维生素B12含量测定

紫外分光光度法
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• 四、实验内容 • 实验原理：维生素B12分子结构中有共轭体系，具有紫 外吸收，故可采用紫外分光光度法鉴别和测定含量。 • 实验步骤： • 1、取B12贮备液（约25 μg/ml），以蒸馏水做空白液 做光谱图（粗扫描），在278nm，361nm，550nm处 有吸收峰。 • 2、精测：在以上278nm，361nm，550nm波长分别 ±1 范围内测定吸光度（每转换一次波长以水做空白） 记录各最大吸收值。
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• 维生素B12是含钴的有机药物； • 为深红色结晶，又称为红色维生素B12或 氰钴胺； • 是唯一含有主要矿物质的维生素。 • 分子量：1355.38 • 分子式：C63H88CoN14O14P
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一、实验目的： • 1、掌握Uvmini-1240型的使用方法。 • 2、掌握维生素B12注射液的紫外分光光度 法鉴别及含量测定。 • 3、掌握吸收系数法定量测定的计算公式。 • 4、熟悉绘制吸收曲线的一般方法。
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• 二、主要仪器与试药 • 维生素B12注射液、维生素B12对照品 • Mini-1240型紫外-可见分光光度仪、石英比 色皿、50ml容量瓶，5ml 吸量管
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计算公式
• 维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、 550 nm。维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少，吸收 又最强，中国药典2010版规定：以361 nm处吸收峰的比吸 光系数E1%1 cm值（207）为计算含量依据 本品为注射剂
精密仪器，小心！
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• 三、实验准备 • 1. 用标示量0.5mg/ml维生素B12配制贮备液 （样品）：吸量管精密量取2.5ml于50ml容 量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀， 作为贮备液（约25 μg/ml）。 • 2 . 25 μg/ml对照品溶液（实验室提供）
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五、实验结果 1. 鉴别：维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰： 278 nm、361 nm、550 nm。 2. 检查：A361/ A278 应为1.70-1.88， A361/ A550应 为3.15-3.45 。 3. 含量测定： 吸收系数法：利用上述361nm处测定得到的 吸收度，按其吸收系数E1％1cm=207 计算含量及 标示量百分含量。
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仪器的使用方法
开机：打开电源，仪器初始化，约3min完成，然后预热 大约0.5h。 方法菜单： 1，光度值 2，光谱 3，定量 4，选购程序包 5，系统设计 ------------------------------------------------------输入项目号 参数 IC包 文件发送 PC控制
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，采用紫外吸收系数法测定含量，其计算公式为： • 按吸收系数法定量计算： 见P92 C样品（μg/ml）=A361×48.31 C=ECL
A样品 B12含量= ———— × 100% A对照
取对照品测 A361做对照
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• 六、思考题 • 如果取注射液水2ml稀释30倍，在361nm处 测定A值为0.698，试计算注射液每1ml含 B12多少？如果每1ml标示量为1mg，则计 算标示量％
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分析化学实验
药物分析教研室
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P91实验十四 维生素B12注射液 鉴别、检查和含量测定
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1、维生素B12主要来源是动物性食物，存在于动物肝 脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和奶酪中; 2、在吸收时需与钙结合才能有利于人体的机能活动; 3、维生素B12能促进红血球的形成和再生，防止贫血； 4、促进儿童发育；能使脂肪、碳水化合物、蛋白质 适宜地为体内所利用。 5、主要用于治疗恶性贫血，与叶酸合用治疗因抗叶 酸药、脂肪泻等引起的巨幼红细胞性贫血。也用于多 发性神经炎、肝炎、肝硬化、白细胞减少症等的辅助 治疗，目前疗效有争议。口服维生素B12仅用于已证 实维生素B12吸收正常的营养性维生素B12缺乏。