体外诊断试剂生产质量控制要点

亲和柱的制备及使 用次数，所用缓冲 液的pH等的控制， 纯化的收率。
多抗-HBs的质量标准

纯度 ：SDS-PAGE法检定 蛋白含量 ：Lowry法 效价 ：对流电泳法测定效价 功能性检测：免疫活性、稳定性



多抗-HBs-HRP生产和质量控制要点
生产工序 质量控制要点 HRP与 NaIO4反应，再加入 辣根过氧化物酶 乙二醇制成活化的酶溶 RZ值≥3.0 及活化 液。 时间的控制 酶溶液液加入抗-HBs抗体 pH,温度及时间的 控制
酶的活化 酶的偶联 还原 纯化
酶反应液加入NaBH4溶液还 还原时间的控制 原。 饱和硫酸铵纯化 纯度控制
辣根过氧化物酶质量标准

溶解性 ：应符合要求


PH值 ：应符合要求
活性测定 ：应符合要求 RZ值：应≥3.0
多抗-HBs-HRP质量标准

免疫活性

稳定性试验
反应板制备生产和质量控制要点
成品入库
入库

控制点：产品放行报告；入库数 要求： 凭由质量管理部经理签署的成品出厂合格报告，成 品检定书办理入库手续，入库数应与成品出厂合格报告 中所报数量一致。
P2生物安全实验室管理




人员卫生 进入P2实验室必须加穿洁净防护服，带一次性乳胶手套和一次性 口罩。只允许工作人员进入，禁止非工作人员进入实验室。 生物安全柜 实验室的操作严格按操作规程进行操作，对存在感染性或潜在感染 性的操作须在生物安全柜内进行。做好相应的消毒、使用记录。 消毒及灭菌 所有直接或间接接触病原微生物的仪器、设备、器具，均需进行消 毒处理，能高压的选择121℃高压灭菌30分钟处理，不能高压的选择 1%次氯酸钠消毒。实验中产生的具有感染性或潜在感染性的穿透性 利器废物置入黄色塑料利器盒中，其他非利器废物置入黄色医疗废 物塑料袋中。 实验室应指定专人负责感染性或存在潜在感染性材料的保藏，做好 标识，建立台帐。
洗涤液等通用试
剂的制备
显色剂B的配制

质量控制点： 1 溶液配制的准确性
用pH计测定溶液pH值应符合要求
用电导率仪测定溶液电导率应符合要求 2 配制、分装环境：避光 3 配制后溶液分装的即时性：12小时内进行分装
显色剂A的配制

质量控制点： 1溶液配制的准确性 用pH计测定溶液pH值 用电导率仪测定溶液电导率 2配制后溶液存放：72小时内进行分装
通用试剂制备的生产和质量控制要点
生产工序 生产关键点 质量控制点
避光配制、分装
1 显色剂、终止液、 显色剂B的配 制 溶液配制的pH、电导的控制 配制后12小时内进行分装 2 3 4 显色剂A的配 制 终止液的配制 洗涤液的配制 72小时内进行分装 溶液配制的pH、电导的控制 比重控制 pH、电导的控制
阴、阳性血清的灭活

要求：
灭活时间：1小时 温度：60℃

操作：将血清置水浴箱内。随时注意测量血清 温度，当血清温度到达60℃时，开始计时至规 定时间止。
阴、阳性对照的配制控制
阴性对照的配制


质控点：阴性对照OD值
要求：OD值≤0.050
阳性对照的配制

质控点：阳性对照OD值
要求：OD值≥1.000

原辅料必须从合格供应商目录所载厂家购入。

采购的生产用原辅料，均应符合药品的标准、 包装材料标准、生物制品规程或其它标准，不 得对产品的质量产生不良影响。
自制主要原料生产和质量控制要点

工艺用水
抗原


抗体
酶标记物
基因工程HBsAg生产和质量控制要点
生产工序 质量控制要点
基因工程细胞株，经接 无菌操作，培养基的配 细胞培养 种复苏后，进行细胞传 制，细胞培养温度，细 代培养。 胞的形态及传代速度。 收集的细胞培养上清液 层析柱填料的使用次数， 经抗-HBs 亲和层析柱 所用缓冲液的pH值， 上 等纯化。 样、平衡、洗脱速度。
分装

质量控制点：液量的准确性、试剂瓶的密封性
要求：
分装液量应大于等于标示量 ；
分装好的试剂瓶应无漏液现象。
贴签

质量控制点：批号打印的准确性 要求：批号等打印正确、清晰

操作： 贴瓶开始后，前30瓶应仔细检查瓶贴质量，包括 瓶贴位置，批号等打印是否正确、清晰，粘贴是否牢固、 平整等。 合格后，每50瓶抽1瓶进行检查。
四临床化学诊断试剂产品 葡萄糖试剂盒（液体单试剂）（氧化酶法）
一.酶联免疫诊断试剂产品
【产品名称】 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）
【包装规格】 96人份/盒 【预期用途】 本试剂盒采用酶联免疫法原理检测HBsAg，适用于血清或 血浆类标本。
酶联免疫法反应原理

双抗体夹心法

双抗原夹心法
抗-HBs血清 纯化 酶标用抗 -HBs 单抗-HBs腹水
结酶
抗-HBs-HRP
纯化
包板用单 抗-HBs 包被 反应板 正常人血清、 阳性血 配制 阴、阳性 对照 TMB、硫酸、 吐温20 配制 显色剂、终止 液、洗涤液
配制 酶结合物
滴配 半成品检 定 半成品 分装 合并 成品
成品检定
外购原辅料控制
温度：20±2℃
反应板制备
铝箔袋的热封


质量控制点： 房间的湿度：＜40% 铝箔袋的密封性： 端面刀封温度210±5℃ 中封刀封温度210±5℃ 操作： 房间湿度控制：生产操作前提前2小时，打开去湿机进行 工作场地去湿，使车间湿度达到40%以下。 铝箔袋的密封性：在线袋袋检。
反应板制备
反应板的抽检
终止液的配制

质量控制点： 溶液配制的准确性：
用婆美计测定溶液的比重应符合要求
洗涤液的配制

质量控制点： 溶液配制的准确性
用pH计测定溶液pH值
用电导率仪测定溶液电导率
酶结合物制备生产和质量控制要点
生产工序 1 生产关键点 酶稀释液的配 制 质量控制点 pH的控制 通过比较阳性参考品、 酶结合物的制 备、滴配 2 阴性参考品、精密性以 *酶结合物的滴 及最低检出率情况，用 配 方阵滴定法进行EIA法 测定确定酶结合物的浓 度
二.金标产品
【产品名称】 人类免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗体诊断试剂盒(胶体金法) 【包装规格】 50人份/盒 【预期用途】 本试剂盒适用于对人血清/血浆或全血中的(HIV1/2)抗体 的快速检测。
金标产品检验原理
本品采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤 维膜上预包被金标记HIVgp160和gp36抗原等， 在硝酸纤维膜检测线和质控线上分别包被 HIVgp41、gp36混合抗原和抗体等，当检测进行 时，样品中HIV抗体可与金标记HIV抗原结合形 成复合物，由于层析作用复合物沿试纸条向前 移动。 若样品中含有可被检测的HIV抗体，则与检 测线预包被的HIV抗原结合形成“金标记HIV抗 原—HIV抗体—HIV包被抗原”复合物而凝聚显 色；若样品中没有HIV抗体或HIV抗体的含量低 于检测限时，则不形成复合物而不显色。
标本
抗-HBs-HRP
HBsAg
抗-HBs
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶 联免疫法）的原理
采用抗-HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后， 加入抗-HBs-HRP，当样本中存在HBsAg时，该HBsAg 与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBsHBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反 应，反之则无显色反应。
生产工序 1 2 3 生产要点 包被液的配制 *反应板的包被 反应板的洗涤、 加封闭液 *反应板的封闭 反应板的抽干 *铝箔袋的热封 *反应板的抽检 质量控制点 pH值的控制 包被液量的准确性，反应板包被放置 的温度、湿度及时间的控制 液量的准确性 房间温度的控制，封闭时间的控制 抽干机的真空度、温度 房间的湿度控制，铝箔袋的密封性 应符合相关质量要求
体外诊断试剂生产和质量控制要点
主讲人:顾燕黎
上海科华生物工程股份有限公司
体外诊断试剂产品介绍
一酶联免疫诊断试剂产品 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法） 二快速诊断试剂产品 人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒（胶体金法） 三PCR核酸诊断试剂产品 乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
腹水制备
腹水纯化
单抗-HBs质量标准

纯度 ：采用SDS-PAGE法
蛋白含量 ：采用Lowry法 效价 ：ELISA效价 功能性检测：免疫活性、稳定性



多抗-HBs生产和质量控制要点
生产工序 用福氏佐剂和纯化 抗血清制备 HBsAg抗原 制成乳化胶 乳剂注射实验动物 ，经 多次免疫后，采集动物 血清。 纯化 抗血清，经亲和层析柱 粗提后，正常人全血清 等多种亲和层析柱等纯 化制得。 质量控制要点 动物的选择，乳剂 配制的均一性。
反应板制备
反应板的封闭

质量控制点： 封闭温度：37±0.5℃ 封闭时间：2小时

操作：将加好封闭液的包被板整齐堆放在托盘内，注明 批号、封闭开始时间和结束时间，放入恒温房。到达规 定时间后，迅速取出包被板，转入下一道工序的生产。
反应板制备
反应板的抽干

质量控制点：抽干机的真空度、温度
要求：
真空度：低于100Pa，维持4小时以上
反应板制备
反应板的包被

质量控制点： 反应板包被放置的温度及时间的控制 要求： 2-8℃冷库包被过夜。

操作：包被板应堆放整齐，并用一次性塑料布覆盖。注 明产品名称、批号和时间，放入2-8℃冷库包被过夜。
反应板制备
反应板的洗涤、加封闭液

质量控制点：液量的准确性
要求:
洗板液量：200μ l/孔 封闭液量：250μ l/孔
合并包装生产和质量控制要点
生产工序 生产要点 质量控制点
1 合并包装 2
包装盒的 生产日期、批号打印的准 压印 确性、清晰度 合并组分的齐全性 合并 印刷类包装品的物料平衡
成品检定质量标准

物理检查 试剂空白 阴性对照 阳性对照 阴性参考品符合率 阳性参考品符合率 最低检出量 精密性 稳定性实验
精密性：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定，CV（%） 应不高于15%（n=10）。
阴、阳性对照制备的生产和质量控制要点
生产工序 生产要点 质量控制点
1
阴性血清的灭活
灭活的时间，温度
2 阴、阳性对照的配
*阴性对照的配制
检测阴性OD值
制
3
阳性血清的灭活
灭活的时间，温度
4
*阳性对照的配制
检测阳性OD值
半成品检定质量标准
物理检查 试剂空白 阴性对照 阳性对照 阴性参考品符合率 阳性参考品符合率 最低检出量 精密性 稳定性实验 :

试剂的分装、贴签生产和质量控制要点 除菌过滤

质量控制点：过滤膜的起泡点实验

要求：滤器灭菌121℃30分钟；0.22μ m滤 芯泡点≥3.5bar
纯化
基因工程HBsAg质量标准

效价： ELISA
纯度：采用SDS-PAGE

功能性实验 ：阴性对照、阳性对照、阴性参考 品符合率、最低检出量、精密性、稳定性 蛋白浓度：用双缩脲法测定

单抗-HBs生产和质量控制要点
生产工序 质量控制要点 细胞复苏及 单克隆抗体细胞株，经接种复苏 无菌操作，培养基的配 传代培养 后，进行细胞传代培养。 制，细胞培养温度。 福氏不完全佐剂免疫，7-10天后 对数生长期细胞接种。 单克隆抗体细胞悬液注射于F1代 小鼠 ，10天后采集小鼠腹水， 离心，制得单抗-HBs腹水。 用制备的单抗-HBs腹水，经饱和 层析填料的使用次数， 硫酸铵二步沉淀，经离子交换层 所用缓冲液的pH值， 上 析柱纯化即为单抗-HBs。 样、平衡、洗脱速度。 纯化的得率。
质量标准： 阴性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检 定，不得出现假阳性。 阳性参考品符合率：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检 定，不得出现假阴性。 最低检出量：用国家参考品或国家参考品标化的参考品进行检定， HBsAg adr、adw及ay亚型的最低检出量应符合要求。
试剂盒组份
1. 2. 3. 4. 5. 微孔反应板 酶结合物 阳性对照 阴性对照 洗涤液
6.
7. 8. 9. 10.
显色剂A
显色剂B 终止液 封片 说明书
ห้องสมุดไป่ตู้
主要生产设备
微孔反应板包被机
微孔反应板全自动封闭生产线 灌封流水线
超声波洗瓶机 全自动进口分装机
生物安全柜 酶标仪
横枕式包装机
生产工艺流程图
反应板制备
4 5 6 7
反应板制备
包被液配制

质量控制点：包被缓冲液pH
测定方法：用pH计测定
反应板制备
反应板的包被

质量控制点：包被液量的准确性 要求：100μl/孔 操作： 将待包被的微孔反应板放置传送带上，开始包被，每块包被 板应用目测法检查其96孔加液是否完整。前10块包被板检查加 液量是否准确，检后的包被板放入报废专用盘内，作报废处理。 连续100块包被板检查合格后，进入正常包被过程。正常包 被过程中每100块包被板应抽1块作过程检查。