干细胞冻存及复苏步骤(精)

干细胞冻存及复苏步骤

细胞冻存(缓存

1、0.25%trypsin(或+0.02%EDTA消化5min左右,镜下见细胞回缩间隙增大,即可

吹打脱落。

1、800r离心5分钟,2次(无EDTA,离心一次即可

2、配制冻存液:甘油:血清:完全培养基=1:2:7

3、50ml培养瓶的细胞(约5×105,用1ml冻存液重悬细胞,放入冻存管中。

4、冻存步骤:4℃1h——-20℃1h——--80℃1h——- -196℃液氮冻存。(冻存细胞程

序性降温,4℃放置时间40min以上,3h以内,-20℃对细胞损伤最大,1h左右为

宜。

细胞复苏(速溶

冻存管直接投入37℃水浴,平摇直至融化,种于50ml培养瓶中。根据细胞贴壁情况换液(一般24-36h换液。

计算存活率

取一滴冻存细胞悬液,台盼兰染色,活细胞不上色,死细胞染成兰色,计算细胞存活率。(细胞总数-死细胞数/细胞总数×100%