碱性磷酸酶Km值测定
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V= Vmax[S] Km+[S] 两边同取倒数 Km 1/V= 1/[S] + 1/Vmax Vmax （林－贝氏方程） 贝氏方程）
本实验以碱性磷酸酶为样品： 本实验以碱性磷酸酶为样品： 碱性磷酸酶能分解磷酸苯二钠产生酚和磷 酚在碱性溶液中与4 酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作 经铁氰化钾氧化生成红色的醌衍生物， 用，经铁氰化钾氧化生成红色的醌衍生物， 根据红色的深浅可测出酶活力的高低， 根据红色的深浅可测出酶活力的高低，测 定不同浓度底物时的酶活性。 定不同浓度底物时的酶活性。
V Vmax
Hale Waihona Puke Baidu
[S]
Km值的推导
当反应速度为最大反应速度一半时 V Vmax Vmax/2 Km [S]
Vmax 2
Vmax[S] ＝ Km + [S] Km＝[S]
∴Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半 时的底物浓度，单位是mol/L。 时的底物浓度，单位是 。
双倒数作图法(double 双倒数作图法(double reciprocal plot)， plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver贝氏(LineweaverBurk)作图法 Burk)作图法
碱性磷酸酶Km值测定 碱性磷酸酶Km值测定 Km
一、实验目的
1.了解底物浓度对酶促反应速度的影响 1.了解底物浓度对酶促反应速度的影响 2.了解米孟方程、Km值的物理意义及双 2.了解米孟方程、Km值的物理意义及双 了解米孟方程 倒数作图求Km的方法。 Km的方法 倒数作图求Km的方法。
二、实验原理
三、操作方法
参见实验讲义
四、思考题
1.测定Km值还有哪些方法？ 1.测定Km值还有哪些方法？ 测定Km值还有哪些方法 2.测定Km值有何实际意义？ 2.测定Km值有何实际意义？ 测定Km值有何实际意义
本实验以碱性磷酸酶为样品： 本实验以碱性磷酸酶为样品： 碱性磷酸酶能分解磷酸苯二钠产生酚和磷 酚在碱性溶液中与4 酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作 经铁氰化钾氧化生成红色的醌衍生物， 用，经铁氰化钾氧化生成红色的醌衍生物， 根据红色的深浅可测出酶活力的高低， 根据红色的深浅可测出酶活力的高低，测 定不同浓度底物时的酶活性。 定不同浓度底物时的酶活性。
V Vmax
Hale Waihona Puke Baidu
[S]
Km值的推导
当反应速度为最大反应速度一半时 V Vmax Vmax/2 Km [S]
Vmax 2
Vmax[S] ＝ Km + [S] Km＝[S]
∴Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半 时的底物浓度，单位是mol/L。 时的底物浓度，单位是 。
双倒数作图法(double 双倒数作图法(double reciprocal plot)， plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver贝氏(LineweaverBurk)作图法 Burk)作图法
碱性磷酸酶Km值测定 碱性磷酸酶Km值测定 Km
一、实验目的
1.了解底物浓度对酶促反应速度的影响 1.了解底物浓度对酶促反应速度的影响 2.了解米孟方程、Km值的物理意义及双 2.了解米孟方程、Km值的物理意义及双 了解米孟方程 倒数作图求Km的方法。 Km的方法 倒数作图求Km的方法。
二、实验原理
三、操作方法
参见实验讲义
四、思考题
1.测定Km值还有哪些方法？ 1.测定Km值还有哪些方法？ 测定Km值还有哪些方法 2.测定Km值有何实际意义？ 2.测定Km值有何实际意义？ 测定Km值有何实际意义