溶血性链球菌的检验
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闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
三、溶血性链球菌的的检验
GB/T4789.11-2003
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
（一）实验内容
样品处理→增菌培养→分离培养→ 纯化培养→生化鉴定→报告
（二）实验过程
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食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵 袭性酶有关，主要有以下几种： 1、溶血素 2、致热外毒素 3、透明质酸酶 4、链激酶 5、链道酶 6、杀白细胞素 抵抗力： 60℃30min即被杀死，对常用消毒剂敏感。 乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、 磺胺均敏感。
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食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
一般而言，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品： 1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓 性炎症时造成食品的污染； 2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜 禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染。 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、 呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血 症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等 变态反应。
溶血性链球菌检验
二、流行病学与致病性
溶血性链球菌在自然界中分布较广，存 在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物 的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、 空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染， 被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对 人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化 脓性感染部位常成为食品污染的污染源。
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食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
第一天 样品处理和增菌培养
第一天前半天 规格名称 预先准备并灭菌的器材 数量
1、500mL广口瓶 2、13×100mm试管 3、10mL移液管 4、5mL移液管 5、1mL移液管 6、直径为90mm平皿 7、250mL量筒
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（2）杆菌肽敏感试验 将分纯的乙型溶血性 链球菌接种血平板，在 划线处贴附杆菌肽纸片， 36℃，18h，出现抑菌带 为阳性，（可推测为乙 型溶血性链球菌）。
溶血性链球菌检验
四、报告
根据培养后的形态，菌落特征及生化试验结果进行报告。
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食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
一、生物学特性
（一）形态与染色
1、呈球形或卵圆形，直径 0.5um-1um 链状排列（长短不 一）。 2、 革兰氏染色阳性，衰老培养 物常成阴性。 3 、无芽孢、无鞭毛、多数无夹 膜。
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溶血性链球菌检验
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溶血性链球菌检验
（三）生化特性
1、均分解葡萄糖产酸。
2、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。
3、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶、不分解菊糖 （肺炎球菌分解葡萄糖）。 4、 A群菌对杆菌肽敏感。
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溶血性链球菌检验
第二天 接种平板进行分离培养 从肉汤中接种血平板， 36±1℃培养24h。 第三天 分纯培养 从分离培养的血平板上，挑起乙型溶血圆形突 起的细小菌落，在血平板上分纯 ， 36±1℃培养24h。 血平板上菌落灰白色，半透明或不透明，表面 光滑，有乳光，直径约0.5mm~0.75mm，为圆形突起 的细小菌落，乙型溶血链球菌。周围有2mm~4mm界 限分明，无色透明的溶血圈。
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溶血性链球菌检验
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分） 第四天 鉴定
溶血性链球菌检验
1、革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生 化鉴定。 2、生化鉴定 （1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水， 混匀，再加入链球菌18-24h36±1℃肉浸液肉汤培养 物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，臵于 36±1℃水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块 重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不 溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已 知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。
2个 7支 1支 3支 12支 28套 1支
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Biblioteka Baidu
溶血性链球菌检验
第一天后半天 1、样品处理 无菌操作称取检样25g（mL)，加入装有225mL灭菌生 理盐水的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以800010000r/min打碎1min，制成混悬液 。 2、增菌培养 吸取5mL混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸液肉汤（如 检样污染严重，可同时接种5mL至匹克氏肉汤）， 36±1℃培养24h。 3、分离培养 混悬液直接划线于血平板36±1℃培养24h。
（二）培养特性
1、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧。 2、 对营养要求高，普通培养基不能良好生长，（需加 血清液、腹水等）。 3、最适温度37℃，pH7.4-7.6 4、在液体培养基中，溶血菌株,呈絮状或颗粒状沉淀生 长（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长，如粪链 菌。 5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、有 乳光圆形突起的细小菌落，直径0.5-0.75mm，针尖大小， 菌落周围出现溶血环。
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溶血性链球菌检验
（一）实验内容
样品处理→增菌培养→分离培养→ 纯化培养→生化鉴定→报告
（二）实验过程
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溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵 袭性酶有关，主要有以下几种： 1、溶血素 2、致热外毒素 3、透明质酸酶 4、链激酶 5、链道酶 6、杀白细胞素 抵抗力： 60℃30min即被杀死，对常用消毒剂敏感。 乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、 磺胺均敏感。
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一般而言，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品： 1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓 性炎症时造成食品的污染； 2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜 禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染。 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、 呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血 症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等 变态反应。
溶血性链球菌检验
二、流行病学与致病性
溶血性链球菌在自然界中分布较广，存 在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物 的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、 空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染， 被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对 人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化 脓性感染部位常成为食品污染的污染源。
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食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
第一天 样品处理和增菌培养
第一天前半天 规格名称 预先准备并灭菌的器材 数量
1、500mL广口瓶 2、13×100mm试管 3、10mL移液管 4、5mL移液管 5、1mL移液管 6、直径为90mm平皿 7、250mL量筒
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食品安全检验技术（微生物部分）
（2）杆菌肽敏感试验 将分纯的乙型溶血性 链球菌接种血平板，在 划线处贴附杆菌肽纸片， 36℃，18h，出现抑菌带 为阳性，（可推测为乙 型溶血性链球菌）。
溶血性链球菌检验
四、报告
根据培养后的形态，菌落特征及生化试验结果进行报告。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
一、生物学特性
（一）形态与染色
1、呈球形或卵圆形，直径 0.5um-1um 链状排列（长短不 一）。 2、 革兰氏染色阳性，衰老培养 物常成阴性。 3 、无芽孢、无鞭毛、多数无夹 膜。
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溶血性链球菌检验
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溶血性链球菌检验
（三）生化特性
1、均分解葡萄糖产酸。
2、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。
3、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶、不分解菊糖 （肺炎球菌分解葡萄糖）。 4、 A群菌对杆菌肽敏感。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
第二天 接种平板进行分离培养 从肉汤中接种血平板， 36±1℃培养24h。 第三天 分纯培养 从分离培养的血平板上，挑起乙型溶血圆形突 起的细小菌落，在血平板上分纯 ， 36±1℃培养24h。 血平板上菌落灰白色，半透明或不透明，表面 光滑，有乳光，直径约0.5mm~0.75mm，为圆形突起 的细小菌落，乙型溶血链球菌。周围有2mm~4mm界 限分明，无色透明的溶血圈。
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食品安全检验技术（微生物部分） 第四天 鉴定
溶血性链球菌检验
1、革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生 化鉴定。 2、生化鉴定 （1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水， 混匀，再加入链球菌18-24h36±1℃肉浸液肉汤培养 物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，臵于 36±1℃水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块 重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不 溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已 知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。
2个 7支 1支 3支 12支 28套 1支
闽北职业技术学院食品与生物工程系
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溶血性链球菌检验
第一天后半天 1、样品处理 无菌操作称取检样25g（mL)，加入装有225mL灭菌生 理盐水的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以800010000r/min打碎1min，制成混悬液 。 2、增菌培养 吸取5mL混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸液肉汤（如 检样污染严重，可同时接种5mL至匹克氏肉汤）， 36±1℃培养24h。 3、分离培养 混悬液直接划线于血平板36±1℃培养24h。
（二）培养特性
1、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧。 2、 对营养要求高，普通培养基不能良好生长，（需加 血清液、腹水等）。 3、最适温度37℃，pH7.4-7.6 4、在液体培养基中，溶血菌株,呈絮状或颗粒状沉淀生 长（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长，如粪链 菌。 5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、有 乳光圆形突起的细小菌落，直径0.5-0.75mm，针尖大小， 菌落周围出现溶血环。