微生物实验室质量管理
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微生物实验室质量管理
洁净区的日常监控
沉降菌：通过自然沉降原理收集在空气中 的生物粒子于培养基平皿，经若干时间， 在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进 行计数，以平板培养基皿中的菌落数判定 洁净环境内活微生物数，并以此来评定洁 净区的洁净度。
微生物实验室质量管理
洁净区的日常监控
浮游菌：采用计数浓度法，通过收集悬浮 在空气中的生物粒子于专门的培养基，经 若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可 见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内 单位体积空气中的活微生物数，以此来评 定洁净室的洁净度。
定结果是否正常
微生物实验室质量管理
洁净区的确认
性能确认： 检查洁净室在静态下的环境质量是否符合
要求（悬浮粒子、沉降菌、浮游菌） 用擦拭法或接触法监测室内表面微生物 监测洁净室温度、湿度和压差
微生物实验室质Hale Waihona Puke Baidu管理
洁净区的日常监控
悬浮粒子：指悬浮在空气中的尺寸在 0.001um至1000 um之间的固体、液体或两者 的混合物，包括生物性粒子和非生物性粒 子。
1，000
15
000
微生物实验室质量管理
欧洲GMP
洁净级别 尘粒最大允许数/立方米 微生物最大允许数
≥0.5um ≥5um
CFU/ m3
CFU/4h
A
3，500
0
〈1
〈1
B
3，500
0
10
5
C
350，000 2，000
100
50
D
3500，000 20，000 200
100
微生物实验室质量管理
取样点、取样量
微生物实验室质量管理
洁净区的日常监控
表面微生物： 棉签擦拭法
用湿润的棉签擦拭一定面积的表面，将棉签浸于生理盐水 中，超声波洗涤一定时间后，吸取一定体积的洗涤液于内 置琼脂培养基的平皿中，在30～35℃培养48小时，观察菌 落数，计算一定面积的表面微生物数。 表面皿直接接触法 注有培养基的培养皿，当培养皿内的培养基直接接触被测 表面一定时间后，表面微生物吸附在培养基上，在一定的 温度下培养一定时间后计数即得。
最外层包布，将无菌服袋挂于二更室备用。 无菌服超过24小时不用，应重新消毒。
微生物实验室质量管理
洁净区的更衣
进入无菌室时无菌衣的穿戴程序 用肥皂洗手，脱鞋，进更衣前室脱掉普通工作服
挂在衣钩上。 手在消毒液中浸泡15秒，进入二更室，解开包无
菌衣的袋口脱去里层包衣布，拿出无菌衣服。 先穿上衣后戴上无菌口罩再穿上连鞋裤子，并将
洁净区空气悬浮粒子、浮游菌及沉降菌的最少取样点数
面积m2
〈10 ≥10～〈20 ≥20～〈40 ≥40～〈100 ≥100～〈200 ≥200～〈400 ≥400～〈1000
100 2～3
4 8 16 40 80 160
洁净级别 10，000
2 2 2 4 10 20 40
100，000 2 2 2 2 3 6 13
微生物实验室质量管理
取样点的位置
悬浮粒子、沉降菌、浮游菌的取样点的位置
离地面0.8-1.5m左右。 送风口测点位置离开送风面30cm左右。 可在关键设备或关键工作活动范围处增加
测点
微生物实验室质量管理
取样点的位置
表面微生物取样点的位置 洁净室在其墙面(4面)各取一点，共4个样品。 地面根据测定现场选取4点，共4个样品。 如果该室有设备，则在设备表面取2点，共2
上衣下摆扎入裤子内，同时检查无菌衣的帽子是 否将头发等包实，是否穿戴整齐，同时检查无菌 衣质量，如遇破损或未清洁干净，则需更换无菌 衣，然后经缓冲室进入无菌操作室。
微生物实验室质量管理
微生物实验室质量管理
洁净区的更衣
离开无菌室脱衣程序同无菌衣的穿戴程序 相反。如果洁净服已弄脏，应经清洗干燥 后，否则叠好衣服按上述包扎后放于待灭 菌处。
个样品。 人员卫生监测：手套、工作服易遭污染的
部位、硅套，有时包括头罩和口罩。 取样面积每点控制在24－30cm2。
微生物实验室质量管理
洁净区的更衣
洁净服的消毒 用双层丝绸布包待消毒无菌衣后，塞进用真丝布
做的袋中，用带抽紧袋口扎牢。 在袋外再包扎一层丝绸布后，放入消毒柜内。 用高压蒸汽121℃消毒30分钟。 将消毒后的无菌衣包取出，放到更衣室内，去掉
微生物实验室质量管理
中国GMP洁净度标准
洁净级别 100级
尘粒最大允许数/立方米
≥0.5um 3，500
≥5um 0
微生物最大允许数
浮游菌/立方 米
沉降菌/皿
5
1
10，000级 350，000 2，000
100
3
100，000级 3500，000 20，000
500
10
300，000级 10，500， 60，000
微生物实验室质量管理
洁净区的管理
无菌室内除实验必需用品外，不得堆放杂 物。凡进入洁净区的物品必须对外部表面 用消毒剂消毒灭菌。再经传递窗送入无菌 室。无菌室内的固定物品不得任意搬出。
每次实验前应开启净化系统使运转至少1小 时以上，紫外灯开启30分钟后。并按洁净区 紫外灯现行使用管理规程[QCP0001074]做好 记录。
微生物检验设施及设备
保证实验无菌环境的设施：洁净室、无菌 隔离系统、净化工作台
保证实验用品无菌的设备：高压蒸汽灭菌 器、电热恒温干燥箱
适合微生物生长和保存的温控设备：培养 箱、冰箱
实验操作用仪器：全封闭薄膜过滤器、电 动磁力搅拌器、恒温水浴箱、离心机、显 微镜及玻璃仪器
微生物实验室质量管理
洁净室及隔离系统
手消毒用的消毒剂应每月轮换使用，以防 产生耐药菌珠。
微生物实验室质量管理
洁净区的管理
无菌室应按微生物测定室洁净区环境监测 现行规程要求定期进行尘埃粒子、浮游菌、 沉降菌和表面微生物检测，做好原始记录。 每次实验时对无菌室进行温湿度和压差的 记录，室内温度控制18～26℃，相对湿度 45%～65%，空气洁净级别不同的相邻房间 的静压差应大于5Pa，洁净室与室外大气的 静压差应大于10Pa，记录作为实验环境原始 依据及趋势分析资料
洁净室：是指对尘埃粒子及微生物污染规 定需进行环境控制的房间或区域，其建筑 结构、装备及使用均具有减少对该区域内 污染源的介入、产生和滞留的功能。
隔离系统：一套能够创造并维持一个符合 药典试验要求的无菌环境的装置。
微生物实验室质量管理
洁净区的确认
运行确认：
洁净室内设有紫外灯 洁净区的建材、构造等是否符合GMP要求 高效过滤器的完好性 是否保持相对正压或负压 检查人流、物流的气流的方向及压差的测
洁净区的日常监控
沉降菌：通过自然沉降原理收集在空气中 的生物粒子于培养基平皿，经若干时间， 在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进 行计数，以平板培养基皿中的菌落数判定 洁净环境内活微生物数，并以此来评定洁 净区的洁净度。
微生物实验室质量管理
洁净区的日常监控
浮游菌：采用计数浓度法，通过收集悬浮 在空气中的生物粒子于专门的培养基，经 若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可 见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内 单位体积空气中的活微生物数，以此来评 定洁净室的洁净度。
定结果是否正常
微生物实验室质量管理
洁净区的确认
性能确认： 检查洁净室在静态下的环境质量是否符合
要求（悬浮粒子、沉降菌、浮游菌） 用擦拭法或接触法监测室内表面微生物 监测洁净室温度、湿度和压差
微生物实验室质Hale Waihona Puke Baidu管理
洁净区的日常监控
悬浮粒子：指悬浮在空气中的尺寸在 0.001um至1000 um之间的固体、液体或两者 的混合物，包括生物性粒子和非生物性粒 子。
1，000
15
000
微生物实验室质量管理
欧洲GMP
洁净级别 尘粒最大允许数/立方米 微生物最大允许数
≥0.5um ≥5um
CFU/ m3
CFU/4h
A
3，500
0
〈1
〈1
B
3，500
0
10
5
C
350，000 2，000
100
50
D
3500，000 20，000 200
100
微生物实验室质量管理
取样点、取样量
微生物实验室质量管理
洁净区的日常监控
表面微生物： 棉签擦拭法
用湿润的棉签擦拭一定面积的表面，将棉签浸于生理盐水 中，超声波洗涤一定时间后，吸取一定体积的洗涤液于内 置琼脂培养基的平皿中，在30～35℃培养48小时，观察菌 落数，计算一定面积的表面微生物数。 表面皿直接接触法 注有培养基的培养皿，当培养皿内的培养基直接接触被测 表面一定时间后，表面微生物吸附在培养基上，在一定的 温度下培养一定时间后计数即得。
最外层包布，将无菌服袋挂于二更室备用。 无菌服超过24小时不用，应重新消毒。
微生物实验室质量管理
洁净区的更衣
进入无菌室时无菌衣的穿戴程序 用肥皂洗手，脱鞋，进更衣前室脱掉普通工作服
挂在衣钩上。 手在消毒液中浸泡15秒，进入二更室，解开包无
菌衣的袋口脱去里层包衣布，拿出无菌衣服。 先穿上衣后戴上无菌口罩再穿上连鞋裤子，并将
洁净区空气悬浮粒子、浮游菌及沉降菌的最少取样点数
面积m2
〈10 ≥10～〈20 ≥20～〈40 ≥40～〈100 ≥100～〈200 ≥200～〈400 ≥400～〈1000
100 2～3
4 8 16 40 80 160
洁净级别 10，000
2 2 2 4 10 20 40
100，000 2 2 2 2 3 6 13
微生物实验室质量管理
取样点的位置
悬浮粒子、沉降菌、浮游菌的取样点的位置
离地面0.8-1.5m左右。 送风口测点位置离开送风面30cm左右。 可在关键设备或关键工作活动范围处增加
测点
微生物实验室质量管理
取样点的位置
表面微生物取样点的位置 洁净室在其墙面(4面)各取一点，共4个样品。 地面根据测定现场选取4点，共4个样品。 如果该室有设备，则在设备表面取2点，共2
上衣下摆扎入裤子内，同时检查无菌衣的帽子是 否将头发等包实，是否穿戴整齐，同时检查无菌 衣质量，如遇破损或未清洁干净，则需更换无菌 衣，然后经缓冲室进入无菌操作室。
微生物实验室质量管理
微生物实验室质量管理
洁净区的更衣
离开无菌室脱衣程序同无菌衣的穿戴程序 相反。如果洁净服已弄脏，应经清洗干燥 后，否则叠好衣服按上述包扎后放于待灭 菌处。
个样品。 人员卫生监测：手套、工作服易遭污染的
部位、硅套，有时包括头罩和口罩。 取样面积每点控制在24－30cm2。
微生物实验室质量管理
洁净区的更衣
洁净服的消毒 用双层丝绸布包待消毒无菌衣后，塞进用真丝布
做的袋中，用带抽紧袋口扎牢。 在袋外再包扎一层丝绸布后，放入消毒柜内。 用高压蒸汽121℃消毒30分钟。 将消毒后的无菌衣包取出，放到更衣室内，去掉
微生物实验室质量管理
中国GMP洁净度标准
洁净级别 100级
尘粒最大允许数/立方米
≥0.5um 3，500
≥5um 0
微生物最大允许数
浮游菌/立方 米
沉降菌/皿
5
1
10，000级 350，000 2，000
100
3
100，000级 3500，000 20，000
500
10
300，000级 10，500， 60，000
微生物实验室质量管理
洁净区的管理
无菌室内除实验必需用品外，不得堆放杂 物。凡进入洁净区的物品必须对外部表面 用消毒剂消毒灭菌。再经传递窗送入无菌 室。无菌室内的固定物品不得任意搬出。
每次实验前应开启净化系统使运转至少1小 时以上，紫外灯开启30分钟后。并按洁净区 紫外灯现行使用管理规程[QCP0001074]做好 记录。
微生物检验设施及设备
保证实验无菌环境的设施：洁净室、无菌 隔离系统、净化工作台
保证实验用品无菌的设备：高压蒸汽灭菌 器、电热恒温干燥箱
适合微生物生长和保存的温控设备：培养 箱、冰箱
实验操作用仪器：全封闭薄膜过滤器、电 动磁力搅拌器、恒温水浴箱、离心机、显 微镜及玻璃仪器
微生物实验室质量管理
洁净室及隔离系统
手消毒用的消毒剂应每月轮换使用，以防 产生耐药菌珠。
微生物实验室质量管理
洁净区的管理
无菌室应按微生物测定室洁净区环境监测 现行规程要求定期进行尘埃粒子、浮游菌、 沉降菌和表面微生物检测，做好原始记录。 每次实验时对无菌室进行温湿度和压差的 记录，室内温度控制18～26℃，相对湿度 45%～65%，空气洁净级别不同的相邻房间 的静压差应大于5Pa，洁净室与室外大气的 静压差应大于10Pa，记录作为实验环境原始 依据及趋势分析资料
洁净室：是指对尘埃粒子及微生物污染规 定需进行环境控制的房间或区域，其建筑 结构、装备及使用均具有减少对该区域内 污染源的介入、产生和滞留的功能。
隔离系统：一套能够创造并维持一个符合 药典试验要求的无菌环境的装置。
微生物实验室质量管理
洁净区的确认
运行确认：
洁净室内设有紫外灯 洁净区的建材、构造等是否符合GMP要求 高效过滤器的完好性 是否保持相对正压或负压 检查人流、物流的气流的方向及压差的测