菠菜中草酸的测定

菠菜中草酸的提取及含量测定

、实验目的

1.学会沉淀法提取操作，进一步熟悉过滤，离心，提取等操作,

掌握均匀沉淀法的原理。

2.学习文献资料的查询方法，学会制作实验方案，综合运用各种分

析方法解决实际问题。

3.学习食品采样方法，综合分析菠菜中草酸的含量分布情况。

二、实验原理

草酸是一种二元羧酸，是植物体内普遍存在的一种组分，在菠菜、苋菜、生菜等许多蔬菜作物体内都有较高的含量。从环境毒理学和食品营养学角度看，草酸在蔬菜作物可食部位的大量累积会影响到人类的身体健康•本实验采取灵敏度较高的比色法测菠菜中草酸含量。采用722型分光光度计测定，Fe在pH值1.8~2.5的KCL-HCL缓冲液中与磺基水杨酸（SSAL ）和草酸均生成络合物，Fe3+和草酸的络合

物能使与Fe3+磺基水杨酸的紫色络合物颜色变浅，测定Fe3+的磺基

水杨酸络合物的吸光度，随着草酸量的增加而降低，据此可计出样品中草酸根的含量。

三、仪器和试剂

仪器部分：榨汁机，722型分光光度计，水浴锅，电子天平，台秤，100mL容量瓶3个，250mL容量瓶4个，200mL烧杯2个,

500mL烧杯2个，离心机及离心管，长颈漏斗，铁架台，滤纸。试

剂部分：新鲜菠菜，磺基水杨酸（分析纯）（S）, FeCL（s），草酸钠（s），

KCL （s）, 12mol/L浓盐酸，0.5mol/L稀盐酸，去离子水，pH试纸。

四、实验步骤

1.铁标准液的制备（0.5mg/mL）:称取0.4gFeCI3于500mL烧杯

中，加入250mL去离子水溶解。

2.磺基水杨酸（SSAL）的配制（0.5%）：称取0.5g磺基水杨酸（分

析纯）于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。

3.草酸钠标准液的配制（2mg/mL）:称取0.2000g草酸钠于200mL

烧杯中，加入去离子水，稍加热，使其溶解，移入100mL容量中,

用去离子水定容。

4.缓冲液的配制（pH值2）:称取3.7g左右KCL于500mL烧杯中,

加入去离子水少量，在水浴锅上微热溶解，加12mol/L浓盐酸用pH

试纸使pH值为2，移入250mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度。

5.草酸的待测液制备：将菠菜在去离子水中洗涤2次，晾干。称取

菠菜可食部位100g，加入100ml水，压榨2—3min，每2g匀浆折算为

1g试样，称取1份匀浆50g，用100mL水洗入250mL容量瓶, 加入0.5mL 浓度为0.5mol/L的HCL溶液，澄清，置于70~80度水浴上加热30min，其间摇动数次，取出冷却，加水至刻度，摇匀过滤, 将滤液经10000r/min 离心10min，得到的即是草酸待测液。

6.比色法测定菠菜中草酸含量的条件研究

该最大吸收波长即为测定时所要选择的最佳波长508nm。

标准曲线的制作按照以上确定的条件，按下列顺序:

加液：2mLFe3+，20mL缓冲液，1.2mL磺基水杨酸，从容量瓶中

依次取出已经配制的草酸钠溶液体积为：0、0.1、0.2、0.4、0.8mL , 再用蒸馏水定容至lOOmL容量瓶中，显色30min后，以蒸馏水为参比液，在508nm波长处进行比色测定。根据测定结果，绘制草酸含量的标

准曲线，通过计算机拟合，获得该标准曲线A关于x的方程。

其中式中，x为显色体系的草酸的质量浓度（mg/mL），A为吸光度。7.菠菜中的待测液中草酸含量的测定：用菠菜待测液替代草酸根溶

液，依次取0，0.2,0.4,0.6mL用蒸馏水定容至100mL容量瓶中。显色30min后，以蒸馏水为参比液，在510nm波长处进行比色测定,

其余按照制作标准曲线同样的方法，进行显色反应，并测定其吸光度, 填入表下中。根据标准曲线方程，计算待测液中草酸含量。

五、注意事项：

1 .比色实验的选择：在显色30min后进行比较合适。

2 .在比色测定时，都是要以蒸馏水为参比溶液注意不能用1号溶液作为参比。

3 .加液时要按顺序加入，分光光度计使用之前要预热。

4 .用标准曲线法测草酸含量时注意草酸的浓度要在限行范围内。

5 .要使吸光度控制在0.05至0.8，这样才能提高准确度。

6 .为了使草酸提取完全，应将菠菜的榨汁在70—80 C下水浴加热。