循环免疫复合物的检测

循环免疫复合物的检测

陈凤娇09级临床生化班0925400060

【摘要】目的以PEG沉淀法检测患者血清中循环免疫复合物（CIC）的含量，从而对Ⅲ型超敏反应性疾病做出免疫学检验。方法聚乙二醇(PEG)是一种无电荷的线形分子结构的乙二醇聚合物，有较强的脱水作用。血清中加人终浓度为30～40g/L的聚乙二醇(PEG 6000)，能相对选择性地沉淀CIC，并能抑制CIC的解离而能促进CIC进一步聚合成更大的凝聚物，形成浊度。利用分光光度计测定溶液的浊度可反映CIC的相对含量。结果患者1，2，3的血清浊度值分别为0.5，0.5,0.9，正常血清浊度值为1.1。结论患者血清中不存在CIC。【abstract 】objective to PEG precipitation detection of patients with serum circulating immune complex (CIC) content, and the Ⅲtype allergic reactions sexual diseases make immunology examination. Methods polyethylene glycol (PEG) is a kind of no charge linear molecule structure of the polymer ethylene glycol, strong dehydration effect. Add the concentration of serum end 30 ~ 40 g/L of polyethylene glycol (PEG 6000), can relative selectively precipitation CIC, and inhibit the CIC disintegrate and can promote the CIC further polymerization into more condensed content, form the turbidity. Use spectrophotometer to measure the solution turbidities can reflect the relative content of CIC. As a result, patients were 1, 2, 3 blood QingZhuo degrees, respectively, in 0.5, 0.5, 0.9, normal blood QingZhuo degrees value is 1.1. Conclusion patients serum does not exist CIC.

【关键词】 PEG沉淀循环免疫复合物

免疫复合物（IC）是抗原-抗体结合物。在正常情况下，机体完全可以清除这些复合物，当发生Ⅲ型超敏反应时，机体的这种清除功能发生障碍，循环免疫复合物增多，同时，沉积于局部，激活补体，吸引和活化中性粒细胞，造成局部组织的损伤和炎症，引起许多免疫复合物病。因此，检测循环免疫复合物对于诊断免疫复合物并有着重要意义。检测循环免疫复合物的方法已经有20余种，但绝大多数为生物学方法，一般操作较复杂，重复性差，不适合于临床化验使用。而PEG沉淀法是根据免疫复合物的理化性质而设计的理化技术，方法操作简便易

行，国内已经广泛使用，但特异性交差。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1硼酸缓冲液（0.1mol/L,PH 8.4）

1.1.2PEG6000（成都市科龙化工试剂厂，批号：20070318）

1.1.3羊抗人全血清（批号：2011111，有效期2年）；人血清（来源：

实验室自制）

1.1.4紫外分光光度计（型号：Alpha-1506,产品编号：1561011002，上

海谱元仪器有限公司），微量加样器（20~200ul，沪制01150222

号；100-500ul上海求精生化试剂有限公司），塑料试管（规格

12×100，出产日期2011.2.2 江苏天力医疗器械有限公司），电

热恒温箱（型号：S648,上海）

1.2方法

1.2.1 血液，放入试管中。抽取2ml待血液凝聚（37℃水浴30分钟）析出血

清后离心， 3000rpm，10分钟，取上清放入试管中备用；

1.2.2 取4支试管，分别标记为正常、患1、患2、患3，分别加入上述血清

160µl、140µl、120µl、80µl，再分别加入抗血清0µl、20µl、40µl、80µl；

1.2.3 各管分别用BBS做1:3稀释(加入BBS 320µl)；

1.2.4 将上述4支试管37℃孵育15~20分钟。

1.2.5 取小试管8支，标记管号1~8,管1~4为测定管，管5~8为对照管，

如下表所示。

1.2.6 加样后充分混匀，置4℃冰箱1h后取出，室温下静置10~15min。

1.2.7 用分光光度计在495nm比色，在检测测定管A值前，均应先用BBS校

正零点。

2 结果

用分光光度计在495nm处比色测得A值。在计算待测血清值：

待测血清浊度值=（A测定管-A对照管）×100；

根据以下标准进行判断循环免疫复合物的存在与否：如A测定管浊度/A正常管浊度≥2时为阳性，表示患者血清中存在CIC；若A测定管浊度/A正常管浊度≤2时为阴性，表示患者血清中不存在CIC。

本实验测得各管的A值如表所示：

根据上述数据：

患者1的血清浊度值=（0.082-0.077）×100=0.5

患者2的血清浊度值=（0.086-0.081）×100=0.5

患者3的血清浊度值=（0.126-0.117）×100=0.9

正常血清浊度值=（0.080-0.069）×100=1.1

因此：

A患者1血清浊度值/A正常血清浊度=0.5/1.1=0.45<2,表示患者血清中不存在CIC;

A患者2血清浊度值/A正常血清浊度=0.5/1.1=0.45<2,表示患者血清中不存在CIC;

A患者3血清浊度值/A正常血清浊度=0.9/1.1=0.82<2,表示患者血清中不存在CIC;