小鼠前脑缺血灌注损伤模型海马CA1区的形态学观察

ａｒｅａ
ｉｎ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｒｅｍｅｄｙ ｆｏｒ
ａｆｔｅｒ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ．ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．
ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｓｉｘ ｇｒｏｕｐｓ：ｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ
ｍｉｎ后静推甘露醇。实验小鼠再灌注２４ ｈ后取脑，固定切片，ＨＥ染色，对照观察海马 ＣＡｌ区细胞损伤程度，筛选脑缺血再灌注损伤形成变性神经元的合适缺血时间，为选取 合适的实验平台提供依据；观察缺血后脱水治疗对变性神经元形态的影响，评价模型用于 缺血再灌注后干预实验的可用性。 结果：两动脉阻断法建立小鼠前脑缺血再灌注损伤模型，再灌注时间定为２４ｈ，随缺
Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｓｉｘｔｙ ｍｉｃｅ
ｇｒｏｕｐ（Ａ），
ｉｓｃｈｅｍｉａ ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ（Ｂ），６０ ｍｉｎ（Ｃ），９０ ｍｉｎ（Ｄ），１２０ ｍｉｎ（Ｅ）ｇｒｏｕｐｓ，ｍａｎｎｉｔｏｌ ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ
（Ｆ）．Ｍａｎｎｉｔｏｌ
ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｉｍｍｅｄｉａｔｅｌｙ
ｎｏ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｇｒｏｕｐ Ｆ ａｎｄ Ａ（Ｐ ａｖｅｒａｇｅ＞０．０５）．
ｎｅｕｒｏｎｓ
Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｇｒｏｕｐ Ａ，ｔｈｅ
Ｃ，Ｄ
ｄｅｎａｔｕｒｅｄ
ｒａｔｅｓ ｏｆ
ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ＣＡｌ
Ｆ ｉｓ ｌｅｓｓ
ａｒｅａ
ｉｎ ｇｒｏｕｐｓ Ｂ， ａｖｅｒａｇｅ＜
山西医科人学硕士学位论文
小鼠前脑缺血再灌注损伤模型海马ＣＡｌ区的形态学观察
摘要
目的：探索以变性神经元为观察对象，适用于脑缺血再灌注后干预实验的动物模型。 方法：６０只小鼠随机分为６组：假手术组（Ａ组），缺血３０
１２０ ｍｉｎ、６０ ｍｉｎ、９０ ｍｉｎ、
ｍｉｎ组（分别为Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ组）和甘露醇干预组（Ｆ组）。甘露醇干预组在缺血１２０
ｉｎｊｕｒｅｄ ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｎ
ｇｒｏｕｐ Ｃ Ｗａｓ ｉｎ ｂａｌａｎｃｅ．
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：１．Ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ６０ ｍｉｎ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ｉｎ ｍａｋｉｎｇ ａｎｄ ｎｉｃｅ ｉｎ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ
ｎｅｕｒｏｎｓ ｃａｒｌ
ａｎｄ
Ｅ ｗｅｒｅ
ｈｉｇｈｅｒ（Ｐ ａｖｅｒａｇｅ＜０．０５）．Ｓｉｍｉｌａｒｌｙ，Ｇｒｏｕｐ
ｎｏ
ｔｈａｎ ｇｒｏｕｐ Ｅ（Ｐ
０．０５）・Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂ来自ｔｗｅｅｎｇｒｏｕｐ Ａ
ａｎｄ Ｆ（Ｐ
ａｖｅｒａｇｅ＞０．０５）．Ｔｈｅ
ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｖｅｒｓｅ
————————～——～一——
Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ
ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ＣＡＩ ｆｏｒｅｂｒａｉｎ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ Ａｂｓｔｒａｅｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ
ｄｅｎａｔｕｒｅｄ
ｎｅｕｒｏｎｓ ａ
坐堕堕型叁堂墅：兰兰丝堡塞
血时间延长（０～１２０ｍｉｎ），海马ＣＡｌ区细胞变性、坏死程度加重，存活细胞逐渐减少，
缺血后甘露醇静推，可明显改善缺血再灌注所致的损伤程度。海马ＣＡｌ区存活细胞数在
Ｃ、Ｄ、Ｅ组均明显低于Ａ组（Ｐ＜０．０１），而Ｆ组和Ｅ比较差别有统计学意义（Ｐ＜０．０１），
Ｆ组和Ａ组比较无明显差别（Ｐ＞０．０５）；变性细胞率在Ａ组、Ｂ组、Ｃ组、Ｄ组逐渐升高， 在Ｅ组由于细胞坏死严重导致变性细胞比例减少，Ｂ组、Ｃ组、Ｄ组、Ｅ组和Ａ组比较差
ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ６ ｇｒｏｕｐｓ ａｆｔｅｒ ２４ ｈ
ｒｅｐｅｒ飚ｉｏｎ．
ａＳ ｃａｎ
Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｔｉｍｅ ｉｎｖａｒｉａｂｌｅ，ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｗａｓ
ｉｎｊ ｕｒｅｄ ｍｏｒｅ
ａｎｄ ｍｏｒｅ ｓｅｒｉｏｕｓｌｖ
ｉｓｃｈｅｍｉａ ｔｉｍｅ ｐｒｏｌｏｎｇｓ ｆｒｏｍ ｏｂｓｔｒｕｃｔｅｄ
别有统计学意义（Ｐ＜０．０５），Ｆ组和Ｅ比较差别有统计学意义（Ｐ＜０．０５），Ｆ组和Ａ组比
较无明显差别（Ｐ＞０．０５）。其中Ｃ组海马ＣＡｌ区不同程度受损细胞比例较均衡。 结论：１、小鼠前脑缺血６０ ｍｉｎ再灌注２４ ｈ模型，成本低廉，简便易成，成功率高， 重复性好，能够提供脑缺血再灌注后变性神经元的集中观察区域。２、模型可以用来评价 各种脑缺血再灌注后干预措施的优劣。３、文章采用ＨＥ染色还有一定局限性，只能对细 胞形态作出初步评价，后续可以采用更先进的手段，如共聚焦显微镜、免疫组化检测等等， 对细胞功能状态进行评价，进一步完善对模型的研究。４、对模型再灌注时间超过２４ ｈ的 形态学改变有待去努力研究。 关键词：脑缺血，再灌注损伤，海马ＣＡｌ区，变性神经元
ａｎｄ
２４ ｈ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｓ ｌｏｗ ｃｏｓｔ．
ａ
ｐｒｏｖｉｄ
ｒｅｇｉｏｎ ｉｎ ｗｈｅｒｅ ｄｅｎａｔＩＨ．ｅｄ
ｅｘｉｓｔ ｉｎｔｅｎｓｉｖｅｌｙ．２．Ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ
Ｃａｎ
ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｒｅｍｅｄｉｅｓ ｆ－ｏｒ ｄｅｎａｎｌｒｅｄ
ｏｒ
ｚｅｒｏ
ｔｏ １ ２０
ｍｉｎ．Ｃｅｒｅｂｒａｌ
ｉｓｃｈｅｍｉａ．ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ
ｂｅ
ｈｅａｌｅｄ ｂｙ
ｉｎｊｅｃｔｉｎｇ ｍａｎｎｉｔ０１．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｇｒｏｕｐ Ａ，ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ
ｏｆ ｌｉｖｉｎｇ ｃｅｌｌ
ｉｎ ｇｒｏｕｐｓ Ｃ，Ｄ，Ｅ ｗｅｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｌｅｓｓ（Ｐ ａｖｅｒａｇｅ＜０．０ １）．Ｇｒｏｕｐ Ｆ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｇｒｏｕｐ Ｅ（Ｐ ａｖｅｒａｇｅ＜０．０ １），ｂｕｔ ｔｈｅｒｅ Ｗａｓ
ｉｎｊ ｅｃｔｅｄ
ｍａｎｎｉｔｏｌ ａｆｔｅｒ １ ２０ ｍｉｎ ｉｓｃｈｅｍｉａ．Ｔｏ
ｏｒ
ｄｅｃｉｄｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｗｈｅｔｈｅｒ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｗｏｕｌｄ ｂｅ ｆｅａｓｉｂｌｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ＣＡ １
ａｒｅａ
ｎｏｔ，ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ