微核试验法

微核试验法－检测环境污染

微核(micronuclei)简称(MCN)是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。微核是在间期细胞时能观察到的染色体畸变后遗留产物。微核试验(Micronuclei Test) 是一种快速、简便检测环境诱变物的方法。可用来检测水体环境诱变物，为环境监测提供细胞学方面的依据。

在细胞间期可见微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的。实验证实，整条的染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证实，在一定范围内，微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。

现有的微核测试系统多数是用哺乳动物的骨髓细胞或外周血细胞。缺点是需要一定培养条件与时间、细胞同步化困难、微核率低，一般只在0.2％左右。

[实验方法及步骤]

重金属镉离子(cd2+)诱导黄鳝外周血细胞微核实验方法。

1．实验用水准备

实验用水，可用曝气数天的自来水。

2．实验用容器

可用实验室内的水槽，清洗后，加入定量曝气的自来水。

3．试剂诱导

配实验用试剂CdCl2·2.5H2O，设20mg/L、2mg/L、0.2mg/L、0.02mg/L四个培养终浓度梯度。把规格一致的黄鳝放入含试剂的溶液中七天，期间可换水重新补充试剂。另设同样条件的空白对照，可用曝气的自来水作为对照饲养。

4．断尾取血，做血涂片

取黄鳝，断尾后，取出外周血，滴于载玻片上，做均匀涂片。注意掌握动作要领，涂片均匀。涂片空气干燥。

5．外周血涂片固定

把干燥后的涂片，插入染色缸的插槽中固定10分钟后取出，气干。

6．Giemsa染色

固定后的涂片，采用骨髓染色体制备的染色体扣染法，染色15分钟后，取出载片。在小水流下冲片，小心擦干玻片，注意不要碰到细胞面。

7．镜检

涂片中，血红细胞数量最多，还可见单核细胞、血栓细胞及淋巴细胞。成熟的黄鳝外周血红细胞多呈椭圆形或长椭圆形。外周血细胞中核呈卵圆形或椭圆形，中位，染色较深且均匀。可见微核，主核大小的1/3以下，并与主核分离，着色较浅，形态呈圆形，横圆形，不规则形。除微核外还可见其他种类的染色体畸变类型，如双核细胞、亚铃形细胞、核异形、巨核细胞等与空白对照比较，差异具有显著性。

以每条黄鳝为观察单位，观察500个细胞，计数微核率。以空白值作为对照值，观察浓度对微核率的影响。

[实验报告]

1．微核产生原理。

2．不同浓度下，计数黄鳝外周血细胞微核率。

微核形成机理、检测方法及其用于人群监测和毒性评价的系列研究

完成单位：预防医学系卫生毒理学教研室

江苏省肿瘤防治研究所

完 成 人：曹 佳 薛开先 程天民 马国建 易 东

获奖等级：国家科学技术进步三等奖

获奖年度：一九九八年

微核测试是目前国内外评价化合物和环境污染物遗传毒性的必测项目，也是监测职业暴露人群遗传损害的重要指标。本项目研究属毒理学学科领域，其研究内容和特点包括五个方面：①首次提出并证明了微核不仅在分裂细胞中形成，

而且可在间期细胞各阶段（G

0，G

1

，S，G

2

）直接形成的新论点，据此率先建立了

末梢血淋巴细胞（Go期）微核测试法。②系统地研究了微核的来源、染色体组成、超微结构及DNA复制能力，揭示了微核发生、发展以演变的基本规律。③在国际上较系统地开展了微核流式仪自动化检测的研究，成功地将含微核的嗜多染红细胞和成熟红细胞区分开，检测速度比人工镜检提高了50-100倍，并在国内外一些实验室使用。④所开展的小鼠红细胞和双核淋巴细胞微核的图像自动识别的研究，已达到国外同类研究的水平。⑤开展了较多数量的职业暴露人群遗传损害监测（达3000例）和50余种有害因子（化学的、物理的、生物的）的遗传毒性评价。共发表论文81篇，其中全文在国外核心刊物发表7篇，参加国内外学术会议交流30余次，其中国际性会议6次并交流论文10余篇；举办全国性微核技术学习班共6期，使本项成果在国内获得较大范围的推广和应用。