肺炎链球菌的分离和鉴定
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（1）试管法:
取新鲜培养物分装于两支试管内（每支 1ml），其中一支加入10%的去氧胆酸钠溶液 0.1ml或纯牛胆汁0.2ml，另一支加入无菌盐水 两滴（对照），15min后，阳性者细菌被溶解， 试管内液体呈透明状，阴性者无变化。
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（2）平皿法:
加一滴10%的去氧胆酸钠溶液或纯牛胆汁 于被检菌菌苔上，15min后，阳性者细菌菌苔 被溶解，阴性者无变化。试验应有已知肺炎链 球菌作阳性对照。
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3.抗原结构
（1）种属特异性抗原：为菌体多糖抗原，存在 于肺炎链球菌的细胞壁。
（2）型特异性抗原：是存在于肺炎链球菌荚膜 中的一种多糖多聚体，可溶于水，据此抗原可 将肺炎链球菌分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……等个型，其 中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型致病性最强。
（3）菌体核蛋白抗原：存在于菌体深部，为蛋 白质，无特异性。
3.以optochin 试验和胆汁溶菌试验将肺炎链球菌 与其他－溶血链球菌相区别；
4. 血清学鉴定特异性高； 5. 要注意对PRP和MDR的检测。
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谢谢！！！
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4.乳胶凝集试验
结果准确、快速、特异性高。
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5. 荚膜肿胀试验
取一滴抗血清与一滴菌悬液混匀，加少
量美蓝液混合后加盖片，室温10~20min后，用
油镜检查，如查到菌体呈兰色，周围绕有界限
明显未染色的膨大空白圈为阳性。可用于肺炎
链球菌的分型。
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2. 培养特点
（1） 培养基
肺炎链球菌对营养要求较高，需采 用质量好的哥伦比亚血液平板（ 5％ 马血或羊血） 。
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（2）分离培养
1）标本处理
及时将采集标本接种到适当的培养基 上是提高分离率的前提。因为，肺炎链球菌 对干燥、对寒冷的抵抗力均较弱，在标本离 开机体暴露于外界复杂的环境中，其存活率 十分低，不及时接种适当培养基是导致分离 率低的主要原因。
敏 感 溶菌 七叶苷 肉汤 酮 酶
————————————————————————————————————
肺炎链球菌
+ +— —
—
—
——
牛链球菌
— —+
—
—
—
—D
无乳链球菌
— ——
d
—
—
+
B
草绿色链球菌 — — — —
—
—
——
营养变异链球菌 — — — —
+
+
——
———————————————————————————————————— *d.不同菌株
肺炎链球菌的分离和鉴定
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概述
肺炎链球菌（S.pneumoniae），俗称 肺炎球菌（pneumococcus）。经常寄居于 正常人的鼻咽腔中，一般不致病，只形成 带菌状态。当机体免疫力下降时才致病。 尤其在呼吸道病毒感染后或婴幼儿、老年 体弱者易发生肺炎链球菌性肺部感染。
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肺炎链球菌不产生外毒素，主要靠 荚膜侵袭力致病。肺炎链球菌主要引起 人类大叶性肺炎，肺炎后可继发胸膜炎、 脓胸，也可引起中耳炎、乳突炎、副鼻 窦炎、支气管炎、心内膜炎、腹膜炎、 关节炎、脑膜炎和败血症等。
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3. 胆汁溶菌试验
自溶酶是一种L-丙氨酸--N-乙酰胞壁酰胺 酶，能切断肽聚糖上L-丙氨酸与N-乙酰胞壁酸 间的连接键，从而破坏细胞壁，使菌溶解。
自溶酶在菌生长的稳定期被激活，也可被 胆汁或胆盐等活性物质激活，从而促进培养物 中的菌体溶解。肺炎链球菌胆汁溶菌试验为阳 性，甲型溶血性链球菌的胆汁溶菌试验为阴性。
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6. 凝集试验
包括血清凝集试验、SPA（葡萄球菌蛋白
A）协同凝集试验、反向乳胶凝集试验等方法。
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表1 非β溶血链球菌的鉴别
————————————————————————————————————
菌种
Optochin 胆汁 胆 汁 6.5%NaCl 吡咯烷 卫星现象 CAMP 血清群
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细菌学检验不仅对疾病的病原学诊断有 重要价值，同时对临床治疗的药物选择 也具有十分重要意义。
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一、生物学性状
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1. 形态与染色
肺炎链球菌革兰染色呈阳性。球形或矛 头状，成双排列，少呈链状。在组织中 可形成荚膜（人工培养荚膜逐渐消失）， 无鞭毛及芽孢。
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三、肺炎链球菌的药敏试验
K-B法：采用Mueller-Hinton琼脂＋5％羊血 培养基。直接菌落悬液法(0.5麦氏单位菌液， 在15分钟内接种完)作为接种液。
稀释法：包括琼脂稀释法、肉汤稀释法和 Etest法。
培养条件：为35℃ 、5％CO2培养20～24小 时。质控菌株ATCC 49619。
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肺炎链球菌鉴定要点
革 兰 阳 性 双 球 菌， 矛 头 状， 不 呈 链 ；
血 平 皿 菌 落 呈 草 绿 溶 血， 湿 润， 菌 落 表 面 无 小 白 点；
培 养 时 间 长 出 现 脐 窝 状； 胆汁溶解试验阳性； 荚膜肿胀试验阳性； 乳 胶 单 克 隆 抗 体 凝 集 阳 性。
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二、肺炎链球菌鉴定
肺炎链球菌的鉴定，主要应与甲型溶血 性链球菌鉴别。其中以胆汁溶菌试验、 菊糖发酵和optochin试验最为常用。必要 时可作 荚 膜肿 胀 试 验 或 小鼠毒力试验加 以鉴别。在上述试验中，肺炎链球菌均 应阳性，而甲型溶血性链球菌为阴性。 也 可用特异性单克隆乳胶或自动化仪器 等相应鉴定卡作鉴定。
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1. 溶血性检查
肺炎链球菌在厌氧或二氧化碳环境中溶血能力 大大加强，草绿色溶血环很大，可与其他草绿 色链球菌相区别。
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2. Optochin(OP ， 奥 普 托 欣 )敏感试 验
该药对肺炎链球菌的作用机制是干 扰其叶酸的合成。
optochin敏感试验方法是药敏试验。 挑取被检菌，密涂于血平板上，贴上含 5气μ中g（/片或的烛op缸to）chi，n纸35片℃，孵置育5过~1夜0%。C抑O菌2的环大 直径>=14mm为敏感，推断为肺炎链球菌 。抑菌环直径<14mm时参照胆汁溶菌试验 。肺炎链球菌的抑制圈直径常在20mm以上 ，甲型溶血性链球菌（约98%）小于12mm 。
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也有例外，我们在实际工作中检出过耐optochin 的肺炎链球菌，并发现大多数的缓症链球菌和部 分口腔链球菌对optochin的抑菌环直径>=14mm。 应注意鉴别。
但大多数肺炎链球菌对苯唑西林（Oxacillin,OX） 是敏感的(除外PRP)，而缓症链球菌和口腔链球 菌对OX耐药。这可作为辅助鉴别点。
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2）选择性分离培养基
培养基中添加5μg/ml庆大霉素有利于肺炎链球 菌的分离。
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3） 培养环境 5～10％CO2、35℃培养24～48h。
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（3）肺炎链球菌的菌落形态 在营养丰富的培养基上，肺炎链球菌形
成扁平、中间有凹陷的典型菌落，少数 菌可呈粘液型菌落。
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4.肺炎链球菌感染的治疗
青霉素G敏感均可直接用青霉素G进行治疗; 青霉素G中度耐药株可用大剂量青霉素G进
行治疗； 如重度耐药可选用三代头孢菌素加万古霉
素或利福平进行治疗。
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总结
1. 肺炎链球菌寄居于人的上呼吸道中，是条件 致病菌；
2.肺炎链球菌对营养要求较高，在含有新鲜血液 的培养基中生长良好；
（1）试管法:
取新鲜培养物分装于两支试管内（每支 1ml），其中一支加入10%的去氧胆酸钠溶液 0.1ml或纯牛胆汁0.2ml，另一支加入无菌盐水 两滴（对照），15min后，阳性者细菌被溶解， 试管内液体呈透明状，阴性者无变化。
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（2）平皿法:
加一滴10%的去氧胆酸钠溶液或纯牛胆汁 于被检菌菌苔上，15min后，阳性者细菌菌苔 被溶解，阴性者无变化。试验应有已知肺炎链 球菌作阳性对照。
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3.抗原结构
（1）种属特异性抗原：为菌体多糖抗原，存在 于肺炎链球菌的细胞壁。
（2）型特异性抗原：是存在于肺炎链球菌荚膜 中的一种多糖多聚体，可溶于水，据此抗原可 将肺炎链球菌分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……等个型，其 中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型致病性最强。
（3）菌体核蛋白抗原：存在于菌体深部，为蛋 白质，无特异性。
3.以optochin 试验和胆汁溶菌试验将肺炎链球菌 与其他－溶血链球菌相区别；
4. 血清学鉴定特异性高； 5. 要注意对PRP和MDR的检测。
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4.乳胶凝集试验
结果准确、快速、特异性高。
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5. 荚膜肿胀试验
取一滴抗血清与一滴菌悬液混匀，加少
量美蓝液混合后加盖片，室温10~20min后，用
油镜检查，如查到菌体呈兰色，周围绕有界限
明显未染色的膨大空白圈为阳性。可用于肺炎
链球菌的分型。
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2. 培养特点
（1） 培养基
肺炎链球菌对营养要求较高，需采 用质量好的哥伦比亚血液平板（ 5％ 马血或羊血） 。
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（2）分离培养
1）标本处理
及时将采集标本接种到适当的培养基 上是提高分离率的前提。因为，肺炎链球菌 对干燥、对寒冷的抵抗力均较弱，在标本离 开机体暴露于外界复杂的环境中，其存活率 十分低，不及时接种适当培养基是导致分离 率低的主要原因。
敏 感 溶菌 七叶苷 肉汤 酮 酶
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概述
肺炎链球菌（S.pneumoniae），俗称 肺炎球菌（pneumococcus）。经常寄居于 正常人的鼻咽腔中，一般不致病，只形成 带菌状态。当机体免疫力下降时才致病。 尤其在呼吸道病毒感染后或婴幼儿、老年 体弱者易发生肺炎链球菌性肺部感染。
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肺炎链球菌不产生外毒素，主要靠 荚膜侵袭力致病。肺炎链球菌主要引起 人类大叶性肺炎，肺炎后可继发胸膜炎、 脓胸，也可引起中耳炎、乳突炎、副鼻 窦炎、支气管炎、心内膜炎、腹膜炎、 关节炎、脑膜炎和败血症等。
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3. 胆汁溶菌试验
自溶酶是一种L-丙氨酸--N-乙酰胞壁酰胺 酶，能切断肽聚糖上L-丙氨酸与N-乙酰胞壁酸 间的连接键，从而破坏细胞壁，使菌溶解。
自溶酶在菌生长的稳定期被激活，也可被 胆汁或胆盐等活性物质激活，从而促进培养物 中的菌体溶解。肺炎链球菌胆汁溶菌试验为阳 性，甲型溶血性链球菌的胆汁溶菌试验为阴性。
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6. 凝集试验
包括血清凝集试验、SPA（葡萄球菌蛋白
A）协同凝集试验、反向乳胶凝集试验等方法。
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表1 非β溶血链球菌的鉴别
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菌种
Optochin 胆汁 胆 汁 6.5%NaCl 吡咯烷 卫星现象 CAMP 血清群
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细菌学检验不仅对疾病的病原学诊断有 重要价值，同时对临床治疗的药物选择 也具有十分重要意义。
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一、生物学性状
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1. 形态与染色
肺炎链球菌革兰染色呈阳性。球形或矛 头状，成双排列，少呈链状。在组织中 可形成荚膜（人工培养荚膜逐渐消失）， 无鞭毛及芽孢。
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三、肺炎链球菌的药敏试验
K-B法：采用Mueller-Hinton琼脂＋5％羊血 培养基。直接菌落悬液法(0.5麦氏单位菌液， 在15分钟内接种完)作为接种液。
稀释法：包括琼脂稀释法、肉汤稀释法和 Etest法。
培养条件：为35℃ 、5％CO2培养20～24小 时。质控菌株ATCC 49619。
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肺炎链球菌鉴定要点
革 兰 阳 性 双 球 菌， 矛 头 状， 不 呈 链 ；
血 平 皿 菌 落 呈 草 绿 溶 血， 湿 润， 菌 落 表 面 无 小 白 点；
培 养 时 间 长 出 现 脐 窝 状； 胆汁溶解试验阳性； 荚膜肿胀试验阳性； 乳 胶 单 克 隆 抗 体 凝 集 阳 性。
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二、肺炎链球菌鉴定
肺炎链球菌的鉴定，主要应与甲型溶血 性链球菌鉴别。其中以胆汁溶菌试验、 菊糖发酵和optochin试验最为常用。必要 时可作 荚 膜肿 胀 试 验 或 小鼠毒力试验加 以鉴别。在上述试验中，肺炎链球菌均 应阳性，而甲型溶血性链球菌为阴性。 也 可用特异性单克隆乳胶或自动化仪器 等相应鉴定卡作鉴定。
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1. 溶血性检查
肺炎链球菌在厌氧或二氧化碳环境中溶血能力 大大加强，草绿色溶血环很大，可与其他草绿 色链球菌相区别。
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2. Optochin(OP ， 奥 普 托 欣 )敏感试 验
该药对肺炎链球菌的作用机制是干 扰其叶酸的合成。
optochin敏感试验方法是药敏试验。 挑取被检菌，密涂于血平板上，贴上含 5气μ中g（/片或的烛op缸to）chi，n纸35片℃，孵置育5过~1夜0%。C抑O菌2的环大 直径>=14mm为敏感，推断为肺炎链球菌 。抑菌环直径<14mm时参照胆汁溶菌试验 。肺炎链球菌的抑制圈直径常在20mm以上 ，甲型溶血性链球菌（约98%）小于12mm 。
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也有例外，我们在实际工作中检出过耐optochin 的肺炎链球菌，并发现大多数的缓症链球菌和部 分口腔链球菌对optochin的抑菌环直径>=14mm。 应注意鉴别。
但大多数肺炎链球菌对苯唑西林（Oxacillin,OX） 是敏感的(除外PRP)，而缓症链球菌和口腔链球 菌对OX耐药。这可作为辅助鉴别点。
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2）选择性分离培养基
培养基中添加5μg/ml庆大霉素有利于肺炎链球 菌的分离。
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3） 培养环境 5～10％CO2、35℃培养24～48h。
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（3）肺炎链球菌的菌落形态 在营养丰富的培养基上，肺炎链球菌形
成扁平、中间有凹陷的典型菌落，少数 菌可呈粘液型菌落。
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4.肺炎链球菌感染的治疗
青霉素G敏感均可直接用青霉素G进行治疗; 青霉素G中度耐药株可用大剂量青霉素G进
行治疗； 如重度耐药可选用三代头孢菌素加万古霉
素或利福平进行治疗。
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1. 肺炎链球菌寄居于人的上呼吸道中，是条件 致病菌；
2.肺炎链球菌对营养要求较高，在含有新鲜血液 的培养基中生长良好；