马铃薯多酚氧化酶制备
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表2 多酚氧化酶的底物专一性
试管号 酶液 邻苯二 酚 15滴 间苯二 酚 － 对苯二 混匀后保温5～10min，观察 酚 颜色变化 －
1
15滴
2
3
15滴
15滴
－
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15滴
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15滴
4.
底 物 浓 度 的 影 响 按表 3加入各试剂，观察反应现象并记录和分 析 原 因 。
表3 底物浓度的影响
试管号 1 2 3 酶液 5滴 5滴 5滴 邻苯二酚 1滴 10滴 40滴 水 39滴 30滴 － 混匀后保温1min，观察颜色变化
六、实验结果
多酚氧化酶的催化作用（按表1加入各试剂）
1
2
3
1
2
3
加入各试剂后混匀
37℃保温8min
现象：1号试管变成深褐色，2、3号试管颜色无明显变化。 结论：有底物和酶同时存在的情况下才发生反应。
底物的专一性（按表2加入各试剂）
1
2
1
37℃保温9min
2
加入各试剂后混匀
现象：1号试管变成深褐色，2号试管无明显变化。 结论：多酚氧化酶对邻二苯酚有专一性。
四、材料与试剂
1. 马 铃 薯 2.0.1mol/L的 NaF 溶液 : 将 4.2g氟化钠溶于 1000mL 水 中 。 3.0.01mol/L 的邻苯二酚溶液 : 将 1.1g 邻苯二酚溶解 于 1000mL水中 , 用稀 NaOH 调节溶液的 pH值为 6.0,防止其自身的氧化作用。当溶液变成褐色时，应 重新配制。新配制的溶液应贮存于棕色瓶中。 4.pH6.8 的 磷 酸 盐 缓 冲 液 5.0.01mol/L的间苯二酚溶液:将 0.11g间苯二酚溶解 于 100mL 水 中 。 6.0.01mol/L的对苯二酚溶液:将 0.11g对苯二酚溶解 于 100mL 水 中 。 7. 固 体 硫 酸 铵
2.多酚氧化酶的催化作用
按表 1 加入各试剂，观察反应现象并记录和分析原 因
表1 多酚氧化酶的催化作用 水 － 15滴 试管号 1 2 酶液 15滴 15滴 邻苯二酚 15滴 －
混匀后保温5～10min，观察颜色变化
3
－
15滴
15滴
3.
底
物
专
一
性
按表 2 加入各试剂，观察反应现象并记录和分析原因。
5.
酶 浓 度 的 影 响 按表 4加入各试剂，观察反应现象并记录和分 析 原 因 。
表4 酶浓度的影响
试管号 酶液 邻苯二 酚 15滴 水 混匀后保温2min，观察颜色变化
1
15滴
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
－
2
1滴
15滴
14滴
七、思考题
1. 在酶制备过程中加入硫酸铵的目的是什么 ? 2. 该多酚氧化酶的最适 pH 值是多少 ? 为什么 ? 3.通过实验可知哪些因素会影响酶的催化活力 ?
1 2
37℃保温2min
现象：1号试管褐色比2号试管深 结论：酶底物浓度的大小影响多酚氧化酶的催化速率，在一定范围内， 酶浓度越大，催化速率越大
•多酚氧化酶的化学性质
1 2 1 2 加入各试剂后混匀 37℃保温10min 现象：1号试管变成深褐色，2号试管颜色无明显变化。 结论：5%三氯乙酸很明显的降低了多酚氧化酶的活性，为抑制剂。
底物浓度的影响（按表3加入各试剂）
1
2
3
加入各试剂后混匀
1
2
3
37℃保温1min
现象：三个试管颜色颜色发生不同程度加深。1号试管颜色最浅，其次是2号，3号试 管颜色最深。 结论：底物浓度的大小影响多酚氧化酶的催化速率，底物浓度越高，催化速率越快。
酶浓度的影响（按表4加入各试剂）
1 2
加入各试剂后混匀
多酚氧化酶的最适底物是邻苯二酚(儿茶酚)。间苯二酚和对苯二 酚与邻苯二酚的结构相似，它们也可以被氧化为各种有色物质。 酶是生物催化剂，其催化活性易受各种因素的影响，如温度、 pH、底物种类、底物浓度、酶浓度以及抑制剂和蛋白质变性剂等都 会 改 变 其 生 物 催 化 活 性 。
三、实验器材
1. 匀 浆 机 2. 小 刀 ， 纱 布 ， 漏 斗 ， 其 它 玻 璃 器 皿 3. 离 心 机 4. 冰 箱 5. 恒 温 水 浴
马铃薯多酚氧化酶制备 及性质实验
一、实验目的
1. 学习从组织细胞中制备酶的方法。
2. 掌握多酚氧化酶的作用及各种因素对其作用的影响
二、实验原理
多酚氧化酶是一种含铜的酶，其最适pH值为6～7。由多酚氧化 酶催化的反应，如以邻苯二酚为底物，可以被氧化形成邻苯二醌。由 多酚氧化酶催化的氧化还原反应可通过溶液的颜色的变化鉴定，这个 反应在自然界中是常见的，如去皮的马铃薯和水果变成褐色就是由于 该酶作用的结果.
五、操作方法
1. 多 酚 氧 化 酶 的 制 备 每三个小组一起，称取150g马铃薯(新马铃薯可以不去皮)，切块后放 入 匀 浆 机 ， 加 入 150mLNaF 溶 液 ， 匀 浆 后 用 四 层 纱 布 过 滤 。 各组分别量取 50mL滤液置离心管中，于 3500 转 /min离心 5 ～ 10min， 取上清夜，加入固体硫酸铵 16g，溶解，于 4℃ 放置 30min，于 3500 转/min离心15min，倒掉上清液，沉淀用15mL pH6.8的磷酸盐缓冲 液溶解，即为粗酶液，含有马铃薯多酚氧化酶.
•氢离子浓度的影响
1 2 3 4 5
1 2
3 4 5
加入各试剂后混匀 37℃保温5min 注释：1、2、3、4、5号管的pH分别为1、3、5、7、9 现象：1、2、3号试管，颜色依次加深，4号试管颜色最深，5号试管次之。 结论：pH小于最适pH时，pH越大，酶活性越高；pH等于最适pH时活性最 大；超过最适pH时，酶活性又开始降低。此多酚氧化酶的最适pH在7.0左右
试管号 酶液 邻苯二 酚 15滴 间苯二 酚 － 对苯二 混匀后保温5～10min，观察 酚 颜色变化 －
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底 物 浓 度 的 影 响 按表 3加入各试剂，观察反应现象并记录和分 析 原 因 。
表3 底物浓度的影响
试管号 1 2 3 酶液 5滴 5滴 5滴 邻苯二酚 1滴 10滴 40滴 水 39滴 30滴 － 混匀后保温1min，观察颜色变化
六、实验结果
多酚氧化酶的催化作用（按表1加入各试剂）
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加入各试剂后混匀
37℃保温8min
现象：1号试管变成深褐色，2、3号试管颜色无明显变化。 结论：有底物和酶同时存在的情况下才发生反应。
底物的专一性（按表2加入各试剂）
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加入各试剂后混匀
现象：1号试管变成深褐色，2号试管无明显变化。 结论：多酚氧化酶对邻二苯酚有专一性。
四、材料与试剂
1. 马 铃 薯 2.0.1mol/L的 NaF 溶液 : 将 4.2g氟化钠溶于 1000mL 水 中 。 3.0.01mol/L 的邻苯二酚溶液 : 将 1.1g 邻苯二酚溶解 于 1000mL水中 , 用稀 NaOH 调节溶液的 pH值为 6.0,防止其自身的氧化作用。当溶液变成褐色时，应 重新配制。新配制的溶液应贮存于棕色瓶中。 4.pH6.8 的 磷 酸 盐 缓 冲 液 5.0.01mol/L的间苯二酚溶液:将 0.11g间苯二酚溶解 于 100mL 水 中 。 6.0.01mol/L的对苯二酚溶液:将 0.11g对苯二酚溶解 于 100mL 水 中 。 7. 固 体 硫 酸 铵
2.多酚氧化酶的催化作用
按表 1 加入各试剂，观察反应现象并记录和分析原 因
表1 多酚氧化酶的催化作用 水 － 15滴 试管号 1 2 酶液 15滴 15滴 邻苯二酚 15滴 －
混匀后保温5～10min，观察颜色变化
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底
物
专
一
性
按表 2 加入各试剂，观察反应现象并记录和分析原因。
5.
酶 浓 度 的 影 响 按表 4加入各试剂，观察反应现象并记录和分 析 原 因 。
表4 酶浓度的影响
试管号 酶液 邻苯二 酚 15滴 水 混匀后保温2min，观察颜色变化
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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七、思考题
1. 在酶制备过程中加入硫酸铵的目的是什么 ? 2. 该多酚氧化酶的最适 pH 值是多少 ? 为什么 ? 3.通过实验可知哪些因素会影响酶的催化活力 ?
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37℃保温2min
现象：1号试管褐色比2号试管深 结论：酶底物浓度的大小影响多酚氧化酶的催化速率，在一定范围内， 酶浓度越大，催化速率越大
•多酚氧化酶的化学性质
1 2 1 2 加入各试剂后混匀 37℃保温10min 现象：1号试管变成深褐色，2号试管颜色无明显变化。 结论：5%三氯乙酸很明显的降低了多酚氧化酶的活性，为抑制剂。
底物浓度的影响（按表3加入各试剂）
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加入各试剂后混匀
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37℃保温1min
现象：三个试管颜色颜色发生不同程度加深。1号试管颜色最浅，其次是2号，3号试 管颜色最深。 结论：底物浓度的大小影响多酚氧化酶的催化速率，底物浓度越高，催化速率越快。
酶浓度的影响（按表4加入各试剂）
1 2
加入各试剂后混匀
多酚氧化酶的最适底物是邻苯二酚(儿茶酚)。间苯二酚和对苯二 酚与邻苯二酚的结构相似，它们也可以被氧化为各种有色物质。 酶是生物催化剂，其催化活性易受各种因素的影响，如温度、 pH、底物种类、底物浓度、酶浓度以及抑制剂和蛋白质变性剂等都 会 改 变 其 生 物 催 化 活 性 。
三、实验器材
1. 匀 浆 机 2. 小 刀 ， 纱 布 ， 漏 斗 ， 其 它 玻 璃 器 皿 3. 离 心 机 4. 冰 箱 5. 恒 温 水 浴
马铃薯多酚氧化酶制备 及性质实验
一、实验目的
1. 学习从组织细胞中制备酶的方法。
2. 掌握多酚氧化酶的作用及各种因素对其作用的影响
二、实验原理
多酚氧化酶是一种含铜的酶，其最适pH值为6～7。由多酚氧化 酶催化的反应，如以邻苯二酚为底物，可以被氧化形成邻苯二醌。由 多酚氧化酶催化的氧化还原反应可通过溶液的颜色的变化鉴定，这个 反应在自然界中是常见的，如去皮的马铃薯和水果变成褐色就是由于 该酶作用的结果.
五、操作方法
1. 多 酚 氧 化 酶 的 制 备 每三个小组一起，称取150g马铃薯(新马铃薯可以不去皮)，切块后放 入 匀 浆 机 ， 加 入 150mLNaF 溶 液 ， 匀 浆 后 用 四 层 纱 布 过 滤 。 各组分别量取 50mL滤液置离心管中，于 3500 转 /min离心 5 ～ 10min， 取上清夜，加入固体硫酸铵 16g，溶解，于 4℃ 放置 30min，于 3500 转/min离心15min，倒掉上清液，沉淀用15mL pH6.8的磷酸盐缓冲 液溶解，即为粗酶液，含有马铃薯多酚氧化酶.
•氢离子浓度的影响
1 2 3 4 5
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加入各试剂后混匀 37℃保温5min 注释：1、2、3、4、5号管的pH分别为1、3、5、7、9 现象：1、2、3号试管，颜色依次加深，4号试管颜色最深，5号试管次之。 结论：pH小于最适pH时，pH越大，酶活性越高；pH等于最适pH时活性最 大；超过最适pH时，酶活性又开始降低。此多酚氧化酶的最适pH在7.0左右