(参考课件)OVA诱导小鼠过敏性哮喘模型的建立
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10
重要性
11
重要意义
1.能够更加深入的了解过敏性哮喘这种疾病的分 子机制、识别关键路径以及今后药物治疗的目标 2.证实哮喘的相关机理以及哮喘的相关症状 3.动物哮喘模型还可用作药物的开发实验
病因 病机
13
病因病机
哮喘的发病机制目前还并未完全明确。西医对此有 如下观点： 遗传因素的观点认为哮喘是可以通过基因遗传给家 族中的其他成员； 神经调节机制的观点认为气道植物神经出现功能上 的问题是获得哮喘的生理上的基础； 免疫机制的观点认为通过相关研究可以表明免疫细 胞以及相关的免疫因子等参与到哮喘的各个环节中； 炎性细胞和炎症介质的观点认为活化的中性粒细胞、 血小板、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞 等均参与了气道炎症的形成，哮喘患者气道上皮细 胞和血管内皮细胞在其发生中也起一定作用
病因病机
中医对此则有如下观点：宿痰内伏于肺，再加上外 部感染、饮食的问题、精神疲惫意志消沉等原因导 致痰阻了气道，从而导致了哮喘的发生。
治疗 方法
16
a．抗生素治疗
大环内酯抗生素可以发挥重要的治疗作用，一种新型大环内
酯类药物阿奇霉素对由哮喘引起的肺部炎症情况有较强的治
疗效果，同时副作用较小，临床上已经充分证明了其使用的
OVA诱导小鼠过敏性哮喘模型的建立
1
Content (目录)
研究 进展
重要 性
病因 病机
治疗 方法
研究 总结
研究 进展
3
研究进展
近年来，随着社会工业化进程的加快，人们生活水平的 提高，过敏性哮喘患者的数量呈上升趋势，研究者们也将如 何治疗过敏性哮喘作为了一个重要的研究方向。为了研究过 敏性哮喘的病因、发病机制和探索相应的治疗方法，因此对 过敏性哮喘动物模型的建立尤为重要。本次实验的目的是建 立BABL/c小鼠过敏性哮喘模型。
研究进展
1.3 佐剂
佐剂可通过特异性或非特异性免疫增强作用使 机体产生更多的抗体量，不仅可以减轻免疫耐受， 还能节约使用的抗原量。在哮喘模型的制作中常选 择铝佐剂，其中以氢氧化铝最常见。
研究进展
1.4 哮喘模型制备方法
制备过敏性哮喘模型的过程大概分为致敏和激发两个阶 段，致敏和激发的药物一般选择OVA，致敏方式一般选择腹 腔注射或腹腔注射与皮下注射相结合。激发方式一般选择雾 化吸入或者滴鼻激发
不长Leabharlann Baidu该方法还需进行更深远的研究。
e．联合治疗
经过实践证明，某一单一的治疗方法很难对治疗哮喘取得好
的效果，人们往往选择多种治疗方式的联合治疗手段，以取
得较好的治疗效果。
17
Thank you!
18
研究进展
1.2 致敏原的选择
选择用尘于螨制的作话过价敏格性昂支贵气；管哮喘动物模型的致敏原主要有卵 白若蛋是白病、毒真和菌真孢菌子则、制尘成螨哮、喘蟑模螂型变虽应为原临等床。中在通制过作控哮制喘病模原型体感 的染过而程控中制，哮选喘择发不生同提的供致依敏据原，基但本其都稳能定制性作较出差各，种其不致同敏的的哮机制 喘还模需型要，进但一是步几的乎研每究个；致敏原都有自己自身的缺点。 蟑螂变应原、花粉以及职业性致敏原等由于种类繁多、模型制 作很难标准化而使模型的复制变得非常复杂，因此在制作哮喘 模型的过程中很少选择； 虽然选择使用OVA作为致敏原，很难制作出重症哮喘模型，然 而，OVA具有易于获得、免疫原性强、相关试剂可选择性大等 特点，作为经典抗原，常与特定的佐剂联合使用。
研究进展
1.5 小鼠过敏性哮喘模型的评价指标
哮喘是一种慢性气道炎症性疾病，常常伴随着气道高反 应和炎症细胞浸润，因此，一个小鼠过敏性哮喘模型的评价 应从实验小鼠的行为学、气道反应性及病理学三个方面来判 断。
• 主要包括以下四个方面：
a．外观：较实验前相比，出现毛发竖起，出现脸鼻部骚痒、 烦躁、打喷嚏、腹式呼吸明显、口唇发紫、尾部紫绀等症状。 b．肺组织切片：可进行HE染色、MBP染色、刚果红染色及 EOS浸润等观察小鼠肺部的炎症情况。 c．细胞组分的测定：主要是测量其中的白细胞和嗜酸性粒 细胞的数量。 d.生理功能指标：主要是测量小鼠的气道反应性，常用的方 法是离体气道平滑肌收缩力测定法、肺阻抗（气道峰压测定 法）和整体体积描记法。目前整体体积描记法是被认可的测 定小鼠的气道反应性的方法，但也有研究认为该方法存在缺 陷。此外，小鼠血清中IgE的测定，肺泡灌洗液中各种细胞 因子的测定，如IL-4、IL-5、IL-10、IL-13等，都受到越来 越高的重视，常用的检测方法是ELISA检测。这些指标的测 定都对人们对小鼠哮喘模型的认识有重要作用。
研究进展
1.1 实验动物的选择
（1）、早期，人们往往选择比较容易致敏的豚鼠作为哮喘模型的实验动物， 随着实验的不断进行，人们发现豚鼠的个体差异较大，对于致敏原可能不 反应或者反应显著，甚至出现死亡的情况。
（喘所2模）型以、主近，要些实目年验，前动随物多着以数大选鼠作择为实雌验性动物B的A研B究L的/c进小行，鼠大作鼠一为度成建为立哮 （小3）鼠、如过今敏人们性对哮小鼠喘的模免疫型遗传的背实景已验经动比较物了。解，小鼠肺功能的测
定已经较为完善，大量可供使用的免疫学和分子学试剂，使得小鼠成为 制备过敏性哮喘模型的最佳实验动物。小鼠逐渐成为了制作哮喘模型的 实验动物的最佳选择。
（4）、相关研究表明，卵白蛋白（OVA）容易引起BABL/c小鼠产生 气道高反应性和血清中IgE超敏反应的过敏反应 [1]。并且雌性BABL/c 小鼠的炎症反应更加显著，
安全性和有效性。
b．糖皮质激素治疗
目前临床上广泛使用的糖皮质激素是治疗支气管哮喘最有效
的药物，特点是能够快速减缓哮喘发作时的哮憋等症状。
c．支气管扩张剂治疗
d. 免疫治疗
此方法的治疗机理是通过针对某些特定的过敏原进行防治，
其治疗效果日益显著，目前免疫治疗已经成为有效治疗哮喘
的常规方法之一。但是，由于免疫治疗方法的的应用时间还
重要性
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重要意义
1.能够更加深入的了解过敏性哮喘这种疾病的分 子机制、识别关键路径以及今后药物治疗的目标 2.证实哮喘的相关机理以及哮喘的相关症状 3.动物哮喘模型还可用作药物的开发实验
病因 病机
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病因病机
哮喘的发病机制目前还并未完全明确。西医对此有 如下观点： 遗传因素的观点认为哮喘是可以通过基因遗传给家 族中的其他成员； 神经调节机制的观点认为气道植物神经出现功能上 的问题是获得哮喘的生理上的基础； 免疫机制的观点认为通过相关研究可以表明免疫细 胞以及相关的免疫因子等参与到哮喘的各个环节中； 炎性细胞和炎症介质的观点认为活化的中性粒细胞、 血小板、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞 等均参与了气道炎症的形成，哮喘患者气道上皮细 胞和血管内皮细胞在其发生中也起一定作用
病因病机
中医对此则有如下观点：宿痰内伏于肺，再加上外 部感染、饮食的问题、精神疲惫意志消沉等原因导 致痰阻了气道，从而导致了哮喘的发生。
治疗 方法
16
a．抗生素治疗
大环内酯抗生素可以发挥重要的治疗作用，一种新型大环内
酯类药物阿奇霉素对由哮喘引起的肺部炎症情况有较强的治
疗效果，同时副作用较小，临床上已经充分证明了其使用的
OVA诱导小鼠过敏性哮喘模型的建立
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Content (目录)
研究 进展
重要 性
病因 病机
治疗 方法
研究 总结
研究 进展
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研究进展
近年来，随着社会工业化进程的加快，人们生活水平的 提高，过敏性哮喘患者的数量呈上升趋势，研究者们也将如 何治疗过敏性哮喘作为了一个重要的研究方向。为了研究过 敏性哮喘的病因、发病机制和探索相应的治疗方法，因此对 过敏性哮喘动物模型的建立尤为重要。本次实验的目的是建 立BABL/c小鼠过敏性哮喘模型。
研究进展
1.3 佐剂
佐剂可通过特异性或非特异性免疫增强作用使 机体产生更多的抗体量，不仅可以减轻免疫耐受， 还能节约使用的抗原量。在哮喘模型的制作中常选 择铝佐剂，其中以氢氧化铝最常见。
研究进展
1.4 哮喘模型制备方法
制备过敏性哮喘模型的过程大概分为致敏和激发两个阶 段，致敏和激发的药物一般选择OVA，致敏方式一般选择腹 腔注射或腹腔注射与皮下注射相结合。激发方式一般选择雾 化吸入或者滴鼻激发
不长Leabharlann Baidu该方法还需进行更深远的研究。
e．联合治疗
经过实践证明，某一单一的治疗方法很难对治疗哮喘取得好
的效果，人们往往选择多种治疗方式的联合治疗手段，以取
得较好的治疗效果。
17
Thank you!
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研究进展
1.2 致敏原的选择
选择用尘于螨制的作话过价敏格性昂支贵气；管哮喘动物模型的致敏原主要有卵 白若蛋是白病、毒真和菌真孢菌子则、制尘成螨哮、喘蟑模螂型变虽应为原临等床。中在通制过作控哮制喘病模原型体感 的染过而程控中制，哮选喘择发不生同提的供致依敏据原，基但本其都稳能定制性作较出差各，种其不致同敏的的哮机制 喘还模需型要，进但一是步几的乎研每究个；致敏原都有自己自身的缺点。 蟑螂变应原、花粉以及职业性致敏原等由于种类繁多、模型制 作很难标准化而使模型的复制变得非常复杂，因此在制作哮喘 模型的过程中很少选择； 虽然选择使用OVA作为致敏原，很难制作出重症哮喘模型，然 而，OVA具有易于获得、免疫原性强、相关试剂可选择性大等 特点，作为经典抗原，常与特定的佐剂联合使用。
研究进展
1.5 小鼠过敏性哮喘模型的评价指标
哮喘是一种慢性气道炎症性疾病，常常伴随着气道高反 应和炎症细胞浸润，因此，一个小鼠过敏性哮喘模型的评价 应从实验小鼠的行为学、气道反应性及病理学三个方面来判 断。
• 主要包括以下四个方面：
a．外观：较实验前相比，出现毛发竖起，出现脸鼻部骚痒、 烦躁、打喷嚏、腹式呼吸明显、口唇发紫、尾部紫绀等症状。 b．肺组织切片：可进行HE染色、MBP染色、刚果红染色及 EOS浸润等观察小鼠肺部的炎症情况。 c．细胞组分的测定：主要是测量其中的白细胞和嗜酸性粒 细胞的数量。 d.生理功能指标：主要是测量小鼠的气道反应性，常用的方 法是离体气道平滑肌收缩力测定法、肺阻抗（气道峰压测定 法）和整体体积描记法。目前整体体积描记法是被认可的测 定小鼠的气道反应性的方法，但也有研究认为该方法存在缺 陷。此外，小鼠血清中IgE的测定，肺泡灌洗液中各种细胞 因子的测定，如IL-4、IL-5、IL-10、IL-13等，都受到越来 越高的重视，常用的检测方法是ELISA检测。这些指标的测 定都对人们对小鼠哮喘模型的认识有重要作用。
研究进展
1.1 实验动物的选择
（1）、早期，人们往往选择比较容易致敏的豚鼠作为哮喘模型的实验动物， 随着实验的不断进行，人们发现豚鼠的个体差异较大，对于致敏原可能不 反应或者反应显著，甚至出现死亡的情况。
（喘所2模）型以、主近，要些实目年验，前动随物多着以数大选鼠作择为实雌验性动物B的A研B究L的/c进小行，鼠大作鼠一为度成建为立哮 （小3）鼠、如过今敏人们性对哮小鼠喘的模免疫型遗传的背实景已验经动比较物了。解，小鼠肺功能的测
定已经较为完善，大量可供使用的免疫学和分子学试剂，使得小鼠成为 制备过敏性哮喘模型的最佳实验动物。小鼠逐渐成为了制作哮喘模型的 实验动物的最佳选择。
（4）、相关研究表明，卵白蛋白（OVA）容易引起BABL/c小鼠产生 气道高反应性和血清中IgE超敏反应的过敏反应 [1]。并且雌性BABL/c 小鼠的炎症反应更加显著，
安全性和有效性。
b．糖皮质激素治疗
目前临床上广泛使用的糖皮质激素是治疗支气管哮喘最有效
的药物，特点是能够快速减缓哮喘发作时的哮憋等症状。
c．支气管扩张剂治疗
d. 免疫治疗
此方法的治疗机理是通过针对某些特定的过敏原进行防治，
其治疗效果日益显著，目前免疫治疗已经成为有效治疗哮喘
的常规方法之一。但是，由于免疫治疗方法的的应用时间还