实验三细菌的分布与外界因素对细菌的影响

标准纸片扩散法（Ｋ－Ｂ）
原理：将含有定量抗生素的滤纸片贴在已接 种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物 在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗生 素的浓度呈对数减少,在药物浓度到达的范 围内对此药敏感的细菌不能生长而形成透 明的抑菌圈，不同细菌形成的抑菌圈各不 相同，抑菌圈的大小反映了测试菌对该药 的敏感程度，并与该药物对测试菌的最低 抑菌浓度（MIC）呈负相关。
实验目的
１.掌握皮肤消毒方法． ２.掌握标准纸片扩散法（Ｋ－Ｂ）的原理、操作 方法、结果的判读与解释及临床意义． ３.掌握纸片扩散法的质量控制方法． ４.熟悉人体皮肤、咽喉部细菌检查方法． ５.熟悉紫外线灭菌方法． ６.了解空气、水中细菌的检查方法． ７.了解高压蒸汽灭菌方法．
试验内容
一、细菌的分布检查 １.空气中细菌的检查 ２.水中细菌的检查 ３.皮肤消毒试验 ４.飞沫中细菌的检查 二、外界因素对细菌 的影响 １.高压蒸汽灭菌法 ２.紫外线杀菌试验 ３.药物敏感试验
一、细菌的分布检查
了解微生物在自然界及正常人体的分布， 对于在医疗实践及某些科学实验中树立无 菌观念有着重要的意义。
材料
普通琼脂平板 血琼脂平板 MH琼脂平板 ３７℃温箱 无菌棉签等
普通琼脂平板 血琼脂平板
空气中细菌的检查（示教）
左边培养皿菌落是未被过滤空气中的 细菌，右边是经过滤空气中留有的少 量细菌
材 料
菌种：葡萄球菌、大肠杆菌菌液 培养基：水解酪蛋白琼脂（MH琼脂） 试剂：各种抗菌药物纸片（PEN、 GEN、STR、CHL)
方 法
用灭菌棉试蘸取试验菌涂抹 在MH培养基表面，要均 匀涂抹3次，室温下待干燥
PEN GEN
以无菌镊子(烧灼灭菌，注 意镊子要冷却）取各抗生 素纸片贴于表面
STR
CHL
当外界环境条件发生巨大改变，可导致 微生物的主要代谢活动发生障碍，生长 停顿，甚至死亡。
1.高压蒸汽灭菌法（示教）
原理：利用密闭的金属锅，密闭加
热使锅内蒸汽压力增大，温度随之 升高，杀菌力增强。
高压蒸汽灭菌器
手提式高压蒸 汽灭菌器
高压蒸汽灭菌器
构造：高压蒸汽灭菌器 是一个双层的金属圆 筒，两层之间盛水， 外层坚厚，其上方或 前方有金属厚盖。盖 旁附有螺旋，借以紧 闭盖门，使蒸汽不能 外溢，因而蒸汽压力 升高，其温度亦相应 的增高。
培养
各纸片中心距>24mm,纸片距平板边缘 应>15mm
结果判断
用毫米尺量取抑菌 圈直径，参考试验指 导表3-6的标准判读 结果，按敏感（S）、 中介（I）、耐药（R） 报告。
材料分配
分组 两人一组
菌种
金葡菌、大肠杆菌各一支
2块普通平板/组（皮肤细菌的检查、紫 外线杀菌试验）
培养基
2块MH平板/组（药物敏感试验） 1块血平板/组（咽喉部细菌的检查）
使用方法
Байду номын сангаас
1.加水至外筒内，被灭菌物品放入内筒。 2.盖上灭菌器盖，拧紧螺旋使之密闭。 3.加热，同时打开排气阀门，排净其中冷空气，关闭 排气阀。继续加热，待压力表渐渐升至所需压力时 (103.4kPa,121.3℃)，保持压力和温度维持15～ 30min。 4.待压力自行降至零时，慢慢打开排气阀，排除余气， 开盖取物。切不可在压力尚未降低为零时突然打开 排气阀门，以免瓶内液体等冲出外溢。
缺点
穿透能力弱
材 料
普通琼脂平板 18-24h细菌培养物 紫外线灯等
方 法
细菌接种于普通琼脂平板上
打开皿盖，放置于紫外灯下 约30cm处，用盖子盖住半 边做对照，照射半小时后盖 好盖子。 培养
药物敏感试验
目前临床微生物实验室进行药 敏试验的方法主要有纸片扩散法、 稀释法、抗生素浓度法、自动化 仪器等
纸片法药敏试验结果解释
抗菌药物
青霉素 庆大霉素 链霉素 氯霉素
耐药
≤28 ≤ 12 ≤ 11 ≤ 12
中介
－ 13-14 12-14 13-17
敏感
≥29 ≥ 15 ≥ 15 ≥ 18
用途
凡耐高温和潮湿的物品，如培养基、生 理盐水、衣服、纱布、棉花、敷料、玻 璃器材、传染性污物等都可应用本法灭 菌。
2、紫外线杀菌试验
原理：通过紫外线的照射，破坏及改变
微生物的DNA结构，使细菌当即死亡或 不能繁殖后代，达到杀菌的目的。
特 点
优点
简单便捷、广谱 高效、无二次污染、 便于治理和实现自 动化等优点。
水中细菌的检查（示教）
取水样1ml
注入无菌空平皿内 加15mL已融化并冷却至约45℃的培养基混匀
倒置于３７℃温箱培养18-２４h后观察结果
皮肤细菌的检查：
1.分区标记 2.接种 3.培养
空白对照
消毒前
常用的皮肤消毒剂 消毒后
飞沫中细菌的检查
用咳碟法 将咽喉部 细菌接种 于血平板
二、外界因素对细菌的影响