致泻大肠埃希氏菌检验 编制说明

《食品安全国家标准食品微生物学检验
致泻大肠埃希氏菌检验》(征求意见稿)编制说明
一、标准起草的基本情况（包括简要的起草过程、主要起草单位、起草人等）；
1、简要起草过程
⑴确立标准制定的基本原则，收集国际和国内致泻大肠埃希氏菌检验方法的新标准。

⑵比较与研究我国原国家标准及国际标准相关内容，并结合方法的研究工作，制定出标准的讨论稿。

⑶将标准讨论稿提交专家组审查。

⑷发出《征求意见稿》征求意见，汇总专家意见，根据专家意见对标准文本进行完善。

⑸提交《食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》（送审稿）、《编制说明》和《征求意见汇总表》供食品安全国家标准审评委员会审议。

2、标准起草单位、起草人
本标准起草单位为河南省疾病预防控制中心，协助单位有国家食品安全风险评估中心、江西省疾病预防控制中心、黑龙江省疾病预防控制中心和陕西省疾病预防控制中心。

主要起草人廖兴广、张秀丽、何晓青、郭运昌，参加人员有孙吉昌、李薇薇、遇晓杰、裴晓燕、炊慧霞、白莉、马国柱、崔莹。

二、标准的重要内容及主要修改情况
1、标准的重要内容
本标准正文包括8部分，第1部分为范围，第2部分为术语和定义、缩略语，第3部分为设备和材料，第4部分培养基和试剂，第5部分为检验程序，第6部分为操作步骤，第7和8部分为附录A和附录B。

附录A培养基和试剂为本标准的规范性附录，附录B五种致泻大肠埃希氏菌PCR鉴定方法为本标准的资料性附录。

2、修订内容
本标准与GB/T 4789.6-2003相比，主要修订了如下内容：
（1）修改了标准的中英文名称。

依据国家标委会统一要求，由2003版的国家食品卫生标准改为食品安全国家标准，标准属性由推荐性标准改为强制性标准，英文相应修改。

（2）修改了标准的范围：鉴于食物中毒样品的特殊性，现场采样有可能样品量不够、样品种类繁多，不是都能按照本标准执行，故删去适用范围中“食物中毒样品”。

（3）增加了术语和定义、缩略语。

标准中引入致泻大肠埃希氏菌PCR鉴定方法，基于5类致泻大肠埃希氏菌特征性毒力基因的检测，对标准中出现的术语和基因名词进行说明和解释，有助于标准使用者理解。

（4）按照食品安全国家标准微生物检验方法统一格式，删除了规范性引用文件。

（5）修改了设备和材料。

增加了全自动微生物生化鉴定系统、PCR仪、水平电泳仪和凝胶成像仪；删除了与修改后文本中试验无关的仪器和实验动物。

（6）修改了培养基和试剂。

删除了赖氨酸脱羧试验培养基、Honda产毒培养基、Elek
培养基、产毒大肠埃希氏菌LT和ST酶标诊断试剂盒、LT抗毒素等。

（7）修改了致泻大肠埃希氏菌检验程序。

修改后的检验程序包括检验处理、预增菌、增菌、选择性平板分离、生化试验、PCR确认试验、血清学试验（选做项目）和报告。

修改后的检验程序更加清晰明了。

（8）修改了增菌中检样的处理，增加了拍击式均质器。

（9）增加了MAC和EMB平板上E.coli的菌落特征描述，便于初始工作者识别。

（10）修改了在MAC和EMB平板上需要挑取鉴定的菌落数。

原标准要求挑取数个菌落进行鉴定，没有最低数的规定；参照美国FDA/BAM（2011年）Chapter 4A
Diarrheagenic Escherichia coli的规定，要求最少挑取20个菌落进行鉴别。

为了尽量减少遗漏，结合其他肠道致病菌国家标准检验方法和近年全国食品安全风险监测工作手册的规定，挑取不得少于10个菌落进行鉴定。

（11）生化试验中删除了赖氨酸脱羧酶试验。

大肠埃希氏菌大多为赖氨酸脱羧酶阳性，原标准中为了区分EIEC与志贺氏菌和其他致泻大肠埃希氏菌，利用赖氨酸脱羧酶试验、靛基质和动力加以区分。

由于增加了PCR确认试验，可以直接对5种致泻大肠埃希氏菌进行区分。

（12）血清学试验中增加了致泻大肠埃希氏菌包括的主要的O抗原群，并将血清学试验作为选做项目。

随着对致泻大肠埃希氏菌认识的不断深入，通过PCR和基因探针等手段，不断丰富了各种致泻大肠埃希氏菌的血清型别。

在修订版本中，参照丹麦SSI、日本生研和国内大肠埃希氏菌诊断血清说明书，增加了H抗原的鉴定试验。

由于血清型别的鉴定简便易行，在食源性疾病爆发溯源中得以应用。

（13）增加了致泻大肠埃希氏菌PCR方法。

美国FDA Bacteriological Analytical Manual（2011年）Chapter 4A Diarrheagenic Escherichia coli 、丹麦SSI、我国出入境检验检疫行业标准中均采用普通PCR、多重普通PCR和实时荧光定量PCR进行DEC的筛选和鉴定。

（14）删除了原标准中肠毒素试验。

原标准中肠毒素试验用来检测和鉴别产肠毒素大肠埃希氏菌，试验过程繁琐，并需要实验动物才能进行，按照实验室生物安全通用要求，应在ABSL-2实验室内操作。

引入快速、灵敏的PCR鉴定方法解决了ETEC的鉴别。

（15）增加了附录A和附录B。

附录A培养基和试剂为本标准的规范性附录，附录B五种致泻大肠埃希氏菌PCR鉴定方法为本标准的资料性附录。

三、国际标准情况
美国食品药品监督管理局细菌学分析手册（FDA/BAM，2011年版）FDA Bacteriological Analytical Manual（2011）Chapter 4A Diarrheagenic Escherichia coli、美国农业部USDA /FSIS MLG5B: PCR Platform Instructions, Data Analysis, and Control Results Interpretation for
non-O157 Shiga Toxin-Producing Escherichia coli (STEC) Real-time PCR Assay、丹麦SSI Clinical criteria for DEC examination SSI 2012和加拿大健康保护局PROCEDURE FOR THE DETECTION OF VEROCYTOTOXIN-PRODUCING ESCHERICHIA COLI IN FOOD SAMPLES等，均采用PCR或real-time PCR方法对分离菌株进行鉴定。

美国FDA/BAM（2011年版）Bacteriological Analytical Manual（2011）Chapter 4A Diarrheagenic Escherichia coli 规定了样品增菌后即用PCR方法进行初筛试验，对分离菌株用生化和PCR方法进行鉴定。

四、其他需要说明的事项
无。