【中图分类】R3
【相关文献】
1.幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A、细胞毒素相关蛋白E、细胞空泡毒素A基因型与上消化道疾病的关系 [J], 蒋闵仁;黄英;宋佳鸿;叶圆圆
2.抗Ⅰ型幽门螺杆菌IgY和黄连及太子参联合抗活性空泡细胞毒素A+和细胞毒素相关蛋白A+幽门螺杆菌的实验 [J], 李娟;傅颖媛;黎健
3.细胞毒素相关基因A及细胞毒素相关蛋白A研究进展 [J], 胡永敏
4.不同地区0～14岁儿童幽门螺杆菌及其细胞毒素相关基因蛋白A阳性菌株感染状况 [J], 卢文洁;李林;郭莉;刘健超;陈婉玲;曾厚洋;吕建楠
5.幽门螺杆菌空泡细胞毒素与细胞毒素相关蛋白 [J], 郭飞;胡伏莲;贾博琦
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滴金法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A 抗体试剂盒的研制及应用侯 瑜1,张 菊2,李质馨1,田洪艳1,刘晓冬1,徐 冶1(1.第四军医大学吉林军医学院组胚教研室,吉林 132013;2.第四军医大学全军基因诊断技术研究所,陕西西安 710033)摘要:目的 建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌(Hp )细胞毒素相关蛋白A (CagA )抗体的胶体金免疫渗滤法(DIGFA )。
方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记葡萄球菌A 蛋白(SPA ),将重组的CagA 抗原固定于硝酸纤维素膜上,制成免疫渗滤试剂盒。
血清中抗CagA 抗体与试剂盒上金标记物及硝酸纤维素膜上的固相抗原结合后,形成肉眼可见的红色斑点。
结果 用DIGFA 与酶联免疫吸附试验(EL ISA )试剂盒对比检测了326份血清标本中抗CagA 抗体,本方法的特异性为95.8%,敏感性为97.3%,两种方法符合率为96.6%。
结论 DIGFA 检测血清中的抗CagA 抗体特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值。
关键词:幽门螺杆菌;细胞毒素相关蛋白A ;胶体金;渗滤法;抗体中图分类号:R573 文献标识码:B 文章编号:176128259(2003)0520520202收稿日期:2002210216 修回日期:2003201202作者简介:侯瑜(19642),女(汉族),学士,实验师. 幽门螺杆菌(helicobacter pylori ,Hp )的发现是20世纪80年代医学史的重大事件,它为认识某些胃肠疾病的病因及发病机制带来了新的概念。
现已确认HP 是慢性胃炎的主要致病因子,与消化性溃疡的发生密切相关1,世界卫生组织已将其列为一类致癌因子。
目前,根据HP 菌株是否产生细胞空泡毒素(vaculating cytotoxinA ,VacA ),将HP 分为毒性株与非毒性株两大类。
产毒株HP 除产生VacA 外,还往往含有细胞毒素相关蛋白基因A (cytotoxin associated gene A ,CagA ),CagA 可能与VacA 的转录、折叠、运转及功能有关2,3。
Ca 2gA +HP 菌株占HP 的50%以上,它与消化性溃疡病的发生密切相关,与胃癌的关系也很密切。
目前国内尚缺乏CagA 阳性感染的流行病学资料,HP 感染的治疗方案复杂,早期诊断治疗效果好。
因此,早期诊断CagA +HP 感染具有重要意义,而建立CagA +HP 阳性感染的准确检测方法更显得十分必要。
1 材料和方法1.1 材料 氯金酸(HAuCl ·Cl 3·4H 2O ,成都化学试剂厂产品);葡萄球菌A 蛋白(SPA ,上海申索生物制品公司);细胞毒素相关蛋白A (CagA ,本所制备的基因工程产品);酶联免疫吸附试验检测抗CagA 2IgG 试剂盒(上海晶莹生物制品公司);血清标本(第四军医大学西京医院消化科门诊及西安市中心医院消化内科提供);低温高速离心机(德国Z323K );点膜器(美国bio 2Dot 公司)。
1.2 方法1.2.1 15nm 胶体金的制备 参照文献4\〗进行。
步骤为:去离子水溶解氯金酸,使其终浓度为0.2g ·L -1,煮沸后每100mL 加入10g ·L -1柠檬酸三钠水溶液4mL ,继续煮沸7min ,待冷却后电镜观察胶体金的颗粒直径和形状。
1.2.2 免疫胶体金的制备 取粒直径为15nm 的胶体金溶液100mL ,用0.1m ol ·L -1K 2CO 3调至pH6.2,在搅拌状态下加入SPA (1g ·L -1)0.6mL ,继续搅拌10min ;加入50g ·L -1BSA 10mL ,继续搅拌5min 。
4℃下3000r ·min -1离心5min ,弃沉淀,上清液以12000r ·min -1离心15min ,小心吸弃上清液,沉淀即为制备的胶体金。
用20mL 悬浮液悬浮沉淀,4℃保存待用。
1.2.3 免疫渗滤试剂盒的制备 试剂盒由吸水材料、硝酸纤维膜和渗滤装置三部分组成。
在硝酸纤维素膜上固相CagA 抗原,待干后用50g ·L -1BSA 封闭2h ,用0.01mol ·L -1PBS 洗涤3次,干燥后依次(吸水材料、滤纸、硝酸纤维素膜)装入自制的渗滤装置,加干燥剂封闭,4℃保存。
1.2.4 抗HP 2CagA IgG 的检测 以新鲜血清最好,用0.01mol ·L -1PBS 先将硝酸纤维素膜活化,再将0.015～0.03mL血清滴加在硝酸纤维素膜上,待完全渗入后,用0.01m ol ·L -1PBS 洗涤三滴,将已标记好的胶体金滴加在硝酸纤维素膜上,待完全渗入,再用0.01mol ·L -1PBS 洗涤三滴即可。
结果判定:以试剂盒硝酸纤维素膜上出现红色致密斑块且边缘清晰者为阳性,反之则为阴性。
结果确定时间为3～5min 。
2 结 果2.1 胶体金直径的电镜观察 用预先处理好的覆盖有For 2mvar 膜的镍网浸入胶体金溶液中,取出放置空气干燥,然后在透射电镜下观察,可见胶体金颗粒大小均匀一致,颗粒直径为15nm 。
2.2 试剂盒的特异性及敏感度 采用本实验所建立的DIG 2FA 与EL ISA 试剂盒对比检测西京医院及市中心医院326例患者血清中的抗HP 2CagA IgG ,结果见表1。
第24卷第5期2003年10月西安交通大学学报(医学版)J our nal of Xi πan J iaot ong U niversity (Medical Sciences )V ol.24N o.5Oct.2003表1 DIGFA与EL ISA检测结果比较Table1 The comparison of testing results between DIGFA and EL ISADIGFAEL ISA+-Total+1786184-5137142Total183143326 由表1可见,若以EL ISA检测HP2CagA抗体试剂盒作为参照标准,则DIGFA的特异性为95.8%,敏感度为97.3%,总符合率为96.6%。
2.3 稳定性试验 DIGFA试剂盒于4℃下放置6个月,每月检测抗HP2CagA IgG阳性及阴性血清各50份,该试剂盒的各种性能指标均稳定。
将DIGFA试剂盒于37℃恒温箱内放置6d,做热稳定性试验,与放置4℃的试剂盒对照,结果无显著差异。
3 讨 论研究表明,CagA阳性HP感染与上消化道疾病的关系更为密切,来自亚太地区的研究提示,HP感染者中,CagA阳性HP感染率相当高5。
目前公认的细菌培养、呼气试验(UBT)、组织染色等创伤性检测方法虽具有高的敏感性与特异性,可作为感染诊断标准6,7。
但上述各种方法均有患者痛苦大、所需仪器昂贵、操作步骤烦琐费时、需要专业人员等不足。
其中呼气试验对患者和医务人员以及周围环境的污染尚未解决8。
为此无创伤性检测HP感染是诊断该疾病的发展方向。
近几年,CagA阳性HP感染的诊断方法已有很大进展,特别是血清学检测方法,因其为非侵入性检测手段并且经济、简便、快速而倍受重视。
E L ISA法虽有较高的特异性和敏感性被临床认可,但仍需要专业人员和仪器,且操作时间长。
为适应大范围的CagA阳性HP感染的早期诊断,建立经济、高效、特异性强、敏感性高的检测方法已迫在眉睫。
而我们研制的该方法,经过临床检测具有以下特点:①敏感性高:由于该实验中所有样品均是逐滴滴加在硝酸纤维素膜上,使抗原、抗体充分结合从而提高了敏感度,与E L ISA法的敏感度相近。
②特异性强:本试剂盒采用高活性的重组CagA纯品做抗原,极大地提高了检测的特异性。
胶体金及免疫胶体金的性能,也是影响特异性的一个重要因素。
我们结合有关文献9,10,经过不断的试验,制备了适合本方法的直径为15nm的胶体金颗粒,并最大限度地提高标记效率。
③稳定性及重复性好:免疫胶体金的稳定性是影响试剂盒质量的一个重要因素。
免疫胶体金的制备,是金颗粒表面吸附蛋白质以形成牢固结合的过程。
该过程受酸碱度、离子强度、免疫胶体金的浓度、温度等因素的影响,其中主要取决于pH值。
为此,我们优化了胶体金标记的最佳条件和免疫胶体金悬浮的最佳配方。
④操作快速、简便:该试剂盒结构简单,易于判断结果,检测时间仅需3～5min,无需任何设备。
鉴于该方法的诸多优点,因而具有广泛的应用价值,值得推广。
参考文献:[1]庄小强,林三仁.幽门螺杆菌与胃癌的研究进展J.世界华人消化杂志,2000,8(2):2206-2207.[2]韩锋产,阎小君,侯瑜,等.定量检测HP2cagA基因内参标膜板构建及测序J.世界华人消化杂志,2000,8(2):131-134.[3]周建嫦,徐采朴,张建中.幽门螺杆菌cagA/CagA分子生物学研究进展J.世界华人消化杂志,2001,9(5):560-562.[4Roe CD,Court o y PJ,Baudhui m P.A model of p rotein colloidal gold interaction J.J Hist oche m C yt oche m,1987,35:1191-1198.[5Maeda S,O gura K,Yoshida H,et al.Major virulence f act ors, VagA a nd CagA,are commonly p ositive in Helicobacter p ylori isolates in J apa n J.Cut,1998,42:338-343.[6]陈敏章,胡伏莲,周殿元.幽门螺杆菌感染的基础与临床M.北京:中国科学技术出版社,1997.393-402.[7]吕宗舜,黄乃侠,吴琳,等.试条法监测幽门螺杆菌感染J.中华医学检验杂志,1999,22(3):169-170.[8]李冰根.检测幽门螺杆菌感染只需验血J.世界华人消化杂志,2000,8(1):103.[9Wa n g BL,Scopsi L,Martvig M,et al.Si mplified p urificationa nd testing of colloridal gold p robes J.Hist oche mist r y,1985,83:109-115.[10Seno S,A kite M,Hsuch CL.A new met hod of t he i mmunoc yt o2 che mical detection of cellular a ntigens f or light a nd elect ron mi2 croscop y J.Hist oche mist r y,1989,91:449-454.(编辑 邱 芬)(上接第512页)作用有一定的方向性,即朝近中方向,与牙齿在无近远中邻牙的情况下牙齿向近中移动的发生密切相关;同时牙移动路径上有无阻力及越隔纤维对牙齿的牵拉,对牙齿的移动方向也起着关键作用。