医学微生物学实验ppt课件

4 菌液入口：立即吐入消毒容器内，1：1000高锰酸钾或3% 双氧水漱口，根据菌种服用抗菌药物。
5 菌液污染台面：2%~3%来苏尔或0.1%新洁尔灭覆盖30分钟 后抹去，皮肤手指沾染活菌应用上述液体浸泡3分后肥皂和 清水洗净。
6 火警：勿慌，立即关闭电闸和煤气闸。若酒精乙醇乙醚等10 有机溶剂起火切不可用水扑救，可用沙土等物扑灭。
1 皮肤破损：去除异物，生理盐水或蒸馏水洗净后2% 碘酊 或2%红汞涂抹。
2 烧伤：局部涂凡士林，2%鞣酸或2%苦味酸。
3 化学药品腐蚀伤：若强酸则先用大量清水冲洗，再用碳酸 氢钠溶液洗涤中和；若强碱则先用大量清水冲洗，再用2%硼 酸洗涤中和（若伤处为眼部加用橄榄油或者液体石蜡1~2滴 滴眼）。
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一、目的
1.掌握细菌涂片的制备及革兰染色的方法。 2.熟悉革兰染色的原理和临床意义。
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二、原理
初染
媒染
结
卢
晶
戈
紫
氏
碘
液
一
一
95%
脱色 乙 醇 半
复染
G+
石 碳
酸
复
红
半
G-
凡能保留第一种染料结晶紫的蓝紫色的细菌叫
G+菌，凡能被酒精脱色之后染上复染液石碳酸复
红的红色的细菌叫G-菌。
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通透性学说
后两者的特性： 1、可感知，易避免 2、危害范围有限 3、危害持续时间短
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一.实验室生物安全
惨痛的历史教训
例一：1956年，前苏联的一个实验室曾有9支 装有感染了委内瑞拉马脑炎病毒的鼠脑的安 瓿被打破。由于没采取必要的措施，结果在 几天内造成24名工作人员感染。
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一.实验室生物安全
例二：2004年4月，中国疾病预防控制中 心科研人员，采用未经论证的非典病毒灭 活方法，在不符合防护要求的普通实验室 内操作非典感染材料，造成北京、安徽发 生非典疫情。
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三.细菌的形态学检查
染色标本检查
单染法：简单染色，一种染料 （美蓝染色） 复染法：复杂染色，两种以上染料（革兰染色、
抗酸染色）
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革兰染色(Gram stain)
1884年由丹麦细菌学家Gram创立。 革兰染色是最常用的一种染色方法，可以
将细菌初步分为革兰染色阳性菌和革兰染色 阴性菌，在临床上具有非常重要的意义。
1.平板分区划线接种法：分离培养细菌。 2.斜面固体培养基接种法：纯菌的移种，
短时间保存菌种。
半固体琼脂培养基穿刺接种法
保存菌种或观察细菌的动力
液体培养基接种法
用Βιβλιοθήκη Baidu肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等。
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1.平板分区划线接种-得单个菌落
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分区划线注意事项
划线时接种环与平皿约成30～40度角,轻轻接触, 以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂。
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2.半固体培养基-鞭毛 观察细菌的动力
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3.液体培养基
三. 细菌在液体培养基中的生长情况
混浊生长（大多数细菌）
沉淀生长（链球菌）
菌膜
膜样生长（专性需氧菌，
对照 如结核分枝杆菌）
菌沉淀
均匀浑浊
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操作内容
1. 平板分区划线法。 2. 斜面培养基的接种方法。 3. 半固体培养基穿刺接种法。 4. 液体培养基的接种方法。
第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线 约占面积的1/4 ～ 1/5。
划线为连续划线,不能间断。应占满平皿。划线 不能交叉重复。
每次划完后应灭菌。
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2.斜面接种法
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3.液体培养基接种法 4.半固体培养基穿刺接种法
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四、细菌生长现象的观察
1.固体培养基-菌落
单个细菌分裂繁殖形成一堆肉眼可见的细菌集团。 观察菌落的形态、大小、表面、边缘、湿度、透明度； 在血平板上还要观察溶血情况和色素等。
医学微生物学实验
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内容提要
一. 实验室生物安全 二. 细菌的接种方法 三. 革兰染色
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实验目的
1.通过介绍实验室生物安全方面的相关知 识，树立“有菌的意识，无菌操作的观念” 。
2.掌握革兰染色方法和细菌接种技术。 3.观察细菌的特殊结构。
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一.实验室生物安全
医学实验室的主要危害源包括哪些?
生物危害源 化学危害源 物理危害源
二.无菌操作技术
实验目的
1. 掌握常用的细菌接种方法 2. 熟悉细菌生长现象的观察方法
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一、培养基
概念：是人工配制的专供微生物生长繁殖的 混合营养物制品。
成分：充足的营养物质（水分、碳源、氮源、 无机盐）；合适的PH；适宜的温度；适宜的气体环 境。
用途：用于微生物的繁殖及分离接种，传代 或保存，鉴别微生物的类属，研究微生物的生理及 生化特性等。
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一.实验室生物安全
例三：2010年12月东北农业大学 “羊活体解剖学实
验”，共5个班级28人感染布鲁氏菌病。采购人均 未要求养殖场出具检疫合格证明，断定未经检验的 这4只山羊带有布鲁氏菌。此外，导致此次感染的 原因还有:未能切实按照实验规范，严格要求学生 遵守操作章程，进行有效防护。
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一.实验室生物安全
G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚且交联 度高，脂质含量少，乙醇不易渗入。
G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄且交联度 低，含大量脂质，乙醇易渗入。
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等电点学说
G+菌等电点（pI 2~3） G-菌等电点（pI 4~5）
严禁在实验室进食、饮水和喧哗打闹。 手拿培养物后或出实验室前要洗手，必要时用消毒液泡手；
避免有菌材料溅出；破损器材及时处理并报告。 实验过程中避免一切不良的个人习惯；操作中产生的废料要
扔在指定容器内；实验完毕清理台面，值日生严格认真打扫 卫生，关闭水电，门窗，洗手后离开实验室。
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实验室意外紧急处理办法
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二、培养基分类
基础培养基：普通琼脂培养基
按用途分
营养培养基：血液琼脂培养基 选择培养基：S-S培养基 鉴别培养基：双糖铁培养基 厌氧培养基：庖肉培养基
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二、培养基分类
液体培养基：大量繁殖细菌 按物理性状分 固体培养基：分离鉴定细菌
半固体培养基：观察动力及保存菌种
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三、细菌的接种方法
普通固体琼脂培养基接种法
实验室感染的事件曾多次发生，实 验室人员曾为此付出了沉重的代价。 这些感染的主要原因是：防护意识 不强，操作失误，防护条件不足。
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医学微生物学实验室规则
学生进微生物实验室必须穿好工作服，离室需脱下反折，要 经常清洗消毒。
进实验室时随带书包、衣物等与实验无关物品一律存放指定 的储物柜内。