《中国药典》2020版—单抗分子大小变异

3127 单抗分子大小变异
体测定法（CE-SDS 法）
本法系采用十二烷基硫酸钠毛细管电泳
（CE-S D S）紫外检测方法，在还原和非还原条件下，依据分子量大小，按毛细管电泳法（通则0542），定量测定重组单克隆抗体产品的纯度。

毛细管电泳系统
(1)检测器
紫外或二极管阵列检测器。

波长：214 nm（紫外检测器）或 220 nm（二极管阵列检测器）。

(2)毛细管非涂层-熔融石英毛细管（内径50μm），
选择合适长度以满足系统适应性要求。

试剂
(1)S D S样品缓冲液:含1%S D S的0.04m o l/L磷
酸盐溶液（p H6.5）或等效缓冲液。

(2)SDS 凝胶分离缓冲液:含0.2% SDS 缓冲液
（pH8.0）含有适当的亲水性聚合物作为分子筛或等效缓冲液。

(3)0.1m ol/L盐酸溶液或其他适宜浓度。

(4)0.1m ol/L氢氧化钠溶液或其他适宜浓度。

(5)2-巯基乙醇。

(6)烷基化溶液0.8m ol/L的碘乙酰胺水溶液，可称
取约74mg 碘乙酰胺，加入500μL超纯水溶解，新鲜制备，避免光照。

(7)系统适用性对照品溶液终浓度 1mg/mL。

供试品制备
(1)供试品溶液制备用 SDS 样品缓冲液将供试品
稀释至 1mg/mL。

样品缓冲液以相同稀释倍数稀释，为空白对照。

(2)非还原供试品溶液制备取供试品溶液（1
m g/m L）95μL，加入0.8m ol/L碘乙酰胺水溶液5μL，涡旋混匀。

取空白对照95μL，加入 0.8 m ol/L碘乙酰胺水溶液5μL，涡旋混匀，为非还原空白对照。

(3)还原供试品溶液制备取供试品溶液（1 mg/mL）
95μL，加入 2-巯基乙醇5μL，涡旋混匀。

取空白对照95μL，加入2-巯基乙醇5μL，涡旋混匀，
为还原空白对照。

将供试品溶液和空白对照在68~72℃孵育，非还原供试品溶液孵育 5 分钟，还原供试品溶液孵育 15 分钟。

冷却至室温后每分钟 6000 转离心 1 分钟。

从样品管中分别取出75μL至样品瓶中，立即进行分析。