实验性肿瘤细胞转移动物模型的活体成像观察

转 移 是 恶 性 肿瘤 的基 本 生 物 学特 性之 一 ，是 肿瘤 患者死 亡 的主要原 因 。肿瘤转 移动物 模型 是肿 瘤研 究 的重要工 具 ，通 过 复制与人 体肿瘤 相似 的动
１ 材 料 与方 法
１１ 材料 ．
物模 型 ，可 系统深 入 地研 究 肿瘤 的 发生 发展 过程 ，
格按照 Ｓ Ｆ级 标准要 求进行 ［Ｙ Ｐ Ｓ ＸＫ（ ２０ ．０ １。 沪）０ ７０ ０ ］
１１ 仪 器 和试剂 ．－ ３ 小动物 活体 荧光 成像 系统购 自 德 国 Ｂ ｒ ｏｄＴ ｃ ｎ ｌｇｅ ｍｂ ＆ Ｃ ． ｅｔ ｌ ｅｈ ｏｏ ｉｓ ｈ Ｇ Ｈ ｏＫＧ，型号 为 Ｌ ９ ３ＮＣ３ ０ Ｂ ８ ２ ，分析 软件 为 Ｗ ｉＬ ｇ ｔ２ ｎ ｉｈ３ 。荧光
在动物体 内深部脏器的转移情况，它将为肿瘤转移机制、抗转移治疗等研究提供有益的帮助。
【 关键词】 Ｆ ／ｕ 双标； Ｇ ＰＬ ｃ 慢病毒载体 、 动物活体戍像 系统； 转移； 动物模型
［ 图分类号 ］ ９ —３ ［ 献标识 码］ 中 Ｑ ５３ 文 Ａ ［ 章编号】１７ —８ ７２ １ ）５０ ７ —７ 文 ６ ４５ １ （０ ２０ —３ ６０
生长 期 的 Ｓ ＭＭＣ ７ ２ 一 Ｆ ／ ｕ 细 胞 ，胰蛋 白酶 常 一７ １Ｇ ＰＬ ｃ
［ 讯作者】 通 姚
明（９ ９）男 ， 士， 究 员 。研 究 方 向 ： 瘤 １５ 一 ， 博 研 肿
转移 模型 、转移机 理及抗 肿瘤 实验研 究。
Ｅ— ａｌ ｍ ｙ ｏ＠ ｓ ｃ ． ｇ ｍ ｉ： ａ ｈｓ ｉ ｏｒ
１１ 实验动物 ．２ ． ＳＦ Ｐ 级雄 性 Ｂ Ｌ ／．ｕｎ 小 鼠 １ Ａ Ｂｃｎ ／ｕ ２
立 了大 量 的转 移 模 型 。 与 自发 性 转 移 模 型 相 比 ，
实验 性 转 移 模 型 具 有 操 作 简 便 、 转移 率 高 ，较 短 时 间内可获得 肿瘤 转移灶 等优 点 ，因而在 肿瘤研 究
３６ ７
实验动物 与比较医学 Ｌ ｂ ｒｔｒ ｎｍａ ａｄ ｏ ａａｖ ｄｃ ｅ ａｏａｏｙＡ ｉ ｌｎ ｍｐｒｔ ｅ Ｃ ｉ Ｍｅｉｉ ｎ
ｄ ｉ ０３ ６ ／ｉ ｎ１７ ・８ ７２ １ ． ． ２ ｏ： ． ９ ．ｓ ． ４５ １ ． ２０ ０ １ ９ ｊｓ ６ ０ ５０
实验 性肿 瘤 细胞 转 移 动物 模 型 的活体 成 像观 察
闫明霞， 朱淼鑫， 刘 蕾， 静， 李 林河春， 赵方瑜， 姚
（ 上海 市肿瘤研 究 所， 上海 ２０ ３ ） ００２
明
［ 摘要】 目的 利用小动物活体成像 系统观察肿瘤细胞在动物体 内的转移情况。方法 分别将不 同浓度 的绿 色荧光蛋 白（Ｐ ） 荧光素 酶（ ｃｆｒｓ， ｕ） 标 的 Ｓ Ｇ Ｆ和 １ ｉ ａｅＬ ｃｇ ｕ ｅ ￣ ＭＭＣ ７２ 细胞接 种入 裸 小 鼠尾 一７ １
活 体 成像 技 术在 实验 性 转移 动 物模 型 中的应 用 。
女 日期］ ０ ２０ —１ 稿 ２ １—１３
ｆ 金 项 目］ 海 市 科 委 创 新 行动 计划 （９ ４ ９ ０ ０ ， 基 上 ０ ｌ０ ０ ２ ０
１ ０ ０ １ ０ １ ９ ２ ０ ） １４
显微 镜购 自Ｏ ＹＭＰ 公司 。 牛 血清 购 白Ｂ ｏ ｓ Ｌ ＵＳ 胎 ． ｉｗｅｔ
公 司 ，培 养 皿 及 培养 板 等 购 白Ｃｏ ｎｎ ｒ ｉｇ公 司 。
１２ 方法 ．
【 作者简 介】闫明霞（９ ６） 女， １ ７ 一， 博士， 实验肿瘤 学。
Ｅ— ａｌｍ ｉ ｇ ａ ａ ｍ ｉ： ｎ ｘｉｙ ｎ＠ ｇ ａ ｌ ｏ ｍｉ ． ｍ ｃ
１ ． 尾静脉接种肺转移动物模型的建立 取指数 ．１ ２
规消 化制 成悬 液 ，计数 并调 整细 胞浓 度 为每 ２ ０ｕ ０ ｌ 体积 分 别含 １× １ ６ ０ 、５× １ １× １ 肿瘤 细 ０和 ０个
实验动物与 比较医学 Ｌ ｂｒｔｒ ｎｍａａ ｄＣ ｍｐｒｔ ｅ ｄｃ ｅ ａｏａ ｙＡ ｉ ｌ ｎ ｏ ａａｖ ｉｎ ｏ ｉ Ｍｅ ｉ
静脉 和脾 ，建立 实验性 转移动 物模 型 ，采用活体 成像技 术监 测不 同浓度 的 细胞在 小 鼠体 内的转移
情况，动态观察 同一细胞于不同时间点在小鼠体 内的转移情况。结果 成功建立了尾静脉接种肺 转移及脾 内接种肝转移的实验性转移动物模型 ，经小动物活体成像系统检测发现，随着接种 细胞 浓度 的增加 ，荧光素的表达面积和强度逐渐增加，二者呈正比关系； 随着接种 时间的延长，荧光 素 的表 达 面积 和 强度 逐渐 减弱 ，二 者呈 成反 比关 系。结论 活体 荧光成 像 系统可较 好地观 测肿 瘤
中一直 被广 泛使用 。本 研究 分别通 过尾静 脉和脾 内
注射 建立 血道转 移动物 模型 ，利 用小动 物活 体成像 技 术观察 肿瘤在 动物 体 内的转移情 况 ，探讨 小动 物
只， ８周龄 ， ６ 体质量 １ ￣２ ， ８ ２ｇ 由上海市肿 瘤研 究 所提供［Ｃ （ ２０ ．Ｏ １， Ｓ ＸＫ 沪）０ ７０Ｏ ］实验操作及动物饲养严
并 可 阐 明肿 瘤 转 移 机 制 。 目前 ， 国 内外 理 想 的 白 发 转移动 物模 型较 少 ，远 远不 能满足 基础和 临床研 究 的需 要 ，许 多研 究者借 助实验 性转移 这一 手段建
１１ 细胞 株 稳 定转染绿 色荧 光蛋 白（ ｅｎＦｕ — ．１ ． Ｇｒｅ—ｌｏ
ｒｓｅ ｔ ｒｔｉ， Ｐ ） Ｉ ｅｃ ｎ ｏｅｎ Ｇ Ｆ ￣ 荧光 素酶 （ ｃｆｒｓ ， ｕ ） Ｐ ］ １ ｉ ａｅ Ｌ ｃ 的 ｕ ｅ 人肝 细胞 肝癌细 胞株 Ｓ ＭＭＣ ７ ２ ． Ｆ ／ ｕ ．７ Ｇ ＰＬ ｃ山癌 基 １ 因及 相 关基 因 国 家 重 点实 验 室 提 供 。细 胞 加 入 含 １ ％ 胎牛 血清 的 Ｄ Ｍ 培养 液 ，在 ３ ℃、５ Ｏ２ ０ ＭＥ ７ ％Ｃ 饱 和 湿度 恒 温 箱 中进 行 常规 培 养 。