乙肝病毒大蛋白研
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• 在同一条核酸链上起调控基因表达作用的核酸序 列称为顺式作用元件；
• 反式激活（transactivation）,既某一基因的编码 蛋白转而激活同一基因的远离部位，或另一基因 的转录和表达。研究发现乙肝病毒的一些组成蛋 白具有反式激活作用。
蛋白质
反式激活作用 DNA
大蛋白试剂临床研究
1、HBV DNA阳性标本中HBV－LP的阳性符合率
病毒保持复制水平\肝硬化\ 肝癌
抗病毒治疗过程中病毒颗粒消退顺序
最先消失
DNA 阳性 大蛋白阳性
其次消失
DNA阴性 大蛋白阳性
最后消失
DNA阴性 大蛋白阴性
抗病毒治疗效果监测
• 临床上缺乏评估抗病毒治疗效果的指标。
• 以HBV DNA阴转作为治疗的终点不恰当， 此时停药病情易反复。
没有指标预示治疗终点
目前临床乙肝病毒检测的缺陷
１、HBeAg阴性肝炎(小三阳肝炎)的血清学诊断指标缺乏
过去认为大三阳转小三阳即HBeAg的阴转意味着乙肝病毒复 制降低，传染性减弱，但是近年国内外的研究发现部分小三阳 在血清转化（或变异）后病毒仍然复制，而且预后更严重。
但是目前没有血清免疫学指标可以检测小三阳病毒携带者 是否病毒复制！
• 有效的办法──乙肝病毒DNA定量试验，但是外周 血中DNA阴转已经不能作为治疗终点
• 还有比DNA更好的标志物吗
HBeAg阴性活动期肝炎
HBeAg 阴性活动期肝炎临床诊断现状：
– (1) 传统“两对半”指标不能反映此类患者HBV复制 程度；
– (2) 缺乏指导合理治疗的指标； – (3) HBV DNA检测不易于各级医疗机构广泛开展； – (4) 临床上急需能够反映HBV复制程度及指导治疗的
乙肝病毒大蛋白研究
---HBV large surface protein
-----北京地坛医院 魏红山教授
病毒血清学检测指标
• 直接指标：外膜蛋白(表面抗原）、降解或 代谢产物蛋白、病毒核酸DNA或RNA
• 间接指标：各种抗体IgG、IgM等
目前乙肝实验血清学检测的需要
状况：指标不少，但是缺少以下关键指标 1,什么是e-CHB肝炎（e抗原阴性肝炎）血清学 指标？ ２、抗病毒治疗没有实验室终点指标，临床肝 炎治疗合理用药指导，避免过度用药．特别是Ｄ ＮＡ阴性后应该持续多长时间用药？
• 期望HBsAg转阴，带来过高期 待，导致过度用药，增加患者 负担以及浪费资源；据估计每 年20-40％左右的治疗是“多 余”的。
• ＤＮＡ阴转就停药，导致过早 停药，引起病情反弹
寻找比外周血DNA检测更合适的指标
• 大部分人熟悉的“乙肝两对半”检测，其实并非 乙肝病毒的传染物质和致病物，乙肝两对半”只 能反映一个人是否感染过乙肝，却不能直接深入 地揭示乙肝病毒在人体内的复制和致病情况，也 就不能更好地指导临床用药和制订治疗方案。
２、药物治疗效果评价血清学指标缺乏
由于HBsAg非常难转阴，而HBV DNA转阴停药容易反弹，抗病 毒治疗缺乏终点指标！
抗病毒治疗效果监测
• 临床上缺乏评估抗病毒治疗效果的指标。
• 以HBV DNA阴转作为治疗的终点不恰当， 此时停药病情易反复。
小三阳两种预后
病毒休眠\不复制\预后好
什么指标能够分辨开?
大蛋白试剂结果
阳性率 （％）
阳性含量均值 （ng）
1
103
54
48
88.89
17.60
2
104
38
37
97.37
24.69
3
105
58
56
96.55
30.44
4
106
65
5
＞106
80
合计
/
295
63
96.92
80
100
281
95.25
55.46 86.61
/
注：北京地坛医院与沈阳传染病医院汇总，其中北京地坛医院为阿德福韦抗病毒治疗患者
＜104(阴性) 104 105 106 107 108
例数 84 43 63 24 17 23
阳性例数 23 29 46 21 16 23
大蛋白试剂结果
阳性率（％） 大蛋白 OD
21.38
0.266±0.044
67.44
0.416±0.081
73.02
0.504±0.205
87.50
0.898±0.180
考核单位
北京地坛医院 沈阳传染病医院
HBVDNA HBV－LP（＋） （＋）
HBeAg （＋）
例数
例数 比例 例数 比例
（％）
（％）
391
368 94.12 177 45.27
浙江湖州中心医院拉米夫定治疗监测
HBV－LP可以作为一个评估抗病毒治疗 效果以及判定治疗终点的指标，能够合理 的指导患者的用药，避免过早停药导致的 病情反复。
考核单位
HBV DNA （＋）
HBV－LP （＋）
例（次）数
例（次）数 比例（％）
北京地坛医院1
268
北京地坛医院2（治疗系列）1
152
解放军传染病研究所
170
辽宁沈阳传染病医院
143
浙江省湖州中心医院（治疗系列）2
133
合计
848
254
94.78
149
98.03
135
79.41
134
93.71
128
• 1996－９８年 发现大蛋白具有反式激活病毒复制的 作用
• 2002年 发现导致肝细胞病变及凋亡的主要原因是大 蛋白（致病性蛋白）
• 2003年Nature发表文章总结其反式激活机理 • 2004年 国际上进行大蛋白特殊拓扑结构研究 • 2004年 成功构建针对构象型表位的单克隆抗体
反式激活蛋白
血清学指标。
解决方案
• 通过研制针对复杂构象结构的大蛋白的单 抗直接检测大蛋白反式激活域
• 大蛋白是外周血中唯一可以检测的病毒反 式激活因子
• 大蛋白与肝内病毒复制密切相关，和病情 反弹密切相关，是抗病毒治疗的辅助终点 指标
大蛋白检测可以弥补目前项目的不足
-----检测Dane颗粒、管状病毒颗粒
2、 大蛋白具有反式激活病毒复制的能力，大蛋白 存在与否可预测病情反弹，大蛋白转阴是病毒清 除的最早迹象，可以作为抗病毒治疗终点辅助指 标。
HBV的表面抗原的组成
不存在单独前Ｓ１蛋白，前Ｓ１是大蛋白一部分
乙肝病毒包膜蛋白研究进展
• 1995-2004年 发现大蛋白前S区有复杂构象结构，是 被发现具有拓扑结构的第一个病毒外膜蛋白
96.24
783
92.33
注：1 阿德福韦抗病毒治疗患者43例，共检出HBV DNA阳性152次； 2 拉米夫定抗病毒治疗患者51例，共检出HBV DNA阳性133次。
大蛋白试剂临床研究
2、不同HBV DNA拷贝数中HBV－LP阳性率以及OD值比较
组别
1 2 3 4 5 6
HBV DNA HBVDNA拷贝数
标本。HBV DNA拷贝数对数值与HBV－LP含量（ng）的相关系数 r=0.935
PreS Ag OD值（含量）
大蛋白试剂临床研究
3 2.5
2 1.5
1 0.5
0 1
PresAg含量与HBV DNA含量相关性
2345678 HBV DNA拷贝对数值
均值 中位数
大蛋白试剂临床研究
5、HBV DNA、HBeAg与HBV－LP三者在乙肝患者中的比较
• 大蛋白与肝内病毒复制（不是外周血）密切相关 • 用于e抗原检测的补充
• 大蛋白晚于血液内ＤＮＡ消退，早于HBsAg消退 • 大蛋白直接导致肝细胞损伤，直接毒性作用 • 大蛋白具有反式激活增强病毒复制作用
HBV-LHBs临床使用的意义
-----e抗原的补充
１、 病毒携带者体内病毒复制的确切血清学指标， 特别是e抗原变异或转化后可作为e抗原的补充。
94.12
1.275±0.319
100.00
1.428±0.ห้องสมุดไป่ตู้38
r=0.945 注：解放军传染病研究所，HBV DNA拷贝数对数值与HBV－LP OD值的相关系数
大蛋白试剂临床研究
3、不同HBV DNA拷贝数中HBV－LP阳性率以及含量比较
组别
HBV DNA
HBVDNA 例(次)数 拷贝数
阳性 例(次)数
• 反式激活（transactivation）,既某一基因的编码 蛋白转而激活同一基因的远离部位，或另一基因 的转录和表达。研究发现乙肝病毒的一些组成蛋 白具有反式激活作用。
蛋白质
反式激活作用 DNA
大蛋白试剂临床研究
1、HBV DNA阳性标本中HBV－LP的阳性符合率
病毒保持复制水平\肝硬化\ 肝癌
抗病毒治疗过程中病毒颗粒消退顺序
最先消失
DNA 阳性 大蛋白阳性
其次消失
DNA阴性 大蛋白阳性
最后消失
DNA阴性 大蛋白阴性
抗病毒治疗效果监测
• 临床上缺乏评估抗病毒治疗效果的指标。
• 以HBV DNA阴转作为治疗的终点不恰当， 此时停药病情易反复。
没有指标预示治疗终点
目前临床乙肝病毒检测的缺陷
１、HBeAg阴性肝炎(小三阳肝炎)的血清学诊断指标缺乏
过去认为大三阳转小三阳即HBeAg的阴转意味着乙肝病毒复 制降低，传染性减弱，但是近年国内外的研究发现部分小三阳 在血清转化（或变异）后病毒仍然复制，而且预后更严重。
但是目前没有血清免疫学指标可以检测小三阳病毒携带者 是否病毒复制！
• 有效的办法──乙肝病毒DNA定量试验，但是外周 血中DNA阴转已经不能作为治疗终点
• 还有比DNA更好的标志物吗
HBeAg阴性活动期肝炎
HBeAg 阴性活动期肝炎临床诊断现状：
– (1) 传统“两对半”指标不能反映此类患者HBV复制 程度；
– (2) 缺乏指导合理治疗的指标； – (3) HBV DNA检测不易于各级医疗机构广泛开展； – (4) 临床上急需能够反映HBV复制程度及指导治疗的
乙肝病毒大蛋白研究
---HBV large surface protein
-----北京地坛医院 魏红山教授
病毒血清学检测指标
• 直接指标：外膜蛋白(表面抗原）、降解或 代谢产物蛋白、病毒核酸DNA或RNA
• 间接指标：各种抗体IgG、IgM等
目前乙肝实验血清学检测的需要
状况：指标不少，但是缺少以下关键指标 1,什么是e-CHB肝炎（e抗原阴性肝炎）血清学 指标？ ２、抗病毒治疗没有实验室终点指标，临床肝 炎治疗合理用药指导，避免过度用药．特别是Ｄ ＮＡ阴性后应该持续多长时间用药？
• 期望HBsAg转阴，带来过高期 待，导致过度用药，增加患者 负担以及浪费资源；据估计每 年20-40％左右的治疗是“多 余”的。
• ＤＮＡ阴转就停药，导致过早 停药，引起病情反弹
寻找比外周血DNA检测更合适的指标
• 大部分人熟悉的“乙肝两对半”检测，其实并非 乙肝病毒的传染物质和致病物，乙肝两对半”只 能反映一个人是否感染过乙肝，却不能直接深入 地揭示乙肝病毒在人体内的复制和致病情况，也 就不能更好地指导临床用药和制订治疗方案。
２、药物治疗效果评价血清学指标缺乏
由于HBsAg非常难转阴，而HBV DNA转阴停药容易反弹，抗病 毒治疗缺乏终点指标！
抗病毒治疗效果监测
• 临床上缺乏评估抗病毒治疗效果的指标。
• 以HBV DNA阴转作为治疗的终点不恰当， 此时停药病情易反复。
小三阳两种预后
病毒休眠\不复制\预后好
什么指标能够分辨开?
大蛋白试剂结果
阳性率 （％）
阳性含量均值 （ng）
1
103
54
48
88.89
17.60
2
104
38
37
97.37
24.69
3
105
58
56
96.55
30.44
4
106
65
5
＞106
80
合计
/
295
63
96.92
80
100
281
95.25
55.46 86.61
/
注：北京地坛医院与沈阳传染病医院汇总，其中北京地坛医院为阿德福韦抗病毒治疗患者
＜104(阴性) 104 105 106 107 108
例数 84 43 63 24 17 23
阳性例数 23 29 46 21 16 23
大蛋白试剂结果
阳性率（％） 大蛋白 OD
21.38
0.266±0.044
67.44
0.416±0.081
73.02
0.504±0.205
87.50
0.898±0.180
考核单位
北京地坛医院 沈阳传染病医院
HBVDNA HBV－LP（＋） （＋）
HBeAg （＋）
例数
例数 比例 例数 比例
（％）
（％）
391
368 94.12 177 45.27
浙江湖州中心医院拉米夫定治疗监测
HBV－LP可以作为一个评估抗病毒治疗 效果以及判定治疗终点的指标，能够合理 的指导患者的用药，避免过早停药导致的 病情反复。
考核单位
HBV DNA （＋）
HBV－LP （＋）
例（次）数
例（次）数 比例（％）
北京地坛医院1
268
北京地坛医院2（治疗系列）1
152
解放军传染病研究所
170
辽宁沈阳传染病医院
143
浙江省湖州中心医院（治疗系列）2
133
合计
848
254
94.78
149
98.03
135
79.41
134
93.71
128
• 1996－９８年 发现大蛋白具有反式激活病毒复制的 作用
• 2002年 发现导致肝细胞病变及凋亡的主要原因是大 蛋白（致病性蛋白）
• 2003年Nature发表文章总结其反式激活机理 • 2004年 国际上进行大蛋白特殊拓扑结构研究 • 2004年 成功构建针对构象型表位的单克隆抗体
反式激活蛋白
血清学指标。
解决方案
• 通过研制针对复杂构象结构的大蛋白的单 抗直接检测大蛋白反式激活域
• 大蛋白是外周血中唯一可以检测的病毒反 式激活因子
• 大蛋白与肝内病毒复制密切相关，和病情 反弹密切相关，是抗病毒治疗的辅助终点 指标
大蛋白检测可以弥补目前项目的不足
-----检测Dane颗粒、管状病毒颗粒
2、 大蛋白具有反式激活病毒复制的能力，大蛋白 存在与否可预测病情反弹，大蛋白转阴是病毒清 除的最早迹象，可以作为抗病毒治疗终点辅助指 标。
HBV的表面抗原的组成
不存在单独前Ｓ１蛋白，前Ｓ１是大蛋白一部分
乙肝病毒包膜蛋白研究进展
• 1995-2004年 发现大蛋白前S区有复杂构象结构，是 被发现具有拓扑结构的第一个病毒外膜蛋白
96.24
783
92.33
注：1 阿德福韦抗病毒治疗患者43例，共检出HBV DNA阳性152次； 2 拉米夫定抗病毒治疗患者51例，共检出HBV DNA阳性133次。
大蛋白试剂临床研究
2、不同HBV DNA拷贝数中HBV－LP阳性率以及OD值比较
组别
1 2 3 4 5 6
HBV DNA HBVDNA拷贝数
标本。HBV DNA拷贝数对数值与HBV－LP含量（ng）的相关系数 r=0.935
PreS Ag OD值（含量）
大蛋白试剂临床研究
3 2.5
2 1.5
1 0.5
0 1
PresAg含量与HBV DNA含量相关性
2345678 HBV DNA拷贝对数值
均值 中位数
大蛋白试剂临床研究
5、HBV DNA、HBeAg与HBV－LP三者在乙肝患者中的比较
• 大蛋白与肝内病毒复制（不是外周血）密切相关 • 用于e抗原检测的补充
• 大蛋白晚于血液内ＤＮＡ消退，早于HBsAg消退 • 大蛋白直接导致肝细胞损伤，直接毒性作用 • 大蛋白具有反式激活增强病毒复制作用
HBV-LHBs临床使用的意义
-----e抗原的补充
１、 病毒携带者体内病毒复制的确切血清学指标， 特别是e抗原变异或转化后可作为e抗原的补充。
94.12
1.275±0.319
100.00
1.428±0.ห้องสมุดไป่ตู้38
r=0.945 注：解放军传染病研究所，HBV DNA拷贝数对数值与HBV－LP OD值的相关系数
大蛋白试剂临床研究
3、不同HBV DNA拷贝数中HBV－LP阳性率以及含量比较
组别
HBV DNA
HBVDNA 例(次)数 拷贝数
阳性 例(次)数