反相高效液相色谱法同时测定马铃薯块茎中

将 1.2.2 节配制好的混合标准品溶液逐级稀释，每 个质量浓度进样 20μL，按 1.2.1 节的色谱条件测定，以 峰面积 Y 为纵坐标、进样质量浓度 X 为横坐标绘制标准 曲线。结果显示，各个标准品在各自的质量浓度范围 内均呈现出良好的线性关系，相关系数除绿原酸外均大 于 0.999。绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和对香豆酸在相同 的色谱条件下保留时间不同，相互分离良好，结果见 表1。 2.3 精密度实验
and detection limits of the developed method for phenolic acids
酚酸
回归方程
相关系数 r
绿原酸 Y ＝ 46149.33X ＋ 626.09 0.9968
咖啡酸 Y ＝ 295964.073X － 229.74 0.9993
对香豆酸 Y ＝ 198668.12X － 18.86 0.9999
阿魏酸 Y ＝ 1636225.25X － 94.13 0.9998
线性范围 /μ( g/mL) 7.80～1000 0.78～100 0.312～40 0.078～10
检出限/(ng/mL) 31.25 0.78 5.00 0.31
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食品科学
※分析检测
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时间 /min
图 1 混合酚酸类标准溶液的分离色谱图 Fig.1 Chromatogram of mixed phenolic acid standards
2.2 标准工作曲线的建立
表 1 本法检测的回归方程、相关性系数、线性范围及检出限 Table 1 Regression equations, correlation coefficients, linear ranges
(1. State Key Laboratory of Food Science and Technology, College of Life Science and Food Engineering, Nanchang University, Nanchang 330031, China；2. Institute of Subtropical Agriculture, Chinese Academy of Sciences, Changsha 410125, China)
Key words：potato；tuber；phenolic compounds；reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC)
中图分类号：TS210.1；O657.7
文献标识码：A
文章编号：1002-6630(2011)18-0300-04
摘 要：目的：运用反相高效液相色谱法同时测定马铃薯中的绿原酸、咖啡酸、对香豆酸和阿魏酸。方法：色
谱柱为 YMC-C18(250mm × 4.6mm，5μm)，流动相为甲醇 - 水 - 冰醋酸(30:70:1，V/V)等度洗脱，柱温 25℃，检测 波长 327nm。结果：绿原酸、咖啡酸、对香豆酸和阿魏酸在进样质量wk.baidu.com度分别为 7 . 8 0 ～1 0 0 0 、0 . 7 8 ～1 0 0 、 0.312～40、0.078～10μg/mL 范围内线性关系良好(r 值范围 0.9968～0.9999)，平均回收率为 92.38%～101.73%。结 论：本法分析快速准确、灵敏度高、重现性好，江西、北京和新疆 3 个地域的环境条件对马铃薯的酚酸含量有 一定的影响。
1.2.3 样品溶液的制备 取每个地区的马铃薯洗净，切成 1cm 薄片，放入
自封袋中真空冷冻干燥，冻干样品用粉碎机粉碎过 65 目 筛，干粉置于自封袋中，在干燥器中避光保存。
精确称取样品冻干粉 5.00g 于 50mL 具塞三角瓶中， 精确加入 25mL 体积分数 70% 的甲醇溶液，室温超声波 振荡提取 40min，4500r/min 离心 15min，将上清液旋转 浓缩，用流动相定容至 5mL，在－ 4℃冰箱中保存备 用。测定时经 0.45μm 微孔滤膜过滤，外标法进行 HPLC 分析。
关键词：马铃薯；块茎；酚酸类物质；反相高效液相色谱法
Simultaneous Determination of Phenolic Acids in Potato Tuber by RP-HPLC
LUO Cheng-yao1，YIN Yu-long1,2，RUAN Zheng1,*，OUYANG Chong-xue1， WEN Hong-yan1，ZHOU Xiao-li1，PENG Zhang-zhi1
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食品科学
※分析检测
反相高效液相色谱法同时测定马铃薯块茎中
酚酸类物质
骆成尧 1，印遇龙 1,2，阮 征 1,*，欧阳崇学 1，文红艳 1，周笑犁 1，彭彰智 1
(1.食品科学与技术国家重点实验室，南昌大学生命科学与食品工程学院，江西 南昌 330031； 2.中国科学院亚热带农业生态研究所，湖南 长沙 410125)
0.6%～0.8%，多酚 0.1%～0.3%[2-4]。马铃薯多酚是果实 在生长发育期间的次生代谢产物，是一种优良的食品抗 氧化剂和保鲜剂，同时马铃薯多酚还具有多种生理活 性[5-8]，如抗氧化、延缓哀老、降血压、防龋齿、防 辐射、抗过敏等，具有很好的开发前景。
马铃薯块茎中含有丰富的酚酸类化合物，包括绿原
1.2.1 色谱条件 色谱柱：YMC-C18 柱(250mm × 4.6mm，5μm)；流
动相：甲醇 - 水 - 冰醋酸(30:70:1，V/V)；柱温 25℃； 检测波长 327nm。根据保留时间及特征吸收色谱与标准 品对照定性，用外标法定量。
1.2.2 混合标准品溶液的配制 分别精密称取干燥至质量恒定的绿原酸 5.00mg、咖
本实验针对马铃薯中的多酚物质，拟确定反向液相 色谱流动相，建立测定马铃薯块茎中的 4 种酚酸类物质 的反相高效液相色谱(reversed-phase HPLC，RP-HPLC) 检测方法。同时选择江西、北京和新疆 3 个不同地区， 研究不同地域对马铃薯中酚酸含量的影响，为马铃薯多 酚的进一步研究与开发提供依据。
The developed RP-HPLC method is characteristic of fast determination, accurate results, high sensitivity and good reproducibility.
In addition, different growth environments of potato tuber have an important impact on the contents of phenolic acids.
1 材料与方法
1.1 材 料 、 试 剂 与 仪 器 马铃薯分别产于北京、新疆、江西。 绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、对香豆酸标准品( 纯
度≥ 98%) 贵州迪大科技有限公司；甲醇(色谱纯)；水 为超纯水；冰乙酸、甲醇( 提取液) 均为分析纯。
1200 高效液相色谱仪(配有紫外检测器) 美国安捷 伦公司；旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂；S H Z - D (Ⅲ)循环水式多用真空泵 巩义市予华仪器有限责任公 司；真空冷冻干燥系统 北京亚泰隆科技仪器有限公 司；SC-3614 低速离心机 科大创新股份有限公司中佳 分公司；SK3300HP 超声清洗器 上海科导超声仪器有 限公司；SB-2 速邦多功能粉碎机 上海市蒲恒信息科技 有限公司；AL104 分析天平 梅特勒 - 托利多仪器(上海) 有限公司。 1.2 方法
2 结果与分析
2.1 标准品的测定 精确移取 1.2.2 节配制好的混合标准品溶液，稀释
至一定质量浓度后进样 20μL，在 1.2.1 节色谱条件下分 析，绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、阿魏酸均能良好 分离(图 1)。
mAU
140 120 100 80 60 40 20
0
0
绿原酸
咖啡酸
对香豆酸阿魏酸
5
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在过去的十几年，人口的日益增加极大影响了粮食 产品的需求。马铃薯(Solanum tuberosum L.)是世界上仅 次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物，营养养成 分较为全面，几乎具备人体需要的各种营养素，是人 们公认的“植物之王”[ 1 ] 。马铃薯中含有淀粉 1 7 % ～ 20%，蛋白质 1.5%～2.3%，脂肪 0.1%～1.1%，纤维素
※分析检测
食品科学
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酸、原儿茶酸、咖啡酸、香草酸、芥子酸、没食子 酸、丁香酸、对香豆酸、阿魏酸、水杨酸、桂皮酸 等多种成分[9-11]。目前，分析马铃薯酚类的方法主要有 薄层层析法(thin layer chromatography，TLC)、紫外 可见分光光度法(ultraviolet-visible spectrometry，UVVis)、高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)等几种方法[12-15]。薄层色谱虽 然分析成本低，对仪器要求不高，但是样品前处理比 较繁琐，且分析时间长，重复性和灵敏度一般，一般 用于初步分析。紫外 - 可见分光光度法只能测定总酚含 量，不能测定其中单体酚酸的含量。而高效液相色谱 法不仅能测总酚含量还能测定其中单体酚酸含量，且方 法准确、可靠、重现型好[16-20]。目前国内外对马铃薯 多酚的研究主要是其抗氧化及总酚含量的测定，虽然有 人用 HPLC 法同时分离检测出马铃薯中的几种单体酚酸， 但是针对绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、对香豆酸的分析 还未见报道。
啡酸 0.50mg、对香豆酸 0.05mg 和阿魏酸 0.20mg，置于 5mL 容量瓶中，加 30% 的甲醇溶液定容至刻度，摇匀， 配制成质量浓度分别为 1.00、0.10、0.01mg/mL 和 0.04mg/mL 的混合标准品溶液，封口，置于－ 4℃冰箱中避光保存 备用。使用前，根据需要将此混合标准品贮备液用流 动相逐级稀释。
Abstract：Objective: A reversed-phase high performance liquid chromatographic (RP-HPLC) method was developed to
determine the contents of chlorogenic acid, caffeic acid, p-coumaric acid and ferulic acid in potato tuber from Jiangxi, Beijing and Xinjiang. Methods: The contents of phenolic compounds were measured by RP-HPLC using YMC-C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5μm) as the sationary phase and CH3OH: H2O: CH3COOH (30:70:1, V/V) as the mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/ min. Results: A good linear relationship of this method was achieved in the ranges of 7.80－1000μg/mL for chlorogenic acid, 0.78 － 100 μg/mL for caffeic acid, 0.312 － 40 μg/mL for p-coumaric acid and 0.078 － 10 μg/mL for ferulic acid with a correlation coefficient of 0.9968 － 0.9999. The average recovery rates of this method were 92.38% － 101.73%. Conclusion:
收稿日期：2010-11-28 基金项目：南昌大学“赣江学者奖励计划”项目 作者简介：骆成尧(1985 —)，女，硕士研究生，研究方向为营养与食品卫生学。E-mail：luochengyao115@126.com * 通信作者：阮征(1978 —)，男，副教授，博士，研究方向为碳水化合物及其营养调控。E-mail：ezruan@yahoo.com