酶的竞争性抑制作用
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一、实验目的
1、通过实验证明组织中存在琥珀酸脱氢酶 2. 验证丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂
* 竞争性抑制的特点 (1) I 与 S结构类似，竞争酶的活性中心 (2) E 既可以结合 S 也可以结合 I, 但是不能同时结 合两者 (3) I 与 E的活性中心结合后, E 分子失去催化活性 (4) 抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力及 底物浓度
放于组织捣碎机中充分捣碎，过滤备用。
2、按表操作 配制琥珀酸脱氢酶的催化作用及其可逆性抑制反 应体系
试剂（滴） 管号 1
1.5% 1% 琥珀酸钠 丙二酸钠
10 —
蒸馏水
肝匀浆液
0.02% 亚甲蓝
10
20
10
2
10
10
10
10 —
10
3
10
10
20 —
10
4
20
10
பைடு நூலகம்
10
10
将各管混匀，加少量液体石蜡封盖液面，隔绝空气。然后把
二、实验原理 竞争性抑制作用
琥珀酸在琥珀酸脱氢酶催化下脱氢生成延
胡索酸，脱下的氢被受氢体接受。本实验 用亚甲蓝（MB）作为受氢体，蓝色亚甲蓝 接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色的 甲烯白（MBH2）。
COOH CH2 CH2 COOH
琥珀酸 亚甲蓝（蓝色）
COOH + MB
琥珀酸脱氢酶 丙二酸（-）
CH CH COOH
延胡索酸
+
MBH 2
还原性亚甲蓝（无色）
丙二酸与琥珀酸分子结构相似，能竞争
性抑制琥珀酸脱氢酶。通过观察在由不
同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体
系中使等量亚甲蓝退色的程度，从而鉴
定丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用和
抑制程度。
当抑制剂浓度较低时
随着抑制剂浓度的增高
当抑制剂浓度高达一定程度
各管置于37℃水浴箱中保温10-15分钟，随时观察各管的颜
色变化并记录结果。
管 号
1 2 3 4
七、注意事项
1、加试剂前一定要将试管清洗干净
2、加入液体石蜡后就不要再摇动试管。避免 空气中的氧接触反应溶液，使得还原型的甲 烯白重新氧化成蓝色 3、37℃水浴保温过程中，要注意随时观察各 试管的褪色情况
六、实验结果
管 号
1 2 3 4
六、思考题
1、解释各管颜色变化的原因 2、本实验中液体石蜡起什么作用？ 3、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动? 4、制备肝匀浆时用磷酸盐缓冲液，可否换用蒸 馏水，为什么？ 5、举例你所学过的以竞争性抑制为作用机制的
临床药物，阐述其发挥药效的生化机理。
三、实验器材
1、组织捣碎机 2、试管 3、试管架 4、滴管 5、恒温水浴箱
四、实验试剂: 1、0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4） 2、1.5% 琥珀酸钠溶液
3、1% 丙二酸钠溶液
4、0.02% 亚甲蓝溶液 5、液状石蜡
五、实验方法
1、匀浆液的制备 新鲜家兔肝脏洗净表面血液，剪去筋膜，称重。 按20%的浓度加入pH 7.4的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液，
1、通过实验证明组织中存在琥珀酸脱氢酶 2. 验证丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂
* 竞争性抑制的特点 (1) I 与 S结构类似，竞争酶的活性中心 (2) E 既可以结合 S 也可以结合 I, 但是不能同时结 合两者 (3) I 与 E的活性中心结合后, E 分子失去催化活性 (4) 抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力及 底物浓度
放于组织捣碎机中充分捣碎，过滤备用。
2、按表操作 配制琥珀酸脱氢酶的催化作用及其可逆性抑制反 应体系
试剂（滴） 管号 1
1.5% 1% 琥珀酸钠 丙二酸钠
10 —
蒸馏水
肝匀浆液
0.02% 亚甲蓝
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20 —
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4
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பைடு நூலகம்
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将各管混匀，加少量液体石蜡封盖液面，隔绝空气。然后把
二、实验原理 竞争性抑制作用
琥珀酸在琥珀酸脱氢酶催化下脱氢生成延
胡索酸，脱下的氢被受氢体接受。本实验 用亚甲蓝（MB）作为受氢体，蓝色亚甲蓝 接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色的 甲烯白（MBH2）。
COOH CH2 CH2 COOH
琥珀酸 亚甲蓝（蓝色）
COOH + MB
琥珀酸脱氢酶 丙二酸（-）
CH CH COOH
延胡索酸
+
MBH 2
还原性亚甲蓝（无色）
丙二酸与琥珀酸分子结构相似，能竞争
性抑制琥珀酸脱氢酶。通过观察在由不
同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体
系中使等量亚甲蓝退色的程度，从而鉴
定丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用和
抑制程度。
当抑制剂浓度较低时
随着抑制剂浓度的增高
当抑制剂浓度高达一定程度
各管置于37℃水浴箱中保温10-15分钟，随时观察各管的颜
色变化并记录结果。
管 号
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七、注意事项
1、加试剂前一定要将试管清洗干净
2、加入液体石蜡后就不要再摇动试管。避免 空气中的氧接触反应溶液，使得还原型的甲 烯白重新氧化成蓝色 3、37℃水浴保温过程中，要注意随时观察各 试管的褪色情况
六、实验结果
管 号
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六、思考题
1、解释各管颜色变化的原因 2、本实验中液体石蜡起什么作用？ 3、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动? 4、制备肝匀浆时用磷酸盐缓冲液，可否换用蒸 馏水，为什么？ 5、举例你所学过的以竞争性抑制为作用机制的
临床药物，阐述其发挥药效的生化机理。
三、实验器材
1、组织捣碎机 2、试管 3、试管架 4、滴管 5、恒温水浴箱
四、实验试剂: 1、0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4） 2、1.5% 琥珀酸钠溶液
3、1% 丙二酸钠溶液
4、0.02% 亚甲蓝溶液 5、液状石蜡
五、实验方法
1、匀浆液的制备 新鲜家兔肝脏洗净表面血液，剪去筋膜，称重。 按20%的浓度加入pH 7.4的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液，