维生素B12含量测定
实践四、维生素B12的含量测定
笃学求真 懿德善能
三、实验原理
结构特点：含钴的卟啉类化合物 临床用途：控制恶性贫血 性状：红色晶体物质
在361nm有最大吸收。 可以采用紫外分光光度法测 定含量。
笃学求真 懿德善能
三、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验原理
吸光系数法
1、配制待测溶液，计算配制浓度的百分浓度Cx；
2、以溶剂作为空白参比，测定待测溶液的吸光度Ax；
3
笃学求真 懿德善能
数据处理
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
E1% 1cm（样） 207
=
Ax
100%
0.0025 207
笃学求真 懿德善能
笃学求真 懿德善能
3、计算待测溶液的吸收系数
E = 1% 1cm（样品）
Ax Cx
4、计算含量
w%
E1% 1cm（样品）
E1% 1cm（标准）
已知E11c%m（标）=207
笃学求真 懿德善能
四、实践步骤
• 1、维生素B12样品溶液的配制：
准备0.5mg/ml 注射液
取5.00ml
定容至100ml
C样
0.5mg/ml 5.00ml 100.00ml
=0.0025g/100ml
• 2、以纯化水为参比，测定样品溶液的吸光度
• 3、计算样品含量
笃学求真 懿德善能
四、实践步骤
• 3、计算样品含量
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
维生素B12含量的测定(实训案例)
维生素B12含量的测定（实训案例）以维生素B12注射液中B12含量的测定为例介绍紫外分光光度法测定维生素B12含量的方法。
2.1.紫外分光光度法的测定原理维生素B12在紫外区278nm、361nm与550nm波长处有最大吸收。
在361nm 波长处的吸收峰干扰因素少，通常以361nm作为测定波长，测定待测溶液的吸光度，用吸光度计算含量。
2.2仪器与试剂752N型紫外－可见分光光度计，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1g/L维生素B12水溶液，维生素B12注射液(市售品)。
3．维生素B12注射液含量测定步骤准确吸取0.50mL维生素B12注射液于10mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度线，摇匀，得到样品稀释液。
然后将样品稀释液置于1cm石英比色皿中，以蒸馏水作为空白，在361nm波长条件下测定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系数为207计算维生素B12标示量的百分含量。
4.结果记录与计算4.1数据记录将所测数据填入下表。
6-2数据记录表4.2.结果计算注射液含量按下式计算。
样品中的维生素B12计算公式：式中 V---样品中维生素B12的含量，mg/mLB12A-----待测溶液的吸光度；-----比色皿的矫正值（吸光度）；AD-----供试样品的稀释倍数；注射液的标示量)，mg/mLW-----样品质量(VB12---吸收系数为207五、注意事项1. 测定过程需避光操作。
2. 在每次测定前，首先应做吸收池配套性试验。
即将同样厚度的4个比色皿都装相同溶液，在所选波长处测定各比色皿的透光率，其最大误差∆T应不大于0.5%。
3. 维生素B12在pH小于3或大于8的强酸或碱性溶液中极易分解，在pH值4.5～5.0弱酸条件下相对稳定，测定时可用乙酸-乙酸钠缓冲溶液调节。
4. 为使比色皿中测定溶液与原溶液的浓度一致，需用原溶液荡洗比色皿2~3次。
5. 比色皿内所盛溶液以超过皿高的2/3为宜。
过满溶液可能溢出，使仪器受损。
维生素B12测定原始记录表
标准溶液名称：维生素B12标准工作液 标准曲线工作液：低浓度0.01ng/mL，高浓度0.020ng/mL
试管号
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
S9
S10
标准曲线工作液浓度ng/mL
0.00
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.08
0.10
维生素B12含量
0.00）
维生素B12含量平均值
p（ng/ml）
试验中维生素B12含量X μg/100g
1
2
3
平均值
A1
B1
C1
D1
A2
B2
C2
D2
检验员：复核人：审核人：
0.00
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.08
0.10
吸光度1
吸光度2
吸光度3
吸光度平均值
标准曲线Y=
样品测定
提取液定容体积V mL；计算公式 p= 曲线查得维生素B12含量/V1；X=p×V×f×100/（m×1000）
序号
试样质量
m（g）
稀释
倍数f
吸取试样
液体积
V1（mL）
吸光度
样品编号
样品名称
检验项目
维生素B12
检验依据
GB5009.285—2022食品中维生素B12含量的测定
检出限
仪器名称
仪器型号
仪器编号
检测起止日期
环境条件
温度 湿度
分析步骤：称取试样_____于250mL灭菌瓶中，用10mL的提取溶液混匀后，加150mL水，摇匀，置于压力灭菌器中121℃水解10min,冷却后用盐酸溶液(1mol/L)调pH至4.5±0.2，转人250mL容量瓶中，定容至刻度。混匀，过滤。移取滤液5mL,加入20mL~30mL水，用氢氧化钠溶液(1mol/L)调pH至6.8±0.2，转入100mL容量瓶中，定容至刻度。根据试样中维生素含量用水对试样提取液进行适当稀释，使稀释后试样提取液中生物素含量在0.01ng/mL~0.02ng/mL范围内。取4支试管，分别加入1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL试样提取液，补水至5.0mL,加入5.0mL维生素B12测定用培养液，混匀。每个梯度做3个平行。取试管分别加人标准使用工作液低浓度0.0mL(未接种空白)、0.0mL(接种空白)、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.00mL、和高浓度3.0mL、4.0mL、5.0mL,补水至5.00mL,相当于标准系列管中维生素B12含量为0.00ng、0.00ng、0.01ng、0.02ng、0.03ng、0.04ng、0.05ng、0.06ng、0.08ng、0.10ng。加5.0mL维生素B12测定用培养液，混匀。每个梯度做3个平行，绘制标准曲线时，以每点均值计算。所有的试管盖上试管帽，放入灭菌釜内，121℃(0.10mPa~0.12mPa)灭菌5min。试管快速冷却至室温，在无菌操作条件下，将接种液转入无菌管，向每支测定管接种50μL测试均菌液，其中标准曲线管中未接种空白和样品空白除外。置于36℃士1℃恒温培养箱中培养19h~20h,直至获得最大混浊度。将培养好的测定管用漩涡混匀器混匀。用厚度为1cm比色杯，于550nm处，以未接种空白管调节透光率为100%或吸光度为0，读出接种空白试管的读数，再以接种空白试验管为空白，调节透光率为100%或吸光度为0，然后依次测定标准系列管、试样系列管吸光值。
维生素b12检测方法标准
维生素b12检测方法标准
维生素B12检测方法标准通常是由专业医学组织或者卫生管理机构制定并推荐的。
常见的维生素B12检测方法包括血清维生素
B12测定、全血维生素B12测定和甲基辛酸测定等。
血清维生素B12测定是最常用的方法，它通过采集静脉血样本，然后在实验室中使用特定的化学试剂来测定血清中维生素B12的浓度。
全血维生素
B12测定则是直接测定全血中的维生素B12含量，通常用于评估维生素B12的储备情况。
甲基辛酸测定是一种新型的维生素B12功能性检测方法，通过测定尿液中的甲基辛酸浓度来评估维生素B12的代谢情况。
这些方法的标准通常包括了样本采集、实验室分析、结果解读和质量控制等方面的详细步骤和要求。
对于样本采集，标准通常会规定使用特定类型的采血管和采血技术，以确保样本的准确性和可靠性。
在实验室分析过程中，标准通常会规定使用特定的仪器设备和试剂，以及严格的操作流程和质量控制措施，以确保测定结果的准确性和可比性。
对于结果解读，标准通常会规定参考范围和异常结果的判定标准，以便医生能够准确诊断患者的维生素B12状况。
此外，标准还会要求实验室具有相应的认证和资质，并且参与
外部质量评估和监测，以确保检测结果的可靠性和准确性。
总的来说，维生素B12检测方法的标准涵盖了从样本采集到结果解读的全过程，旨在确保检测结果的准确性和可靠性，以指导临床诊断和治疗。
维生素B12注射液的含量测定
维生素B12注射液的含量测定维生素B12是人体必需的营养素之一，它参与脂肪代谢、细胞DNA合成以及神经系统功能的维持等重要生理功能。
因此，维生素B12在医药、保健品和食品等领域中得到了广泛应用。
维生素B12注射液是治疗缺乏维生素B12症状的一种有效途径，适用于恶性贫血、营养不良性贫血、神经系统疾病等疾病的治疗。
维生素B12注射液的主要成分为羟基钴胺素，其品质的好坏对治疗效果十分关键。
因此，对于维生素B12注射液中羟基钴胺素含量的准确测定显得尤为重要。
1.实验仪器和试剂（1）分光光度计（2）枸磺酸和磷酸二氢钾混合液（3）硫酸氢钠溶液（4）含有维生素B12的标准品（5）无水氢氧化钠（6）乙醇2.实验方法（1）标准曲线法准备一系列不同浓度的含有维生素B12的标准品溶液，分别为 2、4、6、8 和 10μg/mL。
取相应浓度的标准品溶液 1.0 mL，加入混合溶液 3.0 mL，用 0.1 mol/L 硫酸氢钠溶液调节溶液 pH 值至 4.2 左右。
最后，用 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液稀释至 10 mL，并用分光光度计在 361 nm 波长下测定吸光度。
绘制标准曲线，横坐标为不同浓度的标准品溶液浓度，纵坐标为对应的吸光度值。
利用标准曲线计算样品中维生素B12的含量。
（2）内标法计算维生素B12含量的公式为：维生素B12含量=（样品吸光度-双内标吸光度）/标准曲线斜率。
3.实验注意事项（1）所有试剂应使用纯化和高质量的试剂。
（2）稀释过程要求温度稳定不变，否则会影响结果的准确性。
（3）为确保测定结果准确，对于同一种方法应进行多次实验并取平均值。
总之，维生素B12是人体必需的营养素，维生素B12注射液的含量准确测定对于治疗效果的提高至关重要。
在实验过程中，要严格控制实验基质环境和检测仪器的精准性，以保证测定结果的准确性和可重复性。
维生素B12的定性定量检测
维生素B 12的定性定量检测一、实验目的和要求1. 掌握紫外可见分光光度计的结构及基本操作；2. 掌握吸收曲线的绘制；3. 掌握利用分光光度法进行定性鉴别及定量检测的方法。
二、实验原理维生素B 12的水溶液在278土1nm 、3611土1nm 、550土1nm 三个波长处有较强吸收峰，壁纸根据其吸收光谱的形装和吸收峰的吸光度比值，可对维生素B 12进行定性鉴别；采用吸光系数法，测量其在最大吸收波长的吸光度值，可计算样品中维生素B 12的含量。
三、实验步骤 1、溶液配制用加样器移取维生素B 12注射液500μl ，转移至10ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
2、吸光度、透射比及吸收曲线的绘制用1cm 比色皿，以蒸馏水作为参比溶液，测定所配置的维生素B 12溶液在下列各个波长处的吸光度、透射比；在坐标纸上以测定的吸光度为纵坐标，波长为1、定性鉴别根据中国药典规定，维生素B 12的水溶液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值在3.15~3.45之间，表明样品为维生素B 12，即为合格药品。
EE %1nm 550cm 1%1)nm 361cm 1）（（=AA nm 550nm 360）（）（=136.0467.0=3.432、定量检测根据浓度25μg/ml 维生素B 12的注射液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值，按照下列计算的维生素B 12注射液含量，结果在90.0~110.0之间，表明维生素B 12注射液含量合格；其中207维生素B 12为在波长的吸收系数，20为稀释因子。
维生素B 12含量=）标示量（ml /g 20207Anm361⨯x100％=100)/(5.020207467.0x ml mg ⨯=90.2五、实验体会1.实验得到的数据偏小，可能是实验过程中存在着误差。
误差可能存在于读数、维生素B12溶液移取过程、比色皿上有污渍水迹及其润洗、分光光度计的操作中。
b12检验项目
b12检验项目
B12检验项目是指对人体血液中的维生素B12浓度进行测试的一项检验项目。
维生素B12是一种水溶性维生素，它在体内
参与DNA合成和红细胞形成，维持神经系统正常运作的重要
物质。
B12检验项目可通过抽取一定量的静脉血样进行，常见的检测
方法有放免法、化学发光法等。
通过检测血液中的维生素B12浓度，可以了解身体是否缺乏维生素B12，以及维生素B12
吸收是否受阻等情况。
维生素B12缺乏可导致巨幼红细胞性贫血、神经系统症状
（如手脚麻木、思维困难等）、口腔炎等。
因此，B12检验项
目常用于确认维生素B12缺乏症的诊断，明确病因进而指导
个体治疗方案。
需要注意的是，B12检验项目只能测量维生素B12在血液中的浓度，不能直接反映维生素B12在细胞内的代谢和利用情况。
因此，在补充维生素B12或进行治疗之前，应该综合考虑病
人的症状、病史、其他检测指标等综合因素，以确定是否需要进行维生素B12补充或治疗。
项目_维生素B12注射液含量测定
7.记录与计算 1.计算供试品的百分含1量0 % 2.计算平均百分含量%
标示量%= 平均百分含量%
8.结果与判定 1.将测得的含量与药典规定值比较，得出 结论。 2.相对偏差均应在±0.5%以内。
相对偏差= 结论：
10
三、实验实施
（一）.使用前仪器的校正和检定
1.波长准确度 1.1 波长准确度的允差范围 紫外-可见分光光度计波长准确 度允许误差，紫外区为±1nm，500nm处±2nm。
品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数 后再计算含量。
37
（通则0401）
37
三、实验实施
（三）. 紫外-可见分光光度计的使用
5.供试品溶液的吸光度值的测定
供试品溶液的浓度，除各品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸 光度以在0.3～0.7之间为宜，吸光度读书在此范围误差较小，并应结合
长加减2nm以内，否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的准确
度。
35
（通则0401） P58
35
三、实验实施
（三）. 紫外-可见分光光度计的使用
5. 供试品溶液的吸光度值的测定
36
36
三、实验实施
（三）. 紫外-可见分光光度计的使用
5. 供试品溶液的吸光度值的测定 关于皿差问题： 由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试
（一）.使用前仪器的校正和检定
表1 分光光度法允差范围
波长 235 257 313 350
吸收强度 最小 最大 最小 最大
吸收系数 E1% 1cm
124.5 144.0 48.6 106.6
允差范围 123.0～126.0 142.8～146.2
47.0～50.3 105.5～108.5
维生素b12含量测定计算公式
维生素b12含量测定计算公式维生素B12是一种重要的水溶性维生素，也称为腺苷钴胺。
它在人体内起着多种关键作用，包括维持神经系统的正常功能、参与红细胞的形成以及维持DNA合成的正常进行等。
因此，准确测定维生素B12的含量对于评估人体健康状态具有重要意义。
测定维生素B12含量的常用方法是通过高效液相色谱法（HPLC）进行分析。
以下是维生素B12含量测定的计算公式：维生素B12含量（μg/100g）=（峰面积样品/峰面积内标品）× 内标品含量（μg/100g）其中，峰面积样品为待测样品中维生素B12的峰面积，峰面积内标品为已知浓度的内标品（通常为氰钴胺）的峰面积，内标品含量为内标品的浓度。
在进行维生素B12含量测定时，需要先准备好样品和内标品，将其分别进行提取和前处理，然后通过HPLC进行分离和定量分析。
具体步骤如下：1. 样品准备：将待测样品（如动物肝脏、蛋黄等）称取适量，加入适量的溶剂（如甲醇、乙腈等）进行提取，使维生素B12溶解在溶剂中。
2. 内标品准备：称取适量的内标品（如氰钴胺），加入适量的溶剂进行提取，使内标品溶解在溶剂中。
3. 前处理：将提取得到的样品和内标品溶液通过滤膜过滤，去除杂质。
4. HPLC分析：将前处理后的样品注入HPLC系统进行分离和定量分析。
在HPLC系统中，使用特定的色谱柱和流动相，通过梯度洗脱和紫外检测器等设备，将样品中的维生素B12和内标品分离，并测定其峰面积。
5. 计算维生素B12含量：根据上述计算公式，利用HPLC分析得到的峰面积数据和内标品的浓度，即可计算出样品中维生素B12的含量。
需要注意的是，维生素B12的测定方法可能因实验室条件和设备不同而略有差异，但基本原理和步骤是相似的。
此外，为了保证测定结果的准确性和可靠性，需要进行空白对照实验、质控样品分析以及仪器校准等措施。
通过HPLC分析方法可以准确测定维生素B12的含量。
这一方法操作简便、准确可靠，对于评估人体健康状况和合理膳食的制定具有重要意义。
项目：维生素B12注射液含量测定
（通则0401） P56
13
三、实验实施
1
2 3 34
在给定波长±2nm处 测样品吸光度，选择 实际最大吸收波长
34
测定波长是多少？
三、实验实施
（三）. 紫外-可见分光光度计的使用 4.确定测定波长
测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰±2nm处，再测几点的
吸光度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大的波长
作为测定波长，除另有规定外吸光度最大波长应在该品种项下规定的波
W样（V样）：
品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数 后再计算含量。
37
（通则0401）
37
三、实验实施
（三）. 紫外-可见分光光度计的使用
5.供试品溶液的吸光度值的测定
供试品溶液的浓度，除各品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸 光度以在0.3～0.7之间为宜，吸光度读书在此范围误差较小，并应结合
维生素B12注射液含量测定
一、 任务依据
【中国药典】2015版 二部 P1236
维生素B12注射液
本品为维生素B12的灭菌水溶液。含维生素B12（ C63H88CoN14O14P）应为标示量的90.0%~110.0%
【含量测定】避光操作。精密量取本品适量，用水定
量稀释成每1mL中约含维生素B12 25μg的溶液，照紫 外-可见分光光度法（通则02401），在361nm的波长处
维生素b12含量测定计算例题
维生素b12含量测定计算例题
维生素 B12 是一种对人体健康非常重要的维生素，其含量的测定在临床实践和营养学研究中具有重要意义。
下面是维生素 B12 含量测定计算的例题:
假设有一段已知重量为 w 克的食物，其中含有维生素 B12 的质量为 q 毫克。
要测定食物中维生素 B12 的含量，需要进行以下步骤:
1. 将食物进行研磨，使维生素 B12 充分分散。
2. 使用灵敏度合适的检测器，测量食物中维生素 B12 的含量。
3. 根据测量结果，计算出食物中含有的维生素 B12 质量，即 q = fid × w，其中 fid 是检测器的灵敏度，单位为毫安/毫克。
根据上述步骤，可以使用以下公式计算食物中维生素 B12 的含量:
维生素 B12 含量 (毫克/克) = q / (0.001 × w)
其中，0.001 是毫安/毫克的单位转换系数。
在实际测定过程中，可能会受到多种因素的影响，例如检测器的灵敏度、食物研磨的精细程度、测量时间等等。
因此，在实际应用中，需要根据具体情况对测定结果进行修正，以确保计算结果的准确性和可靠性。
维生素B12注射液的定性鉴定及含量
气味鉴定
02
03
折射率鉴定
通过嗅觉判断维生素B12注射液 是否有异常气味，如霉味、酸败 味等。
测定维生素B12注射液的折射率， 与标准值进行比较，以确定其纯 度。
化学性质鉴定
酸碱度鉴定
测定维生素B12注射液的酸碱度（pH值），以检查其 是否符合规定范围。
紫外可见光谱鉴定
通过紫外可见光谱法测定维生素B12注射液的吸收光 谱，与标准品进行比较，以确定其成分和含量。
结果准确性评估
通过对比标准品和其他已知值，对实验结果进行准 确性评估。
结果可靠性评估
对实验结果进行可靠性分析，如重复性、再现性等， 以确保结果的可靠性。
04 含量测定结果的分析与解 读
Байду номын сангаас据处理与统计分析
数据清洗
去除异常值、缺失值，确保数据准确性。
统计分析方法
选择合适的统计方法，如t检验、方差分析等，对 数据进行处理。
荧光法
荧光法是一种基于荧光物质与维生素B12相互作用所产生 的荧光特性的测定方法。通过测量荧光信号的强度，可以 间接测定样品中维生素B12的含量。
荧光法的原理是利用荧光物质与维生素B12结合后产生的 荧光信号，该荧光信号的强度与维生素B12的浓度成正比 。通过测量荧光信号的强度，可以得出样品中维生素B12 的含量。
遵循标准的实验操作规程， 确保实验步骤的准确性和 一致性。
实验环境控制
保持实验室内适宜的温度、 湿度和清洁度，以减少环 境因素对实验结果的影响。
实验数据记录
详细记录实验过程和数据， 以便后续分析和处理。
实验结果的质量控制
数据处理方法
采用合适的数据处理方法，如回归分析、统计检验 等，对实验数据进行处理和分析。
VB12
三、测试操作 1．把各被测试样，依次倒入比色皿内，其中 一只存放参比(空白)试样。试样高 度一般为 比色皿高度的2／3—3／4。然后依次(一般参 比放在靠身第一只)平稳地 放入比色架中，并 用夹子把比色皿固定于比色架右边，以防止 比色皿在操作中摇 动，影响测量精度。 2。把比色架，轻轻地放人试样室，使比色 架底部的定位孔与定位滑板上 的定位钉，接通电源后，预热三十分 钟。 2．把光门杆推到底，使光电管不见光。 3. 用波长选择钮选定测试波长。 4.用光电管选择杆选择测试波长所对应的 光电管，625nm以下，选用蓝 敏管(GD-5)， 即选择杆推人， 625nm以上，选用红敏管 (GD-6)；即选择杆拉出。
5．选用钨灯光源时，为减少杂散光影响， 可选用主机上的滤光片。当测试 波长小于 400nm时，可拉出一档，当测试波长大于 590nm时，可拉出二档，这样 可得到较满 意的数据。在一般测试中，可将该拉手推 人。 6．选择适当的比色皿．仪器附件中，备 有在紫外波段使用的lcm石英比色皿(已配 套），一般在350nm以下，选用石英比色 皿。 7.按CE按0％按MODE，即可在显示T值后， 进行测试操作。
四、实验内容
1. 鉴别 取维生素B12注射液样品，按 照其标示含量，精密吸取一定量， 用蒸馏水准确稀释K倍，使稀释液每 毫升含量约为25µg。置lcm石英池中， 以蒸馏水为空白，分别在 (278±1)nm、(361±1)nm与 (550±1)nm波长处，测定吸收度， 由测出数值求：
(1)E1cm1%361和E1cm1%278值 (2) )E1cm1%361和E1cm1%550值 与药典规定值比较，得出结论。 (药典规定：吸收度361nm与吸收度 278nm的比值应为1.70～1.88；吸收 度361nm与吸收度550nm的比值应为 3.15～3.45)。
紫外可见分光光度计维生素B12含量测定
6. 数据处理与结果计算
根据朗伯-比尔定律，利用标准溶液的吸光度值和浓度绘 制标准曲线，再根据待测样品溶液的吸光度值在标准曲线 上查出对应的浓度，从而计算出待测样品中维生素B12的 含量。
02 实验材料与设备
离心机
用于分离待测样品中的维生素 B12，以便进行测量。
实验试剂
抗坏血酸
用于还原维生素B12，提高其在紫 外可见光下的吸收度。
氢氧化钠
用于调节溶液的pH值，确保实验 环境的稳定性。
03 实验步骤
标准溶液的配制
总结词
准备标准溶液，为后续测定提供参考。
详细描述
根据实验要求，准确称取适量的维生素B12标准品，用适宜的溶剂溶解并稀释至所需浓度，制备标准溶液。确保 标准溶液的浓度准确可靠，以保障测定结果的准确性。
标准曲线的绘制
总结词
根据标准溶液的浓度和吸光度绘制标准曲线，为后续样品测定提供依据。
详细描述
根据实验要求，取不同浓度的标准溶液，在选定的波长下测定其吸光度值，绘制标准曲线。标准曲线 应是一条通过原点的直线，用于将样品的吸光度值转化为相应的浓度值。
样品测定
总结词
根据标准曲线和样品的吸光度值，计算样品 的维生素B12含量。
通过紫外可见分光光度计测定，维生 素B12溶液在280nm波长下的吸光 度分别为0.56、0.58、0.57、0.59。
实验结论
根据吸光度和浓度之间的关系，计算 出维生素B12的含量分别为2.30mg/L 、2.42mg/L、2.37mg/L、2.49mg/L 。
结果分析
准确性分析
误差分析
VB12注射液的鉴别及含量测定
VB 12注射液的鉴别及含量测定
一、实验目的
1、掌握紫外-可见分光光度计的使用方法；
2、掌握维生素B 12注射液的鉴别和含量测定的原理和方法；
3、熟悉绘制吸收曲线的一般方法。
二、实验原理
1、鉴别
利用VB 12注射液在361±1nm 、550±1nm 处的特征吸收峰，进行定性鉴别：A 361/A 550=3.15~3.45。
2、含量测定
根据朗伯-比尔定律，用吸光系数法来测定。
对某一确定的物质，在一定波长下，其吸光系数为一定值（可从手册中查得，如VB 12，1%
1,361cm nm E =207），测得溶液吸光度A 后，即可用下式计算浓度：207
100/%
11样
样
）（A l E A mL g C cm =⨯= 将单位换算成（μg/mL ）：31.48100
102076
⨯=⨯=样样A A C 标示百分含量：标示量%=48.31100n A ⨯⨯⨯样标示量
三、实验步骤
1、精密移取VB 12注射液1.00ml 于25ml 容量瓶，以蒸馏水定容；
2、用上述稀释液在250 ~ 600nm 扫描，记录特征峰的波长，详见操作说明；
3、以E 361/E 550的比值做定性鉴别；
4、以最大吸收峰处（361nm ）的吸光度计算VB 12的含量及标示百分含量。
注：VB 12标示百分含量在90.0% ~ 110.0%内均为合格（本实验VB 12标示量：500μg/ml ）。
四、数据处理要求
五、思考题
p98 2，3。
维生素B12含量的测定
实验四维生素B12含量的测定目的要求1、掌握紫外分光光度计的原理和使用方法。
2、熟悉吸光系数法定量分析方法的应用。
重点1、比吸光系数的概念和定量测定方法。
2、比吸光系数与摩尔吸光系数的关系。
难点比吸光系数的定义与定量测定方法及应用。
仪器设备紫外分光光度计、石英比色皿、容量瓶、移液管、纸镜头等。
内容提要1、维生素B12标准溶液的配制（或用标准品）。
3、购置维生素B12注射液或片剂等样品。
4、1%浓度标准品维生素吸光度的测定（1cm比色皿）。
5、1%浓度样品维生素吸光度的测定。
6、分别求得样品和标准品的比吸光系数。
7、将样品的比吸光系数与标准品的比吸光系数值比较，计算出样品的质量百分数。
操作要点1、仪器的准备（校准、预热）2、仪器的操作步骤（讲解示范）。
3、设置波长(361nm)、调零、调满度。
4、测定。
5、数据记录与结果处理。
6、将比色皿洗净装盒，关机。
7、填写仪器使用记录和实验周志。
注意事项1、开启电源，使仪器预热20分钟。
2、开机前，先确认仪器样品室内是否有东西档在光路上（以免影响仪器自检）。
3、若无标准品可采用文献的吸收系数，但不一定可靠，因测定条件不同。
思考题1、本实验是否可用玻璃比色皿？在紫外分光光度计上，还有其它方法能测其含量吗？2、维生素B12在361nm和550nm波长处与最大吸收，其在361nm的吸光度与550nm处的吸光度的比值为3.15-3.45（中国药典），如果要对维生素B12进行定性鉴别，如何操作？3、《中国药典》规定，维生素B12注射液的正常含量应为表示量的90.0%-110%，根据本实验结果判断是否符合要求？并分析误差产生的原因？。
维生素12项检查和微量元素
维生素12项检查和微量元素维生素B12是一种重要的维生素，对人体的健康至关重要。
它在体内参与多种代谢过程，维持神经系统的正常功能，促进红细胞的生成，并对DNA的合成和维持免疫系统的稳定起着重要的作用。
因此，定期进行维生素B12的检查对于保持身体健康非常重要。
维生素B12的检查主要通过血液检验来进行。
下面是常用的几种维生素B12检查方法：1. 血清维生素B12检查：这是最常见的维生素B12检查方法之一，通过采集静脉血液样本，检测血液中的维生素B12含量。
正常人的血清维生素B12水平一般在200-900pg/mL之间。
2. 骨髓维生素B12检查：这是一种较为精确的检测方法，通过骨髓穿刺，检测骨髓中的维生素B12含量。
这种检查方法对于疑似严重缺乏维生素B12的患者非常有帮助。
3. 尿液维生素B12检查：这是一种间接的维生素B12检测方法，通过采集尿液样本，检测尿液中的甲基临床维生素B12含量。
这种方法对于诊断早期维生素B12缺乏症有一定的辅助作用。
除了维生素B12的检查，微量元素的检测也非常重要。
微量元素是人体所需的一类元素，虽然只需以微量摄入，但却对人体的生长发育、代谢和免疫功能起着重要的调节作用。
常见的微量元素检查包括以下几种：1. 血清铁检查：铁是人体内重要的微量元素之一，负责运输氧气和维持红细胞的正常功能。
血清铁检查可以评估一个人体内铁的储存量和供应情况。
2. 血清锌检查：锌是人体内的必需微量元素，参与多种酶的活化和蛋白质合成。
血清锌检查可以评估一个人体内锌的水平，及时发现锌缺乏或过量的情况。
3. 血清铜检查：铜是人体内的必需微量元素之一，参与铜酶的合成和多种代谢过程。
血清铜检查可以评估一个人体内铜的水平，及时发现铜缺乏或过量的情况。
维生素B12和微量元素的检查对于维持身体健康非常重要。
通过定期进行这些检查，可以及时发现并纠正维生素B12和微量元素的不足或过量，以保持身体的正常功能和健康状态。
维生素B12含量测定
检查：A361/ A278 应为， A361/ A550应为3.15-3.45 。
含量测定： 吸收系数法：利用上述361nm处测定得到的吸收度，按其吸收系数E1％1cm=207 计算含量及标示量百分含量。
01
03
单击此处添加副标题
药物分析教研室
分析化学实验
单击此处添加副标题
202X
维生素B12注射液 鉴别、检查和含量测定
维生素B12主要来源是动物性食物，存在于动物肝脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和奶酪中;
在吸收时需与钙结合才能有利于人体的机能活动;
维生素B12能促进红血球的形成和再生，防止贫血；
1
2
3
4
5
主要用于治疗恶性贫血，与叶酸合用治疗因抗叶酸药、脂肪泻等引起的巨幼红细胞性贫血。也用于多发性神经炎、肝炎、肝硬化、白细胞减少症等的辅助治疗，目前疗效有争议。口服维生素B12仅用于已证实维生素B12吸收正常的营养性维生素B12缺乏。
实验步骤：
取B12贮备液（约25 μg/ml），以蒸馏水做空白液做光谱图（粗扫描），在278nm，361nm，550nm处有吸收峰。
精测：在以上278nm，361nm，550nm波长分别±1 范围内测定吸光度（每转换一次波长以水做空白）记录各最大吸收值。
仪器的使用方法 开机：打开电源，仪器初始化，约3min完成，然后预热大约0.5h。 方法菜单： 1，光度值 2，光谱 3，定量 4，选购程序包 5，系统设计 ------------------------------------------------------- 输入项目号 参数 IC包 文件发送 PC控制
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
仪器的使用方法
开机：打开电源，仪器初始化，约3min完成，然后预热 大约0.5h。 方法菜单： 1，光度值 2，光谱 3，定量 4，选购程序包 5，系统设计 ------------------------------------------------------输入项目号 参数 IC包 文件发送 PC控制
，采用紫外吸收系数法测定含量，其计算公式为： • 按吸收系数法定量计算： 见P92 C样品（μg/ml）=A361×48.31 C=ECL
A样品 B12含量= ———— × 100% A对照
取对照品测 A361做对照
紫外分光光度法
PHARMACEUTICAL COLLEGE
• 六、思考题 • 如果取注射液水2ml稀释30倍，在361nm处 测定A值为0.698，试计算注射液每1ml含 B12多少？如果每1ml标示量为1mg，则计 算标示量％
紫外分光光度法
PHARMACEUTICAL COLLEGE
• 维生素B12是含钴的有机药物； • 为深红色结晶，又称为红色维生素B12或 氰钴胺； • 是唯一含有主要矿物质的维生素。 • 分子量：1355.38 • 分子式：C63H88CoN14O14P
紫外分光光度法
PHARMACEUTICAL COLLEGE
一、实验目的： • 1、掌握Uvmini-1240型的使用方法。 • 2、掌握维生素B12注射液的紫外分光光度 法鉴别及含量测定。 • 3、掌握吸收系数法定量测定的计算公式。 • 4、熟悉绘制吸收曲线的一般方法。
紫外分光光度法
PHARMACEUTICAL COLLEGE
• 二、主要仪器与试药 • 维生素B12注射液、维生素B12对照品 • Mini-1240型紫外-可见分光光度仪、石英比 色皿、50ml容量瓶，5ml 吸量管
PHARMACEUTICAL COLLEGE
分析化学实验
药物分析教研室
紫外分光光度法
PHARMACEUTICAL COLLEGE
P91实验十四 维生素B12注射液 鉴别ACEUTICAL COLLEGE
1、维生素B12主要来源是动物性食物，存在于动物肝 脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和奶酪中; 2、在吸收时需与钙结合才能有利于人体的机能活动; 3、维生素B12能促进红血球的形成和再生，防止贫血； 4、促进儿童发育；能使脂肪、碳水化合物、蛋白质 适宜地为体内所利用。 5、主要用于治疗恶性贫血，与叶酸合用治疗因抗叶 酸药、脂肪泻等引起的巨幼红细胞性贫血。也用于多 发性神经炎、肝炎、肝硬化、白细胞减少症等的辅助 治疗，目前疗效有争议。口服维生素B12仅用于已证 实维生素B12吸收正常的营养性维生素B12缺乏。
精密仪器，小心！
紫外分光光度法
PHARMACEUTICAL COLLEGE
• 三、实验准备 • 1. 用标示量0.5mg/ml维生素B12配制贮备液 （样品）：吸量管精密量取2.5ml于50ml容 量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀， 作为贮备液（约25 μg/ml）。 • 2 . 25 μg/ml对照品溶液（实验室提供）
PHARMACEUTICAL COLLEGE
五、实验结果 1. 鉴别：维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰： 278 nm、361 nm、550 nm。 2. 检查：A361/ A278 应为1.70-1.88， A361/ A550应 为3.15-3.45 。 3. 含量测定： 吸收系数法：利用上述361nm处测定得到的 吸收度，按其吸收系数E1％1cm=207 计算含量及 标示量百分含量。
紫外分光光度法
PHARMACEUTICAL COLLEGE
• 四、实验内容 • 实验原理：维生素B12分子结构中有共轭体系，具有紫 外吸收，故可采用紫外分光光度法鉴别和测定含量。 • 实验步骤： • 1、取B12贮备液（约25 μg/ml），以蒸馏水做空白液 做光谱图（粗扫描），在278nm，361nm，550nm处 有吸收峰。 • 2、精测：在以上278nm，361nm，550nm波长分别 ±1 范围内测定吸光度（每转换一次波长以水做空白） 记录各最大吸收值。
紫外分光光度法
PHARMACEUTICAL COLLEGE
计算公式
• 维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、 550 nm。维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少，吸收 又最强，中国药典2010版规定：以361 nm处吸收峰的比吸 光系数E1%1 cm值（207）为计算含量依据 本品为注射剂
紫外分光光度法