T—NHL TCRγ多重引物基因重排PCR参数优化
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ｆ ｒ ａ ｃ ｆＰ ｏ ｍ ｎ ｅ ｏ ＣＲ ｍｐ ｉ ｃ ｔ ｎ Ｍ ｅ ｈｏ ｓ Ｔ ｈ ｎ ｅ Ｐ ｙ ｌ ａ ａ ｔｒ ， ｅｅ ｔ ｈ ａｅ ｏ ｈ ｌｎ ｎ ａ ｌ ａｉ ． ｉ ｆ ｏ ｔ ｄ ｏ ｃ ａ ｇ ＣＲ ｃ ｃｅ ｐ ｒ ｍｅ ｅ ｓ ｄ ｔ ｃｅ ｔ ｅ ｒ ｔ ｆｔ ｅ ｃ ｏ ｉ ｇ ＴＣＲ＾ ｇ ｎ ｅ ｒ ｖ ｅ ｅｒａ－
１２ ４ 采 用 优 化 的 Ｔ Ｒｙ引 物 ， 测 ５ ．． Ｃ＇ 检 ３例 Ｔ —Ｎ ＨＬ标 本
ＴＲ ｃ 克 隆性 重 稍 。 Ｆ
２ 结 果
浓 度 的 常 用 值 。总 体 积 ２ Ｌ：０×ｂｆ ｒ２ ５ ｔ Ｍｇ １ ５ １ ｕｆ ． ｘ ｅ Ｌ， Ｃ２
作 者 单 位 ：５２ ３ 山 东 万 杰 医 学 院 （ 善 梅 ） 浙 江 大 学 病 理 学 ２５ １ 杜 ； 与 病 理 生 理 学 学 系 （ 韧 ） 山 东 省 淄博 市 第 一 医 院 （ 奎 ） 周 ； 刘
中性 福 尔 马 林 固定 、 规 石 蜡 包 埋 。 常
１２ 方 法 ．
缓 冲液进行电泳 ， 然后 用 凝 胶 成 像 系 统 检 测 。 目标 位 置 处 见
一
１２ １ 随机选取 ６例 Ｔ—Ｎ Ｌ， ． ． Ｈ 常规 蛋 白酶 Ｋ一酚氯仿法 抽
提 ＤＮＡ。
条或 两条 狭窄而致密的亮带判 断为单克 隆重 排 ， 见条带 未
１２ ２ Ｐ Ｒ （ ） 物 由上 海 生 物 工 程 公 司 合 成 。 引 物 序 ． ． Ｃ １引
列 参 照 文 献 ［ ］ 分 为 Ｔ Ｒ， 管 ： ＇ ｆ １。 Ｃ＇ ／ Ａ Ｖ， ＋ＶｙＯ＋Ｊ ｌ２＋ ／ １ ＇ ｌ ｐ／
Ｊ １ ２和 Ｔ Ｒ， －／ ， ／ Ｃ ． Ｉ Ｂ管 ： ＋Ｖ， １＋ ｐ ／ Ｖ ＇ ／ Ｉ ｊ ｌ ２＋Ｊ １ ２共 ２个 多 重 ￣／ ／
ｍ ｕ ｔ — ｐ ｍｅ ，ｈ ｅ ｅ ｔ ｎ ｒ ｔ ｆ ｈ ｌｎ ｎ ＣＲ＾ ｇ ｎ ｅ ｒａ ｇ ｎ ｎ ｎ５ ａ ｅ ｆＴ — ＮＨ Ｌ ｗａ ２ ％ ． ｏ ｌ ｓｏ ｌ ｉ ｉ ｆ ￣ ｔ ｅ ｄ ｔｃ ｉ ａ ｅ ｏ ｔ ｅｃ ｏ ｉ ｇ Ｔ ｏ ｙ ｅ ｅｌ ａ ｒ ｎ ｅ ｍ ｔｉ ３ ｃ ｓ ｓｏ ｓ６ ３ Ｃ ｎｃｕ ｉ ｎ
ｒ ｎ ｅ ｎ ｎ ５ ａ ｅ ｆＴ—ＮＨＬ ｂ ｉｇ ｏ ｒｉ ｒ ｖ ｄ ｐ ｏｏ ｏ ｆ Ｒ． ｓ ｌ Ｕｓｎ ｕ ｒ ｖ ｄ ｐｒｔ ｃ ｌｏ ｅ ＴＣＲ ａ ｇ ｍｅ ｔｉ ３ ｃ ｓ ｓ ｏ ｙ Ｕｓｎ ｕ ｍｐ ｏ ｅ ｒ ｔｃ ｌ ｏ ＰＣ Ｒｅ ｕ ｔ ｓ ｉ ｇ ｏ ｒｉ ｏ ｅ ｏ ｏ ｏ ｆ ｈ ｍｐ ｔ
１２３ （ ） ％ 琼 脂 糖 凝 胶 电泳 ： Ｃ ．． １２ Ｐ Ｒ产 物 ５ Ｉ Ｌ＋１ Ｌ上 样 ｘ
ຫໍສະໝຸດ Baidu
１１ 一般资料 ．
收 集 １９ ９ ７～２０ ０ ８年 浙 江 大 学 医学 院 附 属 医
院 及 浙 江 省 内其 它 医 院 的 Ｔ—Ｎ Ｌ标 本 ５ Ｈ ３例 。 全 部 标 本 经
ｓａ ｄ ｒ ｉａ ｉｎ ｏ ＣＲ ｆ ｍ ｎ ｒ ｔｃ ｌ ｏ ｅｅ ｔ ｎ ｏ ｌｎ ｌ ｔｎ ａ ｄ ｚ ｔ ｆＰ ｏ ｐ ｍｅ ａ ｄ ｐ ｏ ｏ ｏｓ ｆ ｒ ｄ ｔｃ ｉ ｆ ｃｏ ａ ｉ ｏ
争引物 而 可 能 会 抑 制 特 异 性 的 Ｐ Ｒ 扩 增。采 用 优 化 的 Ｃ
Ｔ Ｒ Ｐ Ｒ方 法 检 测 了 ５ Ｃ ￣Ｃ ３例 Ｔ—Ｎ Ｌ 检 测 率 为 ６ ． ％ 。 这 Ｈ ， ２３
一
高 的 检 测 率 与 其 它 文献 相 比证 明 了优 化 方 法 的适 用 性 ｐ 。
到 满 意 的扩 增 效 果 ， Ｔ Ｒ， 而 Ｃ＇ ／ Ｂ管 则 需 在 ５ ． ０ ９℃ ～５． ６ ７℃ 。
．
１２． ２
中国医学 创新
２１ ０ １年 １ 月 第 ８鲞筮
Ｍｄ ｅｉ
！ ｎｏ 塑 ｏ ｆ 』
：
：
：
表 １ ＴＲ Ｃ 多 重 引 物 Ｐ Ｒ扩 增 中不 同变 量 Ｃ
总体而言 ， 研究结 果表 明 ， 微增 加引 物浓度 可以改 善 轻 ＦＰ Ｆ Ｅ组织的 Ｔ Ｒ Ｃ 克隆性 Ｐ Ｒ检测 。实验性的调整 Ｐ Ｒ参 Ｃ Ｃ
注 ： 据 没 有对 应 关 系 ， 为 变 量 数 都
数对 Ｆ Ｐ Ｆ Ｅ组织的克隆分析 ， 可能会有很大的价值 ， 通过 Ｐ Ｒ Ｃ
Ｚ ＯＵＲ ｎ ＬＵＫ ｉ ｈ ｎｏｇ Ｗａｊ ｄｃｌ ｎｖｒｔ， ｉ ５ ２ ３ Ｃ ｉａ Ｈ ｅ ，１ ｕ．Ｓ ａｄ ｎ ｎｉ Ｍｅｉ ｉ ｓｙ Ｚｂ ２ ５ １ ， ｈｎ ｅ ａ Ｕ ｅｉ ｏ
【 ｂ ｔａｔ Ｏｂｅｔ ｅ Ｔ ｐｉｉ ｕｔ—ｐｒｍｅ ｒｏ Ｃ ａｄａａｙｅ Ｃ － ｅｅｒａｒｎｅ ｅ ｔ ｎｆ ｍ ｌ Ａ ｓ ｃ】 ｒ ｊｃｉ ｏｏｔ ｚ ｍ ｌ ｖ ｍｅ ｉ ａａ ｔ ｆＰ Ｒ，ｎ ｎｌ ｄＴ Ｒ／ｇｎ ｅｒ ｇｍ ｎ ｏ ａｉ ｅ ｚ ａ ｏ ｒ ｎ
技术上的优化 ， 助于确定哪些参数以及如何 应改变这些参 有
数 以尽 量减 少假 阴性 和假 阳性 结 果 。 参 考 文 献
［ ］Ｖ ｎＤ ｎｅ Ｊ ａ ｇｒｋＡ ，Ｂｉｇｍ ｎ ｅ ａ．Ｄ ｓ ｎ ａｄ １ ａ ｏ ｇｎＪ，Ｌ ｎｅａ Ｗ ｒｇｅ ａ ｎＭ，ｔ １ ｅｉ ｎ ｉ ｇ
或 涂 片样 条 带 判 断 为 多 克 隆 重 排 。 （ ） ％ 变 性 聚 丙 烯 酰 胺 ２８
凝 胶 电 泳 ： Ｂｏｒｄ 司 出 品 的 垂 直 凝 胶 电 泳 装 置 的 说 明 按 ｉ ａ公 ． 进 行 灌 胶 上 样 、 泳 、 染 。 银 染 后 凝 胶 见 一 条 或 两 条 条 带 电 银 判 断 为 单 克 隆 重 排 ， 见 条 带 或 涂抹 样 条 带 判 为 多 克 隆 。 未
实 验 性 的 调 整 Ｐ Ｒ参 数 对 Ｆ Ｐ Ｃ Ｆ Ｅ组 织 的 克 隆分 析 ， 能会 有 很 大 的价 值 。 可
【 关键词 】 Ｔ～ Ｈ ； Ｔ Ｒ Ｎ Ｌ ｃ 基因重排 ； Ｐ Ｒ Ｃ
Ｔｈ ｐｔ ｉａ ｉ ｎ ｆＰＣＲ ａ ａ ｅ ｅ ｆ ＴＣ ＲＴ ｕｌ ｐｌ ｒｍ ｅ ｅ ｅ ｒ ａｒ ａ ｅ ｅ ｔ ｉ — Ｎ Ｈ Ｌ Ｄ Ｕ ｈ ｎ — ｒｅ ， ｅ ｏ ｉ ｚ ｔｏ ｓ ｏ ｍ ｐ ｒ ｍ ｔｒｏ ｍ ｔ ｅ ｐ ｉ ｒ ｇ ｎ ｅ ｒ ｎｇ ｍ ｎ ｎ Ｔ ｉ Ｓ ａ ｎｉ
Ｉ ｍ ｙ ｂ ｆ ｒａ ｖ ｌｅｔ ａ ｊ ｓ Ｐ Ｒ ｐ ｒｍ ｆｒ ｂ ｘ ｅｉ ｅ ｔｆ ｅＣ ｏ ｉｇａ ａ ｓ ｆ Ｆ Ｅ ｔ ｓ ｅ ｔ ａ ｅｏ ｅ ｔ ａ ｄｕ ｔ Ｃ ａａ ｅｅｓ ｙｅ ｐ ｒ ｎ ｏ ｔ ｌ ｎ ｎ ｌ ｉ ｏ Ｐ ｉ ｕ ． ｇ ｕ ｏ ｍ ｒｈ ｎ ｙｓ Ｆ ｓ
通讯作者 ： 杜善 梅
２ １ Ｔ Ｒ Ａ， 管 需 ４ ． Ｃ Ｔ Ｂ ０个 循 环 ， 物 量 ５ ｍ ｌ 上 ， “ 引 ０ｐ ｏ 以 Ｍｇ
终 浓 度 １２ ．５～１７ Ｍ，Ｎ Ｐ终 浓 度 １０～２０ Ｉ ， 到 最 ． ５ｍ ｄ Ｔ ０ ０ Ｍ 达 ｘ
佳扩增效果 ； 退货温度在 ５ ． ０ ９℃ ～ ５５℃ Ｔ Ｒ Ａ管都可达 ６． ＣＴ
１ 资料 与 方 法
１５ｔ （ 浓 度 １５ｍＭ） ｄ Ｔ ｓ Ｌ 终 浓 度 １０ Ｍ） 引 ． Ｌ 终 ｘ ． ， Ｎ Ｐ ５ （ ５ ， 物 各 ０ ２ ｔ 浓 度 ５ Ｍ ） Ｔ ｑ ｌｓ酶 ０ ２ Ｉ （ Ｕ） 模 板 ． ｘ Ｌ（ ０ ｐ ， ａＰｕ ． Ｌ １ ， ｘ Ｄ Ａ ２ｐ ， 积 不 足部 分 双蒸 水 补 足 。 反 应 条 件 ：５℃ 预 变 Ｎ ． 体 Ｌ ９ 性 ７ｍｉ； 环 条 件 ：５ ℃ 变 性 １ｒｉ， 火 温 度 ５ ． ℃ ～ ｌ循 ｌ ９ ｎ退 ａ ０９ ６． ５ ５℃ １ｍｉ， 伸 ７ Ｃ １ｍｉ，８个 循 环 ； 应 结 束 后 在 ｎ延 ２ｃ ｎ３ 反 ７ ２℃ 延 伸 １ ｎ Ｐ Ｒ 反 应 在 可 以 设 定 梯 度 退 火 温 度 的 ０ ｍｉ。 Ｃ Ｅ ｐｎ ｏｆ 度 Ｐ Ｒ仪 上 进 行 ， 有 １ 不 同 的 温 度 。 （ ） ｐ ｅｄｒ梯 Ｃ 共 ２个 ３ 对 照 ： ｒａ 细 胞 做 阳性 对 照 ； 应 性 增 生 淋 巴 结 作 为 阴 性 对 ｊ ｋｔ ｕ 反 照 ； 蒸水取代样本模 板 Ｄ Ａ为空白对照 。 双 Ｎ
【 ｅ ｏ ｄ 】 Ｔ Ｎ Ｌ Ｔ Ｒ ｎ ｒ ｒ ｎｅ ｅｔ Ｐ Ｒ Ｋ ｙｗ ｒ ｓ — Ｈ ， Ｃ ｙｇ ｅ ｅ ｒ ｇ ｎ ， Ｃ ｅ ａａ ｍ
以 Ｐ Ｒ为 基 础 的克 隆分 析 虽 不 是 一 项 新 颖 的 方 法 ， 现 Ｃ 但 有 发 表 的文 章 很 少有 改 变 Ｐ Ｒ 参 数 扩 增 福 尔 马 林 固 定 石 蜡 Ｃ 包 埋 （ Ｆ Ｅ） 本 的 Ｄ Ａ 模 板 的 研 究 分 析 。本 实 验 以 Ｆ Ｐ ＦＰ 样 Ｎ ＦＥ 组织 中 Ｔ Ｒ Ｃ Ｔ基 因 重 排 为 研 究 对 象 ， 用 Ｔ Ｒ 多 重 引 物 ， 选 Ｃ 通 过 优 化 Ｐ Ｒ多 个 参 数 分 析 Ｔ—Ｎ Ｌ中 Ｔ Ｒ／ 因 重 排 ， 建 Ｃ Ｈ Ｃ ￣基 以 立 Ｐ Ｒ扩 增 中不 同变 量 性 能 改 变 的 重 要 意 义 。 Ｃ
杜 善梅 周韧 刘 奎
优化 Ｐ Ｒ多个参数分析福尔 马林固定 石蜡包埋 标本 中 Ｔ细胞 非霍奇金淋 巴瘤 （ Ｃ Ｔ—Ｎ Ｌ） Ｈ 的
优 化 Ｐ Ｒ 循 环 参 数 ， 用 优 化 Ｃ 采 ５ ３例 Ｔ—Ｎ Ｌ 中 ， 用 优 化 的 Ｔ Ｒ Ｈ 采 ｃ 多 重 引 物 克 隆 性
【 摘要 】 目的
Ｐ Ｒ反 应 。Ｐ Ｒ 产 物 长 度 在 ８ ２ ０ｂ 。 （ ） Ｃ Ｃ Ｃ ０～ ２ ｐ ２ Ｐ Ｒ体 系 与 循 环 参数 ： 按 照标 准 的 Ｐ Ｒ反 应 体 系 与循 环 参 数 设 置 不 同 的 ① Ｃ 变 量 （ 表 １ 。② 退 火 温 度 范 围 确 定 ： 取 反 应 体 系 各 成 分 见 ） 选
中国医学创新
２１ ０ １年 １月 第 ８卷 第 ２期
Ｍｅｉａ Ｉｎ ｖｔｎｏ ｈｎ ， ｎ ａｙ２ １ ， ｏ． ｏ２ ｄｃｌ ｎ ｏａ ｏ ｆ ｉａＪ ｕ ｒ．０ １Ｖ １８Ｎ ． ｉ Ｃ ａ
．１ １． ２
・
影 像 与 检 验
・
Ｔ—Ｎ ＬＴ Ｒｙ 重 引 物 基 因 重 排 Ｐ Ｒ Ｈ Ｃ －多 Ｃ 参 数 优 化
ＴＲ ｃ 多 重 引 物 基 因 重排 ， 建 立 Ｐ Ｒ扩 增 中不 同 变 量 性 能 改 变 的重 要 意 义 。 方 法 以 Ｃ 的 Ｐ Ｒ 方法 检 测 ５ Ｃ ３例 Ｔ—Ｎ Ｌ的 Ｔ Ｒ Ｈ ｃ １基 因 重 排 率 。结 果 Ｔ Ｒ ， 因 重 排 检 测 率 为 ６ ． ％ 。结 论 Ｃ ３基 ２３
ｉ ｄ ａ ｄ ｐ ｒｆ ｍ ｅ ｄ ｄ Ｆ Ｐ ｓ ｍ ｌｓ ｆ ｅ ｎ ａａ ｎｅ ｂ ｄ ｅ （ Ｆ Ｅ） ａ ｐｅ ｎＴ—Ｎｆ ｉ ｏｄ ｒｔ ｅｔｂｉ ｈ ｉｎｆ ａ ｃ ｆ ｉ ｅｅ ｔ ａ ａ ｌｓｏ ｅ— ｘ ｉ ｆ ｉ Ｊ ｎ ｒ ｅ ｓ ｌ ｈ ｔｅｓ ｉｃ ｎ ｅ ｏ ｆ ｒｎ ｒ ｂｅ ｎ ｐ ｒ Ｌ， ｏ ａ ｓ ｇ ｉ ｄｆ ｖｉ
１２ ４ 采 用 优 化 的 Ｔ Ｒｙ引 物 ， 测 ５ ．． Ｃ＇ 检 ３例 Ｔ —Ｎ ＨＬ标 本
ＴＲ ｃ 克 隆性 重 稍 。 Ｆ
２ 结 果
浓 度 的 常 用 值 。总 体 积 ２ Ｌ：０×ｂｆ ｒ２ ５ ｔ Ｍｇ １ ５ １ ｕｆ ． ｘ ｅ Ｌ， Ｃ２
作 者 单 位 ：５２ ３ 山 东 万 杰 医 学 院 （ 善 梅 ） 浙 江 大 学 病 理 学 ２５ １ 杜 ； 与 病 理 生 理 学 学 系 （ 韧 ） 山 东 省 淄博 市 第 一 医 院 （ 奎 ） 周 ； 刘
中性 福 尔 马 林 固定 、 规 石 蜡 包 埋 。 常
１２ 方 法 ．
缓 冲液进行电泳 ， 然后 用 凝 胶 成 像 系 统 检 测 。 目标 位 置 处 见
一
１２ １ 随机选取 ６例 Ｔ—Ｎ Ｌ， ． ． Ｈ 常规 蛋 白酶 Ｋ一酚氯仿法 抽
提 ＤＮＡ。
条或 两条 狭窄而致密的亮带判 断为单克 隆重 排 ， 见条带 未
１２ ２ Ｐ Ｒ （ ） 物 由上 海 生 物 工 程 公 司 合 成 。 引 物 序 ． ． Ｃ １引
列 参 照 文 献 ［ ］ 分 为 Ｔ Ｒ， 管 ： ＇ ｆ １。 Ｃ＇ ／ Ａ Ｖ， ＋ＶｙＯ＋Ｊ ｌ２＋ ／ １ ＇ ｌ ｐ／
Ｊ １ ２和 Ｔ Ｒ， －／ ， ／ Ｃ ． Ｉ Ｂ管 ： ＋Ｖ， １＋ ｐ ／ Ｖ ＇ ／ Ｉ ｊ ｌ ２＋Ｊ １ ２共 ２个 多 重 ￣／ ／
ｍ ｕ ｔ — ｐ ｍｅ ，ｈ ｅ ｅ ｔ ｎ ｒ ｔ ｆ ｈ ｌｎ ｎ ＣＲ＾ ｇ ｎ ｅ ｒａ ｇ ｎ ｎ ｎ５ ａ ｅ ｆＴ — ＮＨ Ｌ ｗａ ２ ％ ． ｏ ｌ ｓｏ ｌ ｉ ｉ ｆ ￣ ｔ ｅ ｄ ｔｃ ｉ ａ ｅ ｏ ｔ ｅｃ ｏ ｉ ｇ Ｔ ｏ ｙ ｅ ｅｌ ａ ｒ ｎ ｅ ｍ ｔｉ ３ ｃ ｓ ｓｏ ｓ６ ３ Ｃ ｎｃｕ ｉ ｎ
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１２３ （ ） ％ 琼 脂 糖 凝 胶 电泳 ： Ｃ ．． １２ Ｐ Ｒ产 物 ５ Ｉ Ｌ＋１ Ｌ上 样 ｘ
ຫໍສະໝຸດ Baidu
１１ 一般资料 ．
收 集 １９ ９ ７～２０ ０ ８年 浙 江 大 学 医学 院 附 属 医
院 及 浙 江 省 内其 它 医 院 的 Ｔ—Ｎ Ｌ标 本 ５ Ｈ ３例 。 全 部 标 本 经
ｓａ ｄ ｒ ｉａ ｉｎ ｏ ＣＲ ｆ ｍ ｎ ｒ ｔｃ ｌ ｏ ｅｅ ｔ ｎ ｏ ｌｎ ｌ ｔｎ ａ ｄ ｚ ｔ ｆＰ ｏ ｐ ｍｅ ａ ｄ ｐ ｏ ｏ ｏｓ ｆ ｒ ｄ ｔｃ ｉ ｆ ｃｏ ａ ｉ ｏ
争引物 而 可 能 会 抑 制 特 异 性 的 Ｐ Ｒ 扩 增。采 用 优 化 的 Ｃ
Ｔ Ｒ Ｐ Ｒ方 法 检 测 了 ５ Ｃ ￣Ｃ ３例 Ｔ—Ｎ Ｌ 检 测 率 为 ６ ． ％ 。 这 Ｈ ， ２３
一
高 的 检 测 率 与 其 它 文献 相 比证 明 了优 化 方 法 的适 用 性 ｐ 。
到 满 意 的扩 增 效 果 ， Ｔ Ｒ， 而 Ｃ＇ ／ Ｂ管 则 需 在 ５ ． ０ ９℃ ～５． ６ ７℃ 。
．
１２． ２
中国医学 创新
２１ ０ １年 １ 月 第 ８鲞筮
Ｍｄ ｅｉ
！ ｎｏ 塑 ｏ ｆ 』
：
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：
表 １ ＴＲ Ｃ 多 重 引 物 Ｐ Ｒ扩 增 中不 同变 量 Ｃ
总体而言 ， 研究结 果表 明 ， 微增 加引 物浓度 可以改 善 轻 ＦＰ Ｆ Ｅ组织的 Ｔ Ｒ Ｃ 克隆性 Ｐ Ｒ检测 。实验性的调整 Ｐ Ｒ参 Ｃ Ｃ
注 ： 据 没 有对 应 关 系 ， 为 变 量 数 都
数对 Ｆ Ｐ Ｆ Ｅ组织的克隆分析 ， 可能会有很大的价值 ， 通过 Ｐ Ｒ Ｃ
Ｚ ＯＵＲ ｎ ＬＵＫ ｉ ｈ ｎｏｇ Ｗａｊ ｄｃｌ ｎｖｒｔ， ｉ ５ ２ ３ Ｃ ｉａ Ｈ ｅ ，１ ｕ．Ｓ ａｄ ｎ ｎｉ Ｍｅｉ ｉ ｓｙ Ｚｂ ２ ５ １ ， ｈｎ ｅ ａ Ｕ ｅｉ ｏ
【 ｂ ｔａｔ Ｏｂｅｔ ｅ Ｔ ｐｉｉ ｕｔ—ｐｒｍｅ ｒｏ Ｃ ａｄａａｙｅ Ｃ － ｅｅｒａｒｎｅ ｅ ｔ ｎｆ ｍ ｌ Ａ ｓ ｃ】 ｒ ｊｃｉ ｏｏｔ ｚ ｍ ｌ ｖ ｍｅ ｉ ａａ ｔ ｆＰ Ｒ，ｎ ｎｌ ｄＴ Ｒ／ｇｎ ｅｒ ｇｍ ｎ ｏ ａｉ ｅ ｚ ａ ｏ ｒ ｎ
技术上的优化 ， 助于确定哪些参数以及如何 应改变这些参 有
数 以尽 量减 少假 阴性 和假 阳性 结 果 。 参 考 文 献
［ ］Ｖ ｎＤ ｎｅ Ｊ ａ ｇｒｋＡ ，Ｂｉｇｍ ｎ ｅ ａ．Ｄ ｓ ｎ ａｄ １ ａ ｏ ｇｎＪ，Ｌ ｎｅａ Ｗ ｒｇｅ ａ ｎＭ，ｔ １ ｅｉ ｎ ｉ ｇ
或 涂 片样 条 带 判 断 为 多 克 隆 重 排 。 （ ） ％ 变 性 聚 丙 烯 酰 胺 ２８
凝 胶 电 泳 ： Ｂｏｒｄ 司 出 品 的 垂 直 凝 胶 电 泳 装 置 的 说 明 按 ｉ ａ公 ． 进 行 灌 胶 上 样 、 泳 、 染 。 银 染 后 凝 胶 见 一 条 或 两 条 条 带 电 银 判 断 为 单 克 隆 重 排 ， 见 条 带 或 涂抹 样 条 带 判 为 多 克 隆 。 未
实 验 性 的 调 整 Ｐ Ｒ参 数 对 Ｆ Ｐ Ｃ Ｆ Ｅ组 织 的 克 隆分 析 ， 能会 有 很 大 的价 值 。 可
【 关键词 】 Ｔ～ Ｈ ； Ｔ Ｒ Ｎ Ｌ ｃ 基因重排 ； Ｐ Ｒ Ｃ
Ｔｈ ｐｔ ｉａ ｉ ｎ ｆＰＣＲ ａ ａ ｅ ｅ ｆ ＴＣ ＲＴ ｕｌ ｐｌ ｒｍ ｅ ｅ ｅ ｒ ａｒ ａ ｅ ｅ ｔ ｉ — Ｎ Ｈ Ｌ Ｄ Ｕ ｈ ｎ — ｒｅ ， ｅ ｏ ｉ ｚ ｔｏ ｓ ｏ ｍ ｐ ｒ ｍ ｔｒｏ ｍ ｔ ｅ ｐ ｉ ｒ ｇ ｎ ｅ ｒ ｎｇ ｍ ｎ ｎ Ｔ ｉ Ｓ ａ ｎｉ
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通讯作者 ： 杜善 梅
２ １ Ｔ Ｒ Ａ， 管 需 ４ ． Ｃ Ｔ Ｂ ０个 循 环 ， 物 量 ５ ｍ ｌ 上 ， “ 引 ０ｐ ｏ 以 Ｍｇ
终 浓 度 １２ ．５～１７ Ｍ，Ｎ Ｐ终 浓 度 １０～２０ Ｉ ， 到 最 ． ５ｍ ｄ Ｔ ０ ０ Ｍ 达 ｘ
佳扩增效果 ； 退货温度在 ５ ． ０ ９℃ ～ ５５℃ Ｔ Ｒ Ａ管都可达 ６． ＣＴ
１ 资料 与 方 法
１５ｔ （ 浓 度 １５ｍＭ） ｄ Ｔ ｓ Ｌ 终 浓 度 １０ Ｍ） 引 ． Ｌ 终 ｘ ． ， Ｎ Ｐ ５ （ ５ ， 物 各 ０ ２ ｔ 浓 度 ５ Ｍ ） Ｔ ｑ ｌｓ酶 ０ ２ Ｉ （ Ｕ） 模 板 ． ｘ Ｌ（ ０ ｐ ， ａＰｕ ． Ｌ １ ， ｘ Ｄ Ａ ２ｐ ， 积 不 足部 分 双蒸 水 补 足 。 反 应 条 件 ：５℃ 预 变 Ｎ ． 体 Ｌ ９ 性 ７ｍｉ； 环 条 件 ：５ ℃ 变 性 １ｒｉ， 火 温 度 ５ ． ℃ ～ ｌ循 ｌ ９ ｎ退 ａ ０９ ６． ５ ５℃ １ｍｉ， 伸 ７ Ｃ １ｍｉ，８个 循 环 ； 应 结 束 后 在 ｎ延 ２ｃ ｎ３ 反 ７ ２℃ 延 伸 １ ｎ Ｐ Ｒ 反 应 在 可 以 设 定 梯 度 退 火 温 度 的 ０ ｍｉ。 Ｃ Ｅ ｐｎ ｏｆ 度 Ｐ Ｒ仪 上 进 行 ， 有 １ 不 同 的 温 度 。 （ ） ｐ ｅｄｒ梯 Ｃ 共 ２个 ３ 对 照 ： ｒａ 细 胞 做 阳性 对 照 ； 应 性 增 生 淋 巴 结 作 为 阴 性 对 ｊ ｋｔ ｕ 反 照 ； 蒸水取代样本模 板 Ｄ Ａ为空白对照 。 双 Ｎ
【 ｅ ｏ ｄ 】 Ｔ Ｎ Ｌ Ｔ Ｒ ｎ ｒ ｒ ｎｅ ｅｔ Ｐ Ｒ Ｋ ｙｗ ｒ ｓ — Ｈ ， Ｃ ｙｇ ｅ ｅ ｒ ｇ ｎ ， Ｃ ｅ ａａ ｍ
以 Ｐ Ｒ为 基 础 的克 隆分 析 虽 不 是 一 项 新 颖 的 方 法 ， 现 Ｃ 但 有 发 表 的文 章 很 少有 改 变 Ｐ Ｒ 参 数 扩 增 福 尔 马 林 固 定 石 蜡 Ｃ 包 埋 （ Ｆ Ｅ） 本 的 Ｄ Ａ 模 板 的 研 究 分 析 。本 实 验 以 Ｆ Ｐ ＦＰ 样 Ｎ ＦＥ 组织 中 Ｔ Ｒ Ｃ Ｔ基 因 重 排 为 研 究 对 象 ， 用 Ｔ Ｒ 多 重 引 物 ， 选 Ｃ 通 过 优 化 Ｐ Ｒ多 个 参 数 分 析 Ｔ—Ｎ Ｌ中 Ｔ Ｒ／ 因 重 排 ， 建 Ｃ Ｈ Ｃ ￣基 以 立 Ｐ Ｒ扩 增 中不 同变 量 性 能 改 变 的 重 要 意 义 。 Ｃ
杜 善梅 周韧 刘 奎
优化 Ｐ Ｒ多个参数分析福尔 马林固定 石蜡包埋 标本 中 Ｔ细胞 非霍奇金淋 巴瘤 （ Ｃ Ｔ—Ｎ Ｌ） Ｈ 的
优 化 Ｐ Ｒ 循 环 参 数 ， 用 优 化 Ｃ 采 ５ ３例 Ｔ—Ｎ Ｌ 中 ， 用 优 化 的 Ｔ Ｒ Ｈ 采 ｃ 多 重 引 物 克 隆 性
【 摘要 】 目的
Ｐ Ｒ反 应 。Ｐ Ｒ 产 物 长 度 在 ８ ２ ０ｂ 。 （ ） Ｃ Ｃ Ｃ ０～ ２ ｐ ２ Ｐ Ｒ体 系 与 循 环 参数 ： 按 照标 准 的 Ｐ Ｒ反 应 体 系 与循 环 参 数 设 置 不 同 的 ① Ｃ 变 量 （ 表 １ 。② 退 火 温 度 范 围 确 定 ： 取 反 应 体 系 各 成 分 见 ） 选
中国医学创新
２１ ０ １年 １月 第 ８卷 第 ２期
Ｍｅｉａ Ｉｎ ｖｔｎｏ ｈｎ ， ｎ ａｙ２ １ ， ｏ． ｏ２ ｄｃｌ ｎ ｏａ ｏ ｆ ｉａＪ ｕ ｒ．０ １Ｖ １８Ｎ ． ｉ Ｃ ａ
．１ １． ２
・
影 像 与 检 验
・
Ｔ—Ｎ ＬＴ Ｒｙ 重 引 物 基 因 重 排 Ｐ Ｒ Ｈ Ｃ －多 Ｃ 参 数 优 化
ＴＲ ｃ 多 重 引 物 基 因 重排 ， 建 立 Ｐ Ｒ扩 增 中不 同 变 量 性 能 改 变 的重 要 意 义 。 方 法 以 Ｃ 的 Ｐ Ｒ 方法 检 测 ５ Ｃ ３例 Ｔ—Ｎ Ｌ的 Ｔ Ｒ Ｈ ｃ １基 因 重 排 率 。结 果 Ｔ Ｒ ， 因 重 排 检 测 率 为 ６ ． ％ 。结 论 Ｃ ３基 ２３
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