环境水体中亚硝态氮、硝态氮和总氮的液相色谱测定

环境水体中亚硝态氮、硝态氮和总氮的液相色谱测定
摘要：建立了环境水体中NO-
2；、NO-
3
；及总氮含量的液相色谱测定方法。

采用Hypersil ODS(5um，
250 mm×4．6 mm id．)色谱柱；流动相：17．5 mmoL／L KH2P04—2 mmol／L H3P04缓冲液(pH 3．5)一乙腈(体积比92．5：7．5)；流速：0．8 mL／min；柱温：30 oC；紫外检测器：
波长204 nm。

结果表明：水体中NO-
2；、NO-
3
的线性范围(以N计)：1～80 ng，r=0．999 9；方
法检出限：NO-
2 0．4 ng、NO-
3
0．09 ng ,回收率为NO-
2
99．2％～102．4％、NO-
3
98．7％一
99．3％，RSD为0．79％和0．25％。

关键词：高效液相色谱法；环境水样；亚硝酸盐；硝酸盐；总氮
NO-
2；、NO-
3、
及总氮已列入环境水体的必检项目，建立环境水体中NO-
2
；、NO-
3
及总氮的新型、快
速、准确检测方法显得极其重要。

目前，同时测定亚硝酸盐和硝酸盐的方法主要采用化学发光法、硝酸银电极法、流动注射光度法、二元线性解析一紫外分光光度法及离子色谱法等。

这些方法各有优缺点，其中离子色谱法已经被我国列入生活饮用水中NO-
2和NO-
3
检验规范方法
之一。

离子色谱法的采用，改善了NO-
2和NO-
3，
检测方法的灵敏度，但不普及。

迄今为止，使用
高效液相色谱法测定NO-
2和NO-
3
的文献报道很少。

文献姜华、何荣桓等利用高效液相反相离子
对色谱法成功分离并测定了水体中的NO-
2和NO-
3
含量。

本文采用磷酸盐缓冲体系为流动相，建
立了操作简便、准确可靠、灵敏度高且适用于环境水中NO-
2、NO-
3
和总氮检测的高效液相色谱
法。

1 实验部分
1．1仪器与试剂
海能LC7000高效液相色谱仪，配LC7020紫外/可见检测器(海能仪器公司)；Hanon-Clarity色谱工作站色谱数据处理系统(海能仪器公司)；手提式压力蒸汽消毒器(上海仪器厂)。

亚硝酸钠、硝酸钾、磷酸、氢氧化钠和过二硫酸钾均为分析纯；磷酸二氢钾为pH缓冲标准物质；
乙腈为色谱纯；100 mg／L NO-
2标准样品、500 mg／L NO-
3
一N总氮标准样品、(12．275 4±1．55)mg
／L TN标准控制样品，均为国家环保总局标样所标样。

．
1．75 mol／L KH
2P0
4
—0．2 mol／L H
3
PO
4。

缓冲液：将缓冲液稀释100倍(内加体积分数为7．5％
的乙腈)作为流动相；用亚硝酸钠、硝酸钾配制各含100 mg／LNO-
2-N、NO-
2
-N混合标准储备溶
液，再逐级稀释为混合标准工作液；50 g／L碱性K
2S
2
O
8
溶液；环境标样根据实验需要做稀释
处理。

1．2 色谱条件
Hypersil ODS色谱柱，5um，250 mm x4．6 mm id．(大连依利特科学仪器公司)。

柱温为30℃，泵压2．94 MPa，灵敏度为0．04 AUFS，检测波长为204 nm，流速0．8 mL／min，进样体积l0ul；
流动相：17．5 mmol／L KH
2PO
4
一2 mmol／L H
3
P0
4
缓冲液(pH 3．5)与乙腈体积比为92．5：7．5，
使用前过滤并超声脱气。

1．3实验方法
每100 mL环境水样加1 mL缓冲液至酸性，过0．45um滤膜，直接进样10uL测定NO-
2；、NO-
3
按照
水质总氮测定分析方法处理水样，用HPLC法测定。

采集相同环境水样，按上述GB 11894—89消煮法消解水样后，比色法测定总氮；比色分析水
样中NO-
2；、NO-
3
时，按GB／T 5750—2001《生活饮用水卫生规范》处理，若水样浑浊或色度较
深，在100 mL水样中加2 mL氢氧化铝悬浮液，搅拌后静置数分钟，过滤(水样澄清不必经过此
处理)。

分取水样或处理后的水样用酸或碱调节至中性，用重氮偶合分光光度法测定NO-
2-
N；另外分取水样或处理后的水样加适量硫酸银一硫酸溶液(10 g／I．)，混匀，静置5 min，滴
加高锰酸钾溶液至淡红色保持15min不褪色后，用麝香草酚分光光度法测定NO-
3-
N(注：应扣除
水样中的NO-
2
-N)。

2结果与讨论
2．1 HPLC法分离、检测NO-
2和NO-
3
采用上述实验条件可完全分离、检测NO-
2和NO-
3
，分离度大于1．5，分离效果见图1A。

混合标
准溶液4℃低温储存2—3周后，再次测定标液NO-
2和NO-
3
含量、保留时间。

结果表明：NO-
2
和NO-
3
含量基本无变化；日问保留时间波动小，NO-
2(2．326±0．016 min)、NO-
3
(3．105±0．026 min)。