奶粉中三聚氰胺样品前处理及HPLC检测方法
检测奶粉三聚氰胺方法
检测奶粉三聚氰胺方法
奶粉中三聚氰胺的检测方法主要有以下几种：
1. HPLC-UV法：利用高效液相色谱技术结合紫外检测器，通过样品中三聚氰胺的特征吸收峰进行定量分析。
2. LC-MS/MS法：利用液相色谱联用串联质谱仪的方法，对样品中的三聚氰胺进行定量分析，具有较高的灵敏度和准确性。
3. 免疫法：通过制备抗三聚氰胺抗体或利用商用的抗体盒，然后利用抗体与三聚氰胺结合形成特定复合物，并通过免疫反应进行检测和定量。
4. 酶法：利用三聚氰胺酶催化三聚氰胺分解产生氨气，然后利用氨气检测仪器进行定量分析。
需要注意的是，以上方法在检测奶粉中三聚氰胺时，通常需要先进行样品的预处理步骤，如提取、净化、富集等，以提高检测的灵敏度和准确性。
此外，不同的方法对样品的处理和仪器设备要求也有所不同，具体操作还需要参考相关的检测标准和方法说明。
奶粉中三聚氰胺样品前处理及HPLC检测方法
1、高pH条件Buffer：00mM的NH4AC流动相：Buffer:ACN=95:5
流速：1.0ml/min
进样量：样品先用70%ACN溶解成约1mg/ml，用ACN稀释成0.1mg/ml，进10ul
柱温：40℃
波长：240nm
色谱柱C8 4.6*250mm 或者C18
2、离子对色谱法 色谱柱： C8 4.6*250mm 流动相：缓冲液：乙腈=85：15 缓冲液：10mM 柠檬酸，10mM 辛烷磺酸钠，调 pH 为 3.0。 流速：1.0ml/min 柱温：40 oC 波长：240nm 或者： 色谱柱： C18 4.6*250mm 缓冲液：10 mM柠檬酸, 10 mM庚烷磺酸钠 流动相：缓冲溶液：乙腈=85：15 流速：1.0ml/min 柱温：40℃ 波长：240nm
三聚氰胺样品前处理方法
方法一： .称取试样10克（±0.01g)于容量瓶中，加流动相溶液100ml溶解，超声提取30min,静置，取上层，8000转高速离 心，取上层过0.45um滤膜。备用。 方法二： 称取试样10克（±0.01g)于容量瓶中，加50%乙腈－水溶液100ml溶解，超声提取30min,静置，取上层，5000转 高速离心，取上层过0.45um滤膜。备用。 方法三： 称取试样5克（±0.01g)，加15ml 1%三氯乙酸，超声提取30min，8000转高速离心，上层用滤纸滤过，将样品上 活化的MCX柱(Oasis MCX 3cc/60mg, PN: 186000254)，用3ml水，3ml甲醇洗，抽干，5％氨水甲醇溶液3ml洗 脱，蒸干，用2：8甲醇－水定容，过0.45um滤膜，备用。 方法四： 标样：取 50mg 三聚氰胺标准品，以 20%甲醇溶解定容至 50ml 得到 1000ppm 的标准溶液，使用时，以提 取液（0.1%三氯乙酸）稀释至所要的浓度。 提取： 称取样品 5g，加入 50ml 0.1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入 2ml 2%乙酸铅溶液，超声 20min。然后取 部分溶液转移至10ml离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3ml过混合阳离子交换小柱Oasis MCX。 净化： Oasis MCX小柱，60mg/3ml，活化及平衡：3ml甲醇，3ml水，上样：加入提取液3ml，淋洗：3ml水；3ml甲醇； 弃去淋洗液并将小柱抽干，洗脱：5ml 5%氨化甲醇（v/v）洗脱。（5%氨化甲醇的配置：5ml 氨水+95ml 甲醇），. 浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至 2ml，HPLC 分析或衍生后GC/MS 分析。
高效液相色谱检测三聚氰胺样品前处理
超高效液相色谱法检测乳与乳制品中三聚氰胺操作规程1.原理试样用三聚乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用超高效液相色谱测定，外标法定量。
2.试剂与材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
2.1甲醇:色谱纯。
2.2乙腈：色谱纯。
2.3 氨水：含量为25%〜28%。
2.4三氯乙酸。
2.5柠檬酸。
2.6辛烷磺酸钠:色谱纯。
2.7甲醇水溶液:准确量取50 mL甲醇和50 mL水,混匀后备用。
2.8三氯乙酸溶液（1%）：准确称取10 g三氯乙酸于1 L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用。
2.9氨化甲醇溶液（5%）：准确量取5 mL氨水和95 mL甲醇,混匀后备用。
2.10离子对试剂缓冲液:准确称取2.10 g柠檬酸和2.16 g辛烷磺酸钠,加入约980 mL水溶解，调节pH至3.0后，定容至1 L备用。
2.11三聚氰胺标准品:CAS 108-78-01,纯度大于99.0%。
2. 12三聚氰胺标准储备液：准确称取100 mg（精确到0. 1 mg）三聚氰胺标准品于100 mL容量瓶中，用甲醇水溶液（3. 2. 7）溶解并定容至刻度，配制成浓度为1 mg/mL的标准储备液，于4 "C避光保存。
2.13阳离子交换固相萃取柱:混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，填料质量为60 mg,体积为3 mL,或相当者。
使用前依次用3 mL甲醇、5 mL水活化。
2.14定性滤纸。
2.15微孔滤膜：0.2 μm水系相。
2.16微孔滤膜：0.2 μm有机相。
2.17氮气：纯度大于等于99.999%。
3.样品前处理3.1 流动相配制a.配制好的离子对试剂缓冲液（2.10）,需经0.2μm的水系膜抽滤，超声脱气后，待用；b.乙腈需经0.2μm的有机膜抽滤，超声脱气后，待用；c.流动相：C18柱：离子对试剂缓冲液（3.2.10）-乙腈（90 + 10,体积比），混匀，待用；3.2提取a.称取2 g（精确至0.01 g）试样于50 mL具塞塑料离心管中，加入15 mL三氯乙酸溶液（2. 8）和5 mL乙睛，超声提取10 min，再振荡提取10 min后，以不低于4 000 r/min离心10 min。
乳中三聚氰胺的测定
乳中三聚氰胺的测定概述三聚氰胺是一种有机化合物，常用于工业生产中的胶粘剂和树脂制造等。
然而，由于其毒性和致癌性，三聚氰胺被禁止在食品和饲料中使用。
因此，对于乳制品中三聚氰胺的测定显得尤为重要。
本文将介绍乳中三聚氰胺的测定方法及其应用。
一、乳中三聚氰胺的来源和危害乳制品是人们日常生活中常见的食品之一，而乳中三聚氰胺是一种常见的污染物。
三聚氰胺通常来自于牲畜饲料中的添加剂，当牲畜摄入三聚氰胺过多时，其代谢产物会通过牛奶等分泌物进入乳制品中。
三聚氰胺对人体健康有严重危害，可能导致泌尿系统疾病、肾结石甚至导致肾衰竭。
二、乳中三聚氰胺的测定方法1. 红外光谱法红外光谱法是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。
该方法基于三聚氰胺在特定红外光波长下吸收的特性，通过测量样品中红外光的吸收强度来确定三聚氰胺的含量。
红外光谱法具有快速、准确的优点，但需要专业的仪器设备和操作技术。
2. 气相色谱法气相色谱法也是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。
该方法通过将样品中的三聚氰胺蒸发并分离，然后通过气相色谱仪进行定量分析。
气相色谱法具有灵敏度高、分离效果好的优点，但需要较长的操作时间和较高的设备要求。
3. 液相色谱法液相色谱法是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。
该方法通过将样品中的三聚氰胺溶解并分离，然后通过液相色谱仪进行定量分析。
液相色谱法具有准确度高、操作简便的优点，但需要一定的样品前处理步骤。
三、乳中三聚氰胺的应用1. 食品安全检测乳中三聚氰胺的测定在食品安全检测中具有重要意义。
通过对乳制品中三聚氰胺的测定，可以保障消费者的健康和权益，防止不合格产品上市和流入市场。
2. 生产控制与质量保障乳制品生产过程中对三聚氰胺的测定也非常重要。
通过对原料和成品中三聚氰胺的监测，可以及时发现和控制潜在的污染源，确保产品质量和生产工艺的稳定性。
3. 法律监管与标准制定乳中三聚氰胺的测定在法律监管和标准制定中起着重要的作用。
通过对乳制品中三聚氰胺含量的限制和监测，可以制定相应的法律法规和标准，保障乳制品行业的健康发展。
奶粉中三聚氰胺的测定方法
奶粉中三聚氰胺的测定方法发布时间：2008年9月22日GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺Spectra-Quad实现三聚氰胺含量在线检测超高效液相色谱—电喷雾串联质谱法测定饲料中残留的三聚氰胺反相高效液相色谱法测定饲料中三聚氰胺的含量高效液相色谱-二极管阵列法测定高蛋白食品中的三聚氰胺高效液相色谱法（HPLC）测定饲料中三聚氰胺的含量高效液相色谱-四极杆质谱联用测定饲料中三聚氰胺含量固相萃取与高效液相色谱联用测定宠物食品中三聚氰胺液相色谱串联质谱法（LC-MSMS）分析宠物食品中三聚氰胺液相色谱-串联质谱法测定饲料中三聚氰胺残留GC-MS法测定动物食品中的三聚氰胺测定方法本实验中综合各方法稳定性进行比较，主要介绍以下三种：• 固相萃取（SPE）方法*HPLC-UV检测方法•LC-MS检测方法（仅供参考）检测中所需的仪器与条件・Agile ntllOO高效液相色谱仪(美国，Agile nt公司)；二极管阵列检测器(DAD)，检测波长240nm,柱温：40C。
(1)AgelaVenusilTMASBC18(4.6 x 250mm);缓冲液：10mM 柠檬酸,10mM 庚烷磺酸钠；流动相：缓冲溶液：乙腈=85: 15;流速：1.0mL/min。
(2)AgelaVenusilTMASBC8(4.6 x 250mm);流动相：缓冲液：乙腈=85 : 15;缓冲液：10mM 柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0;流速：1.0mL/min ;*离子交换固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾杰尔科技有限公司)混合型的阳离子交换柱(Cleanert PCX 60mg/3mL)50支*台式高速(微量)离心机TG16-WS/TG16-W (湖南湘仪离心机仪器有限公司)(1)角转子：12* 1.5ml; 12* 10ml 转速》8000rpm/min，微机控制可定时；常温(2)离心管：10ml.或1.5ml (一套)*三聚氰胺标准品1瓶(250mg, > 99.5%)*三聚氰胺分析方法手册1份其他试剂饲料/奶粉样品；甲醇、乙腈；氨水、乙酸铅、三氯乙酸、柠檬酸、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠(Sigma公司)；甲醇为色谱纯，其他均为化学纯。
实验一 原料乳与乳制品中三聚氰胺的HPLC检测
实验一原料乳与乳制品中三聚氰胺的HPLC检测一、实验目的掌握HPLC检测乳及其制品中三聚氰胺含量的原理与方法。
’二、实验原理样品中的三聚氰胺经三氯乙酸一乙腈提取，阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测定，外标法定量。
三、仪器与试材1．仪器与器材高效液相色谱仪岛津LC-20AT(带有紫外检测器)、离心机、超声波水浴、固相萃取装置、氮气吹干仪、涡旋混合器等。
2．试剂除特别说明外，实验所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。
(1)常规试剂及其他：甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、氨水(25％～28％)、三氯乙酸、柠檬酸、辛烷磺酸钠(色谱纯)、定性滤纸、海砂[化学纯，粒度为0．65～0．85m m，二氧化硅(Si O2含量为99％]、0.2μm 微孔滤膜、氮气(纯度≥99．999％)。
(2)常规溶液：甲醇水溶液(1+1，体积比)、三氯乙酸溶液(1％)、5％氨水一甲醇(1+19，体积比)、离子对试剂缓冲液(取2.10g柠檬酸和2.16g辛烷磺酸钠，加入约980mL水溶解，调节pH至3.0后，定容至1L)。
(3)阳离子交换固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯一二乙烯基苯高聚物，60mg，3mL，或相当者。
使用前依次用3mL甲醇、5mL水活化。
(4)三聚氰胺标准储备液(1mg／mL)：称取100．0mg三聚氰胺标准品(纯度大于99．0％)于100mL容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容至刻度，于4℃避光保存。
3．实验材料4～5种液态奶、奶粉、酸奶、冰激凌或奶糖，各50g。
四、实验步骤1．样品提取(1)称取2．00g样品于50mL具塞塑料离心管中，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超声提取10min，再振荡提取10min后，以4000r／min离心10min。
(2)上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，以三氯乙酸溶液定容至25mL。
(3)取5mL滤液，加入5m L水混匀后用作净化液。
使用岛津HPLC法测定奶粉及奶制品中三聚氰胺的残留
使用岛津HPLC法测定奶粉及奶制品中三聚氰胺的残留设备的准备及前处理：1、试剂1.1 甲醇：色谱纯。
1.2 乙腈：色谱纯。
1.3 氨水：浓度25%-28%1.4 混合性阳离子交换固相萃取柱：60mg，3mL。
1.5 三氯乙酸溶液10g/L：称取10g三氯乙酸加水至1000mL。
1.6 氨水甲醇溶液：量取5mL氨水，溶解于100mL甲醇中。
1.7 乙酸铅溶液22g/L：取22g乙酸铅用约300mL水溶解后定容至1L。
1.8 滤膜：0.45um，有机相。
1.9 甲醇溶液：200mL甲醇（1.1）加入800mL一级水，混匀。
1.10 流动相：称取2.02g庚烷磺酸钠和2.10g柠檬酸于1L容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。
取该溶液900mL加入100mL乙腈（1.2）。
1.11三聚氰胺标准品（纯度＞99%）。
1.12 三聚氰胺标准溶液1.12.1 标准储备液：称取100mg（精确到0.1mg）的三聚氰胺标准品，用甲醇溶液（1.9）溶解并定容于100mL容量瓶中，该溶液浓度为1mg/mL，于4℃冰箱内贮存，有效期3个月。
1.12.2 标准中间液：吸取标准储备液5.00mL，于50mL容量瓶内，用甲醇溶液（1.9）定容至50mL，该溶液三聚氰胺浓度为100ug/mL，于4℃冰箱内贮存，有效期1个月。
1.12.3 标准工作液：用移液管分别移取标准中间液1mL、5mL、10mL、25mL、50mL于5个100mL容量瓶内，用甲醇溶液（1.9）定容，该溶液三聚氰胺浓度为1.0ug/mL、5.0ug/mL、10ug/mL、25ug/mL、50ug/mL。
于4℃冰箱内贮存，有效期1周。
2、仪器设备高速离心机（转速可达到10000r/min以上）漩涡混合器超声波清洗器氮吹仪(控温可达到60℃以上)固相萃取装置及混合型阳离子交换固相萃取柱（与农业部行业标准有改动，省略）高速匀质器索氏提取器震荡摇床3、测定步骤3.1 提取奶粉样品取样5g、液态奶制品20g（精确至0.01g），准确加入50mL三氯乙酸溶液（1.5），加入乙酸铅溶液（1.7）。
乳制品中三聚氰胺的样品处理以及液相 液质的分析方法_update_
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什么是三聚氰胺？
三聚氰胺，英文名为Melamine，分子式是C3H6N6。又称蜜 胺、2 ，4 ，6-三氨基-1，3，5-三嗪。白色单斜棱晶。
三聚氰胺是一种重要的有机化工中间产品，主要用来制作三聚氰 胺树脂，具有优良的耐水性、耐热性、耐电弧性、优良阻燃性。用 途:可用于装饰板的制作，用于氨基塑料、粘合剂、涂料、币纸增强 剂、纺织助剂等。
上样
取2mL蜗旋振荡离心后的上清液
清洗步
3mL 水， 3 mL 甲醇
在复合模式下的强烈清洗 (去除酸性和中性物质) 目标化合物洗脱
三聚氰胺淋出：将目标化合物调至电中性
3 mL 5% 氨水甲醇
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奶粉样品前处理步骤（Oasis® MCX）
收集洗脱液
将上述洗脱液氮气吹干后，用流动相定容， 过滤后待上机测试
curve
柱温：30℃ 进样量：10ul 色谱柱：Acquity UPLC BEH HILIC色谱柱，2.1x 50mm, 1.7μm (186003460)
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液相色谱质谱联用（UPLC-MS/MS） 检测方法 质谱仪器条件：
仪器配置：Waters Acquity TQD系统（176001263） 操作软件：Waters Masslynx v4.1 电离模式：ESI positive Capillary Voltage: 3kV Desolvation gas: 氮气，600L/Hr Cone gas：氮气，50L/Hr Source temp.: 120 °C Desolvation temp.: 400°C 采集模式：Multiple Reaction Monitoring(MRM) 三聚氰胺质荷比：
奶粉中三聚氰胺的测定
奶粉中三聚氰胺的测定2篇奶粉中三聚氰胺的测定（一）近年来，随着食品安全问题的频发，人们对奶粉的质量和安全性关注度越来越高。
奶粉中是否含有三聚氰胺成为大家关注的一个焦点。
三聚氰胺是一种危害性较高的有机化合物，其摄入后可能对人体健康造成严重影响。
因此，准确测定奶粉中的三聚氰胺含量对于保障食品安全至关重要。
奶粉中三聚氰胺的测定方法主要有以下几种：高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、质谱联用技术等。
其中，HPLC法是目前常用的一种方法，具有灵敏度高、分离效果好、结果准确可靠的特点。
下面将详细介绍奶粉中三聚氰胺测定的HPLC法。
首先，在进行HPLC测定之前，需要对样品进行预处理。
通常的预处理方法有加热提取法和重复提取法。
加热提取法是将奶粉样品与盐酸或硫酸进行加热提取，将提取液经旋转蒸发干燥后再加入溶剂进行溶解；重复提取法是将奶粉样品与溶剂进行重复振荡提取，并对提取液进行浓缩。
这两种方法都可以有效提取样品中的三聚氰胺。
接下来，提取得到的样品需要经过进一步的处理。
常见的处理方法有固相萃取和亲水基固定相柱分离纯化两种。
固相萃取是利用固相萃取柱对样品进行进一步的纯化，去除潜在干扰物质；亲水基固定相柱分离纯化则是通过使用亲水基固定相柱将样品中的亲油性物质去除。
最后，进行HPLC测定。
将纯化后的样品溶液注入HPLC仪器中，通过进样器控制样品的进入。
在采用倒相色谱柱时，流动相通常为水-有机溶液的混合物。
通过调节流动相的组成和流速，可以实现三聚氰胺与其他组分的分离。
在检测方面，可选择紫外检测器或荧光检测器进行。
紫外检测器的最大吸收波长为226 nm，选择该波长进行检测能够提高测定的准确性和灵敏度。
综上所述，HPLC法是一种准确可靠的奶粉中三聚氰胺的测定方法。
通过样品预处理、纯化和HPLC测定等步骤，可以有效地检测奶粉中的三聚氰胺含量，为食品安全提供有力支持。
奶粉中三聚氰胺的测定（二）随着奶粉质量和安全问题的日益严峻，准确测定奶粉中的三聚氰胺成为保障食品安全的重要手段之一。
[HPLC测定乳制品中三聚氰胺含量]奶粉中三聚氰胺含量测定[修改版]
![[HPLC测定乳制品中三聚氰胺含量]奶粉中三聚氰胺含量测定[修改版]](https://img.taocdn.com/s3/m/2eddcf16524de518964b7df9.png)
摘要：在三聚氰胺的检测中采用沉淀剂沉淀、微波超声、离心分离相结合的方法提取，用高效液相色谱法测定，再用保留时间定性，外标法定量。
该方法能有效的排除乳制品中蛋白质、脂肪等大分子物质以及其它含氮物质对检测的影响，最低检测限为1.0mg/kg,回收率为98.0%～102.6%之间，因此能普及到乳制品的检验检测中。
关键词：hplc；乳制品；三聚氰胺三聚氰胺(melamine) 是一种重要的氮杂环有机化工原料，为白色或无色结晶，通常用于塑料制品中合成树脂的生产，部分亚洲国家也用来制造化肥。
三聚氰胺含氮量为66.6%，是蛋白质平均含量的4.16倍，牛奶的151倍，奶粉的23倍。
每100g牛奶中添加0.1克三聚氰胺，就能提高0.4%含氮量，因此三聚氰胺也被人称为"蛋白精"。
食品工业历来通用的蛋白质测试方法为凯氏定氮法，通过测定总氮来估算蛋白质含量。
这种方法只能知道氮的总量，不能识别氮的来源和氮源的种类，正是由于食品和饲料工业蛋白质含量测试方法的缺陷，给不法商人留下了制造伪劣食品的空间，出现了奶粉"三聚氰胺"事件，涉及面之广，性质之恶劣，危害之大到了令人发指的地步。
检测三聚氰胺的方法主要有高效液相色谱（hplc）法、气相色谱-质谱联用法(gc-ms)、elisa试剂盒法、毛细管电泳法、近红外线吸收检测法等，而高效液相色谱（hplc）法是一种最普遍而相对简便的方法。
通过摸索，结合沉淀剂沉淀、微波超声、离心分离方法，建立一种应用高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的方法，其检测达到了很好的效果。
1 材料与方法1.1 材料与试剂奶粉、纯牛奶、核桃花生奶、麦香奶、酸牛乳抽取的检验样品三聚氰胺（标准品，99.5%）、辛烷磺酸钠（色谱纯，99.5%）、乙腈（色谱纯，99.5%）、三氯乙酸（分析纯,99.5%）、乙酸铅（分析纯，99.5%）、柠檬酸（分析纯，99.5%）、甲醇（色谱纯, 99.9%）中国计量科学研究院、国药集团化学试剂有限公司、天津市科密欧化学试剂有限公司。
奶粉中三聚氰胺含量测定——实验步骤
高效液相色谱(HPLC-UV)法测定奶粉中三聚氰胺的含量一、实验目的：测量奶粉中三聚氰胺的含量是否达标。
二、仪器：高效液相色谱仪，离心机，固相萃取装置，柱温箱，紫外检测器，C18柱，超声波清洗器，pH 计，电子天平，氮气吹干仪，涡旋混合器；5mL移液管1支,1mL刻度移液管1支，25mL容量瓶1个，100mL容量瓶6个，100mL烧杯1个，微量进样器一支。
三、试剂：三聚氰胺标准品，1%三氯乙酸，氨水，柠檬酸，庚烷磺酸钠（色谱纯），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），二次水，甲醇水溶液（准确量取50mL甲醇和50mL水，混合备用），5%氨化甲醇（量取5mL氨水和95mL甲醇混合备用），离子对缓冲溶液（准确称取2.10g柠檬酸和2.02g 庚烷磺酸钠加水溶解后调节pH=3，定容至1L备用），三聚氰胺储备液（准确称取100mg三聚氰胺，在100mL容量瓶中用甲醇水溶液定容），净化柱（固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯），氮气。
四、实验步骤：1.样品预处理：准确称取2g样品，用10mL 1%三氯乙酸溶解后转移至25ml容量瓶中，乙腈定容。
超声提取10分钟后离心，干过滤。
用5mL移液管准确移取5mL过滤后的溶液过净化柱，依次用3mL水和3mL甲醇洗涤并抽干后后用约6mL 5%氨化甲醇洗脱。
洗脱液用氮气吹干后用1mL流动相定容，涡旋混合1分钟后经0.20 μm有机相滤膜过滤后进样。
2.色谱条件：C18 色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以离子对缓冲溶液+乙腈（85+15）作为流动相，流量为1.0 ml/min，柱温为35 ℃，检测波长为240 nm，进样量为20 μl。
3. 标准曲线的绘制：将三聚氰胺标准储备液（1.00×10^3 mg/L）用甲醇-水溶液（1+1）逐级稀释得到浓度为1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mg/L的标准系列溶液，以峰面积（y）对浓度（x）绘制标准曲线。
三聚氰胺检测分析的样品前处理
三聚氰胺检测分析的样品前处理针对三聚氰胺检测，目前常用的方法有酶标法、HPLC、LC-MS 、GC-MS等。
在进行上述方法检测之前。
均需对样品进行前处理。
由于样品的种类多种多样，如奶粉、液体奶、饲料、宠物食品、肉类、高蛋白食品等，前处理的方法各不相同。
一般来讲，液体样品（如液态奶）可以直接通过离心或过膜进行处理，固体样品可以先萃取，再通过离心或过膜进行处理，处理后的样品可以用酶标或HPLC进行检测。
下面分别以液态奶及奶粉为例，说明两种样品的前处理过程，以及离心机在样品制备过程中的应用。
1奶粉中三聚氰胺的检测方法（HPLC法）样品前处理方法(1) 标准样品配制：取50mg三聚氰胺标准品，用50%乙腈水定容50mL配得到1000ug/ml的标准溶液，使用时用50%乙腈稀释配得曲线。
(2) 提取：称取奶粉样品5g(或牛奶10ml)，，加入50ml 50%乙腈水，充分混匀，涡旋30s，超声20min。
然后取部分溶液转移至10mL离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液过膜上机。
（3）色谱条件：色谱柱：C18 4.6×250mm;缓冲液：10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠（或己烷磺酸钠、辛烷磺酸钠）;流动相：缓冲溶液:乙腈=92:8;流速：1.0mL/min;柱温：35℃;波长：240nm2牛奶中三聚氰胺的检测方法（酶标法）牛奶样品前处理方法（以BioXL酶标检测试剂盒为例）1 直接法----4℃，2000g离心15min, 撇去上层脂肪----取150ul用于检测注意：对于酸奶样品，应将PH值调节至中性再进行检测。
2抽提法----5ml牛奶样品，0-4℃，2000g离心15min, 撇去上层脂肪----转移2.5ml脱脂奶到玻管与5ml乙酸乙酯混合，涡旋1min,静置5-10min令其发生相分离----转移4ml乙酸乙酯上层到干净玻璃管仲，50℃温和氮流蒸发乙酸乙酯----残留物溶解于500ul稀释缓冲液（20mM PBS）(相当于2ml牛奶/500ul缓冲液)----取150ul用于检测（脱脂奶粉处理方法：将90ml蒸馏水加入10g脱脂奶粉，再按上述步骤操作。
高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺的含量
实验结果及判定
按照上述步骤进行检测，得出实验结论，如： 在符合要求的条件及规范的操作步骤的前提下， 经检验该样品的三聚氰胺含量为6.90mg/kh
根据GB/T 22388-2008规定，该样品三聚氰 胺含量6.90mg/kg，大于规定的2mg/kg,产 品不及格。
结论与反思
检测是手段，乳制品的质量安全才是最终的目的。 一旦发生食品质量安全事故，首先受害的是消费者。 在受到伤害的情况下，消费者对食品质量安全事故做 出的第一反应就是拒绝继续消费问题产品。于是就造 成了一系列的食品安全“伤害效应”，表现为对消费 者的伤害效应，对加工企业和奶站生产的伤害效应和 对广大奶农产生了伤害效应。 在总体上看，我国的奶业在农业中依然是一个发展 相对滞后的产业，牛奶的人均占有量和消费量都显著 低于世界平均水平，与发达国家的差距更大。要缩小 我国奶业与世界及发达国际的差距今后的道路还很漫 长，任务还很艰巨，需要以科学发展观为指导，把我 国奶业引向健康发展的道路。当前我国奶业所面临的 体制、机制以及技术层面的问题有很多，需要长期努 力逐步加以解决。
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三聚氰胺标准溶液的液相色谱图
7.401 4 6
mAU 1.6 1.4
三 聚 氰 胺
1.2
1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 2 8 10 mi n
定性鉴定与定量分析
待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范 围内，超出线性范围则应稀释后再进样分析。
两次进样图谱
第一次进样
第二次进样
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测定奶粉中三聚氰胺的含量 ——高效液相色谱法
生物工程1001班
目录
1 2 3
三鹿毒奶粉事件
液相色谱法简介 样品检测方案
高效液相色谱法检测奶制品中的三聚氰胺
高效液相色谱法检测奶制品中的三聚氰胺一、实验目的1、掌握反相离子对色谱法测定奶制品中三聚氰胺的原理和方法。
2、了解复杂样品进行色谱分析时前处理的方法和必要性。
二、实验原理三聚氰胺是一种常见的化工原料，有毒，若人体大量摄入，将引起泌尿系统结石等疾病。
2008年9月，三鹿奶粉事件发生后，三聚氰胺的危害被深入广泛的认识，同时食品安全问题也更加受到重视与关注。
反相高效液相色谱（RP-HPLC ）具有分离效率高，分析速度快，灵敏度高等优点，而且仪器较简单、工作条件要求较低，在有机物的分离与测定中有极为广泛的应用。
但三聚氰胺是强极性物质，在反相色谱柱上保留能力很弱，难以达到分离的目的。
三聚氰胺具有弱碱性，在酸性溶液中能形成阳离子。
若在流动相中加入与具有两亲作用的阴离子，则可与三聚氰胺形成具有疏水作用的离子对，从而使保留能力明显增强，达到与干扰组分分离的目的，这就称作离子对色谱。
测定阳离子一般采用烷基磺酸盐作为离子对试剂，测定阴离子一般采用烷基胺类作为离子对试剂。
奶制品的组成较复杂，一般含有大量的蛋白质和脂肪类物质，若不经过预先的分离处理，不仅干扰三聚氰胺的检出，还会对色谱柱造成一定的损伤，因此对待测样进行分离，纯化等预处理是十分重要的。
加入重金属离子可使蛋白质变性、凝聚，从而沉淀分离。
脂类和高级脂肪酸可在酸性条件下通过乙酸乙酯、乙醚、氯仿等的萃取除去。
反相离子对色谱测定三聚氰胺的定量下限约为0.1mg·L -1。
对于更低浓度的试样，需要使用灵敏度更高的色谱-质谱联用技术。
但由于仪器昂贵，维护较复杂，色谱-质谱联用技术的应用受到了限制。
通过阳离子交换树脂可使溶液中的三聚氰胺得到富集，从而有效的改善检出限。
近年来发展的固相微萃取技术将净化除杂和分离富集等步骤简化合并，使色谱分析试样前处理的效率有了显著的提高。
三、试剂与仪器试剂：PbAc （AR ） 0.2 mol·L -1（乙酸酸化），乙酸乙酯（AR ），乙酸（AR ），甲醇（AR ），氨水（AR ），732型强酸性离子交换树脂（40~60日）色谱流动相：A 、乙腈（色谱纯）；B 、KH 2PO 4（GR ） 0.05 mol·L -1；C 、H 3PO 4（GR ） 0.5 mol·L -1；D 、十二烷基磺酸钠（AR ） 0.2 mol·L -1仪器：P230型高效液相色谱仪，配UV 检测器；ODS C-18 色谱柱标样：三聚氰胺（纯度大于99.5%），用水配制成1.001g L -⋅标准储备液，4℃保存。
三聚氰胺检测方法HPLC
SCX-C18混合填料色谱柱分析奶粉中三聚氰胺发布者：CMSAdmin 发布时间：2013-09-26三聚氰胺（Melamine）含氮量为66.6％，折合成粗蛋白含量为416.27%，加入宠物饲料和牛奶中可以大幅提高蛋白质测定表观含量，但食用后可诱发肾衰竭并导致死亡，因此一直禁止在饲料和食品中使用。
2007年，国内外发生多起宠物因食用添加了三聚氰胺的宠物食品而致死的例子，大量相关产品被召回。
2008年9月，国内发生奶粉中三聚氰胺导致婴幼儿肾结石和肾功能衰竭甚至死亡的恶性事件。
目前对于三聚氰胺的检测，最常规的方法为LC方法。
但由于该化合物含有三个有机氮基团，极性强，反相柱上难以保留，无法达到分离效果。
文献报导的HPLC方法基本都须加入离子对试剂以增加在普通C18混合填料三聚氰胺的保留，但辛烷磺酸钠等离子对试剂恰恰限制了LC-MS的应用。
本文采用新型的SCX-C18填料颗粒，兼具离子交换和反相分离的特色谱柱测定三聚氰胺，该柱内填充的是均匀混合的SCX和普通C18点，检测中不需加入离子对试剂，还可应用与LCsolution联机，操作简便，灵敏度高。
仪器概况本实验使用岛津Prominence LC-20A高效液相色谱仪系统。
LC-20A是岛津制作所投入整体力量开发的新一代高效液相色谱仪，具有以下特点：优越的基本性能，轻松满足客户对仪器严格的要求；全自动化操作，实现了分析的高效率；高度对应网络要求的综合管理系统，改善分析工作环境。
在线脱气，SIL-20A自动进样器，CTO-20AC 本次实验所用仪器的具体配置为LC-20AD输液泵，DGU-20A3柱温箱，SPD-20A紫外可见检测器，CBM-20A控制器和LCsolution色谱工作站。
分析方法色谱柱：CAPcell Pak CR(1:4) 4.6×150mm 5μm检测波长：243nm流动相：15mM醋酸铵缓冲液(pH3.0):乙腈=7:3流速：1.2mL/min柱温：30℃进样量：10μL洗脱方式：等度洗脱。
高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺的含量
高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺的含量姓名：班级：学号：摘要：三聚氰胺是一种低毒的化工原料，动物实验结果表明，其在动物体内代谢很快且不会存留，主要影响泌尿系统。
乳制品中添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量偏高，从而使劣质食品通过食品检验机构的测试，就送检的奶粉样品，采用高效液相色谱法（HPLC）测定其中的三聚氰胺的含量。
关键词：三聚氰胺食品质量与安全奶粉标准依据高效液相色谱检测方法1材料与方法1.1盐酸（HCl）。
1.2盐酸苯肼（C6H8N2•HCl）。
1.3铁氰化钾（K3[Fe（CN）6]）。
1.4硫酸（H2SO4）。
1.5氢氧化钠（NaOH）。
1.6盐酸（HCl）（10+2）：量取100mL盐酸，加入20mL水中，混匀。
1.7盐酸（HCl）（1+1）：量取50mL盐酸，加入50mL水中，混匀。
1.7盐酸苯肼溶液（C6H8N2•HCl）（10g/L）：称取1.0g盐酸苯肼，加80mL水溶解，再加2mL盐酸（10+2），加水稀释至100mL，过滤，贮存于棕色瓶中。
1.8铁氰化钾溶液（K3[Fe（CN）6]）（20g/L）：称取2.0g铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。
1.9硫酸（H2SO4）（1+35）：量取1mL硫酸缓慢注入35mL水中，混匀。
1.10碘标准溶液（I2）（0.1mol/L）：配制和标定按照GB/T601或购商品化标准物质。
1.11硫代硫酸钠标准滴定溶液（Na2S2O3）（0.1moL／L）：配制和标定按照GB/T601或购商品化标准物质。
1.12氢氧化钠溶液（NaOH）（40g/L）：称取4g氢氧化钠，加水溶解并定容至100mL。
1.13甲醛标准储备液（CH2O）原理：以三聚氰胺为原料制作的成型品经4%乙酸浸泡，浸泡液中三聚氰胺用高效液相色谱分离、测定，以保留时间定性、峰高或峰面积定量。
1.14 奶粉1.1 主要材料与试剂1.1.1盐酸（HCl）。
1.1.2盐酸苯肼（C6H8N2•HCl）。
乳制品中三聚氰胺的含量的测定(高效液相色谱法)实验报告
2009级化学教育仪器化学综合性与设计性实验指导老师：曹** 2011年 5月 30号一、实验目的1．通过分析化学综合性实验、设计性实验，培养学生初步的解决分析化学实际问题的能力，培养学生的创新意识与创新能力。
2．学习查阅参考文献、综合参考资料、设计小型分析化学实验。
3．复习和巩固有关理论基础知识并用于指导实践。
4．进一步熟练掌握实验操作技术。
①实验题目：乳制品中三聚氰胺的含量的测定（高效液相色谱法）②摘要、关键词：[摘要]为建立乳制品中三聚氰胺含量的高效液相色谱测定方法, 通过超声提取, 离子交换萃取小柱净化, 结合高效液相色谱进行样品测定。
色谱条件: A液：0.9508 g 辛烷磺酸钠（5 mmol/L）+ 1.0640 g柠檬酸（pH=3-4）用高纯水品配制1L溶液；B液：甲醇；色谱条件：30%B+70%A。
色谱柱：CNWSIL C18液相色谱柱（4.6×250mm，5 µm），检测波长：239 nm结果表明: 三聚氰胺标准曲线为y = 4495951x +18978.83, 相关系数R = 0.9999693, 在0.17～110.0 mg/L范围内线性关系良好, 方法检出限为0.12 mg/L, 两个样品三个水平的加标回收率分别为96.34 % (RSD = 4.76)、84.86 % (RSD = 7.21) 、104.29 % (RSD = 7.63) 和95.31 %(RSD = 4.39) 、89.25 % (RSD = 3.88) 、92.59 % (RSD = 5.27)。
[关键词]高效液相色谱; 三聚氰胺; 乳制品③引言一、目前有关三聚氰胺在乳制品中的概述：三聚氰胺(melamine) ）（化学式：C3H6N6），俗称密胺、蛋白精，IUPAC命名为“1,3,5-三嗪-2,4,6-三氨基”，是一种重要的氮杂环有机化工原料, 通常用于塑料制品中合成树脂的生产[ 1 ] 。
液态奶和奶粉中三聚氰胺的测定
液态奶和奶粉中三聚氰胺的测定依据 GB /T 22388-20081. 前处理预处理：液态奶：取原料乳5g，于50ml 离心管中，分别加入500ul，10ppm 的标准液（保证每kg 原料乳中各含1mg 标样）、15ml 0.1%三氯乙酸溶液和5ml 乙腈，涡旋1min，超声20min，4500r/min 离心15min。
取出上清液，用0.1%三氯乙酸定容至25ml 容量瓶中。
振荡均匀，从中取5ml，再加入5ml 水作为上样液。
奶粉：取奶粉5g，于50ml 离心管中，分别加入500ul，10ppm 的标准液（保证每kg 奶粉中各含1mg 标样），15ml 0.1%三氯乙酸溶液和5ml 乙腈，涡旋1min，超声1h，放置冰箱中2h，4500r/min 离心15min。
取出上清液，用0.1%三氯乙酸定容至25ml 容量瓶中。
振荡均匀，从中取5ml，再加入5ml 水作为上样液。
Ps：由于奶粉不含水份，相对与液态奶，脂类与其他添加成分可能更多，因此增加超声时间及冷却步骤，以保证蛋白沉降完全。
净化：固相萃取小柱：InertSep MPC 3ml/60mg 货号5010-27121 或WondaSep MPC 3ml/60mg 货号5010-MPC活化：3ml 甲醇和5ml 水上样：前处理后，备用的上样液淋洗：3ml 水、3ml 甲醇洗脱：6ml 5%氨水-甲醇浓缩复溶：40 度氮气吹干，加入1ml 3Mmol/L 醋酸铵溶液：乙腈=20：80 的流动相，滤膜过滤后，HPLC 分析。
2. 色谱分析色谱柱：Inertsil HILIC 5um 4.6*250mm流动相：A—2 mmol/L 醋酸铵溶液 B—乙腈梯度表如下：表1 梯度表时间2Mmol/L 醋酸铵溶液乙腈（%）0 20 8010 20 8010.01 50 50。
HPLC测定奶粉中三聚氰胺
HPLC测定奶粉中三聚氰胺1 原理三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，微溶于水，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等。
本方法采用20%甲醇溶解样品，5%三氯乙酸沉淀蛋白，提取样品中的三聚氰胺，经液相色谱仪C18柱分离，检测波长235nm条件下进行检测。
2 试剂使用优级纯、色谱纯试剂，色谱用水符合GB/T6682一级水的规定。
2.1 20%甲醇溶液：甲醇+水(2+8)2.2 5%三氯乙酸溶液：称取三氯乙酸5g溶解于100mL水中。
2.3 乙腈2.4 混合液：称取2.10g一水合柠檬酸和1.88 g己烷磺酸钠，溶于水中，稀释至1000mL 混匀。
2.5 流动相：混合液（2.4）+乙腈（2.3）=92+8。
2.6 标准储备液配制：准确称取三聚氰胺标准品0.1000g，用20%甲醇溶液（2.1）定容至100mL。
三聚氰胺含量为1.00mg/ mL，于4℃冰箱内避光保存。
2.7三聚氰胺标准系列的配制：准确吸取标准储备液(2.6)0.100mL；1.00mL；2.50mL；5.00mL；10.00mL至100mL容量瓶中，并用20%甲醇溶液（2.1）定容至刻度。
配制成三聚氰胺浓度分别为1.00mg/L；10.0mg/L；25.0mg/L；50.0mg/L；100mg/L的标准系列。
3仪器和设备3.1 液相色谱仪：附二级管阵列检测器（DAD）或紫外检测器（UV）3.2 超声波清洗器3.3 超速离心机3.4 涡旋混合器3.5 滤膜：0.45μm4.1 试样处理：将奶粉样品混匀，准确称取样品1～5g于50mL比色管中，加入20%甲醇溶液（2.1）约35mL，震荡混匀，超声提取5min，加入5%三氯乙酸(2.2)5mL，并用20%甲醇溶液(2.1)定容至刻度，摇匀。
以3000rpm/min超速离心5min。
取上清液经0.45μm滤膜过滤，备用。
4.2 色谱参考条件4.2.1 流动相：10mmol/L己烷磺酸钠+10mmol/L柠檬酸∶乙腈=92∶8；4.2.2 流速:1.0ml/min；4.2.3 柱温：35℃；4.2.4 检测器：二极管阵列检测器（DAD）或紫外检测器（UV），波长235nm；4.2.5 色谱柱：C18柱子250mm ×4.6 mm，5μm；4.2.6 进样量：10～20μL4.3 色谱分析：进样10～20μL标准使用液及样品处理液于高效液相色谱仪中，以保留时间及光谱定性，以样品峰面积与标准系列比较定量。
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矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。