三种脱敏牙膏封闭牙本质小管的效果比较_司庆宗
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〔关键词〕 牙本质过敏； 牙膏； 原子力显微镜； 牙本质小管 〔中图分类号〕 R781. 2 〔文献标识码〕1-03； doi： 10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2013. 03. 036
牙本质过敏症目前临床治疗主要是使用各种物理、化学、 激光等方法堵塞牙本质小管，防止小管内液体流动，达到脱敏 的目的〔1〕。目前市面上高露洁专效抗敏牙膏、舒适达速效抗敏 牙膏和冷酸灵双重抗敏牙膏都是利用钾盐等矿物质封闭牙本 质小管这一理论来防治牙过敏。目前观察牙本质的超微结构 主要是扫描电镜（ SEM） ，样本需要脱水，表面覆盖传导薄膜等 条件限制，SEM 图像定量信息可以有效进行比较分析，而对于 图像地形表面特性无法解释或阐明。原子力显微镜（ AFM） ，不 需要染色，脱水等复杂步骤，最小化样本准备，不仅能提供超微 结构镜像，还可以提供表面定量信息 （ 大小，外形，粗糙度，频 率，高度和深度等） 。该技术广泛应用于测定牙釉质和牙本质 的侵蚀的超微结构特性。本研究以高露洁专效抗敏牙膏、舒适 达速效抗敏牙膏和冷酸灵双重抗敏牙膏为牙本质脱敏剂，用普 通含氟牙膏作为对照，用 AFM 评价三种脱敏剂对牙本质脱敏 的超微结构作用效果。
基金项目： 中央高校基本科研业务费专项资金（ lzujbky-2012-160） 1 兰州大学土木工程与力学学院 通讯作者： 刘 斌（ 1967-） ，男，教授，博士，博士生导师，主要从事口腔
临床医学研究。 第一作者： 司庆宗（ 1978-） ，男，硕士，讲师，主要从事口腔内科临床及基
础研究。
0. 10 mg /100 ml 羧甲基纤维素钠） 。样本使用 TR-13 高速金刚 砂车针在喷水状态下磨除唇侧面颈部牙釉质和牙骨质暴露浅 层牙本质，在水灌注情况下使用碳化硅砂纸（ 600 ～ 2 000） 打磨 形成 3 mm × 3 mm 平面，后超声清洗 10 min。 1. 3 分组与治疗 样本随机分为 5 组，每组含 10 颗牙。第一 组： 正常牙本质； 第二组： 正常牙本质 + 普通含氟牙膏； 第三组： 正常牙本质 + 高露洁专效抗敏牙膏； 第四组： 正常牙本质 + 舒 适达速效抗敏牙膏； 第五组： 正常牙本质 + 冷酸灵双重抗敏牙 膏。实验样本从人工唾液中取出，然后用去离子水冲洗，气枪 吹干，牙膏均匀覆盖在牙本质表面，轻刷试牙本质表面，再用蒸 馏水冲洗干净，吹 干。 对 照 样 本 不 需 要 用 牙 膏 处 理 牙 本 质 表 面。实验样本每次涂布轻刷试时间为 3 min（ 模拟常人刷牙时 间） ，分别在 0，8，24，36 h 涂布（ 模拟刷牙间隙，短时间判断临 床效果） ，在间歇期均放置在人工唾液中，人工唾液每 12 小时 更新 1 次。样本平时置于 37℃ 恒温箱中。 1. 4 AFM 观察 在相应的时间节点上用 AFM 获取实时的图 像，压电扫描范围大小约为 50 μm × 50 μm 区域，在 Z 轴上设置 为 15 μm。范围大小约为 20 μm × 20 μm 区域，在 Z 轴上设置 为 10 μm。范 围 大 小 约 为 5 μm × 5 μm，在 Z 轴 上 设 置 为 2. 5 μm。分析每个样本 AFM 图像，至少 10 个不同的图片获取 实时平面图像。通过 AFM 软件获取晶体颗粒的大小，高度等 信息，以及下一步测算牙本质小管面积和相对面积的高度图。 数据的获得至少是 10 个有选择性镜像图片平均值。在 5 个实 验组做同样的测算工作。 1. 5 图像分析 将 AFM 获得的 50 μm × 50 μm 大小的图像导 入 Image-ProPlus5. 0 图像分析系统，定义灰度值等级，软件自动 识别牙本质小管边界，用色彩标记小管边界。测量 AFM 高度 图内的牙本质小管面积及相对面积（ 即小管面积占整个图片面 积的百分比） 。 1. 6 统计学处理 采用 SPSS15. 0 软件进行单因素方差分析。
司庆宗等 三种脱敏牙膏封闭牙本质小管的效果比较 第 3 期
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三种脱敏牙膏封闭牙本质小管的效果比较
司庆宗 安晓莉 赵望泓 刘 斌 张宝平1 （ 兰州大学口腔医学院，甘肃 兰州 730000）
〔摘 要〕 目的 利用原子力显微镜（ AFM） 观察比较三种脱敏牙膏作用牙本质小管后的超微结构形态改变。方法 50 颗第一前磨牙去除颊 面颈部釉质和骨质暴露浅层牙本质，浸泡在人工唾液，随机分 5 组，第一组： 正常牙本质； 第二组： 正常牙本质 + 普通含氟牙膏； 第三组： 正常牙本质 + 高露洁专效抗敏牙膏； 第四组： 正常牙本质 + 舒适达速效抗敏牙膏； 第五组： 正常牙本质 + 冷酸灵双重抗敏牙膏； 第 2，3，4 和 5 组涂布牙膏 3 min 在 0， 8，24，36 h，AFM 获取牙本质小管封闭情况实时图像。采用图像分析软件量化牙本质小管的封闭程度。并对测量结果进行统计分析。结果 样本第 3，4，5 组牙本质小管封闭明显。三种脱敏牙膏组的牙本质小管面积和相对面积有显著性差异（ P ＜ 0. 05） 。结论 测试牙膏（ 高露洁，舒适达和冷酸 灵） 在体外模型能够有效封闭牙本质小管，防止牙本质过敏。
1 材料与方法 1. 1 实验材料 NanoWizard Ⅲ Atomic Force Microscope（ JPK， 德国） 、高露洁专效抗敏牙膏（ 3M 公司，美国） 、舒适达速效抗 敏牙膏（ 中美天津史克制药有限公，中美合资） 和冷酸灵双重抗 敏牙膏 （ 登 康 公 司，中 国 ） ，普 通 含 氟 牙 膏 （ 佳 洁 士，含 NaF 0. 11% ） 。 1. 2 标本的选择和制备 选择健康、完整、无龋损、无隐裂、无 釉质发育不全、无氟斑的离体第一前磨牙 50 颗，清洗牙结石和 菌斑，使用 5. 25% 的次氯酸钠溶液侵泡消毒 1 h，后储存在人工 唾液（ pH7. 0，14. 4 mmol / L NaCl； 16. 1 mmol / L KCl； 0. 3 mmol / L Cl2 ·6H2 O； 1. 0 mmol / L CaCl2 · 2H2 O； 2. 9 mmol / L K2 HPO4 ；
牙本质过敏症目前临床治疗主要是使用各种物理、化学、 激光等方法堵塞牙本质小管，防止小管内液体流动，达到脱敏 的目的〔1〕。目前市面上高露洁专效抗敏牙膏、舒适达速效抗敏 牙膏和冷酸灵双重抗敏牙膏都是利用钾盐等矿物质封闭牙本 质小管这一理论来防治牙过敏。目前观察牙本质的超微结构 主要是扫描电镜（ SEM） ，样本需要脱水，表面覆盖传导薄膜等 条件限制，SEM 图像定量信息可以有效进行比较分析，而对于 图像地形表面特性无法解释或阐明。原子力显微镜（ AFM） ，不 需要染色，脱水等复杂步骤，最小化样本准备，不仅能提供超微 结构镜像，还可以提供表面定量信息 （ 大小，外形，粗糙度，频 率，高度和深度等） 。该技术广泛应用于测定牙釉质和牙本质 的侵蚀的超微结构特性。本研究以高露洁专效抗敏牙膏、舒适 达速效抗敏牙膏和冷酸灵双重抗敏牙膏为牙本质脱敏剂，用普 通含氟牙膏作为对照，用 AFM 评价三种脱敏剂对牙本质脱敏 的超微结构作用效果。
基金项目： 中央高校基本科研业务费专项资金（ lzujbky-2012-160） 1 兰州大学土木工程与力学学院 通讯作者： 刘 斌（ 1967-） ，男，教授，博士，博士生导师，主要从事口腔
临床医学研究。 第一作者： 司庆宗（ 1978-） ，男，硕士，讲师，主要从事口腔内科临床及基
础研究。
0. 10 mg /100 ml 羧甲基纤维素钠） 。样本使用 TR-13 高速金刚 砂车针在喷水状态下磨除唇侧面颈部牙釉质和牙骨质暴露浅 层牙本质，在水灌注情况下使用碳化硅砂纸（ 600 ～ 2 000） 打磨 形成 3 mm × 3 mm 平面，后超声清洗 10 min。 1. 3 分组与治疗 样本随机分为 5 组，每组含 10 颗牙。第一 组： 正常牙本质； 第二组： 正常牙本质 + 普通含氟牙膏； 第三组： 正常牙本质 + 高露洁专效抗敏牙膏； 第四组： 正常牙本质 + 舒 适达速效抗敏牙膏； 第五组： 正常牙本质 + 冷酸灵双重抗敏牙 膏。实验样本从人工唾液中取出，然后用去离子水冲洗，气枪 吹干，牙膏均匀覆盖在牙本质表面，轻刷试牙本质表面，再用蒸 馏水冲洗干净，吹 干。 对 照 样 本 不 需 要 用 牙 膏 处 理 牙 本 质 表 面。实验样本每次涂布轻刷试时间为 3 min（ 模拟常人刷牙时 间） ，分别在 0，8，24，36 h 涂布（ 模拟刷牙间隙，短时间判断临 床效果） ，在间歇期均放置在人工唾液中，人工唾液每 12 小时 更新 1 次。样本平时置于 37℃ 恒温箱中。 1. 4 AFM 观察 在相应的时间节点上用 AFM 获取实时的图 像，压电扫描范围大小约为 50 μm × 50 μm 区域，在 Z 轴上设置 为 15 μm。范围大小约为 20 μm × 20 μm 区域，在 Z 轴上设置 为 10 μm。范 围 大 小 约 为 5 μm × 5 μm，在 Z 轴 上 设 置 为 2. 5 μm。分析每个样本 AFM 图像，至少 10 个不同的图片获取 实时平面图像。通过 AFM 软件获取晶体颗粒的大小，高度等 信息，以及下一步测算牙本质小管面积和相对面积的高度图。 数据的获得至少是 10 个有选择性镜像图片平均值。在 5 个实 验组做同样的测算工作。 1. 5 图像分析 将 AFM 获得的 50 μm × 50 μm 大小的图像导 入 Image-ProPlus5. 0 图像分析系统，定义灰度值等级，软件自动 识别牙本质小管边界，用色彩标记小管边界。测量 AFM 高度 图内的牙本质小管面积及相对面积（ 即小管面积占整个图片面 积的百分比） 。 1. 6 统计学处理 采用 SPSS15. 0 软件进行单因素方差分析。
司庆宗等 三种脱敏牙膏封闭牙本质小管的效果比较 第 3 期
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三种脱敏牙膏封闭牙本质小管的效果比较
司庆宗 安晓莉 赵望泓 刘 斌 张宝平1 （ 兰州大学口腔医学院，甘肃 兰州 730000）
〔摘 要〕 目的 利用原子力显微镜（ AFM） 观察比较三种脱敏牙膏作用牙本质小管后的超微结构形态改变。方法 50 颗第一前磨牙去除颊 面颈部釉质和骨质暴露浅层牙本质，浸泡在人工唾液，随机分 5 组，第一组： 正常牙本质； 第二组： 正常牙本质 + 普通含氟牙膏； 第三组： 正常牙本质 + 高露洁专效抗敏牙膏； 第四组： 正常牙本质 + 舒适达速效抗敏牙膏； 第五组： 正常牙本质 + 冷酸灵双重抗敏牙膏； 第 2，3，4 和 5 组涂布牙膏 3 min 在 0， 8，24，36 h，AFM 获取牙本质小管封闭情况实时图像。采用图像分析软件量化牙本质小管的封闭程度。并对测量结果进行统计分析。结果 样本第 3，4，5 组牙本质小管封闭明显。三种脱敏牙膏组的牙本质小管面积和相对面积有显著性差异（ P ＜ 0. 05） 。结论 测试牙膏（ 高露洁，舒适达和冷酸 灵） 在体外模型能够有效封闭牙本质小管，防止牙本质过敏。
1 材料与方法 1. 1 实验材料 NanoWizard Ⅲ Atomic Force Microscope（ JPK， 德国） 、高露洁专效抗敏牙膏（ 3M 公司，美国） 、舒适达速效抗 敏牙膏（ 中美天津史克制药有限公，中美合资） 和冷酸灵双重抗 敏牙膏 （ 登 康 公 司，中 国 ） ，普 通 含 氟 牙 膏 （ 佳 洁 士，含 NaF 0. 11% ） 。 1. 2 标本的选择和制备 选择健康、完整、无龋损、无隐裂、无 釉质发育不全、无氟斑的离体第一前磨牙 50 颗，清洗牙结石和 菌斑，使用 5. 25% 的次氯酸钠溶液侵泡消毒 1 h，后储存在人工 唾液（ pH7. 0，14. 4 mmol / L NaCl； 16. 1 mmol / L KCl； 0. 3 mmol / L Cl2 ·6H2 O； 1. 0 mmol / L CaCl2 · 2H2 O； 2. 9 mmol / L K2 HPO4 ；