实验二抑制剂对酶促反应速度的影响 (1)

实验二抑制剂对酶促反应速度的影响Effects of Inhibitors on the Velocity of Enzymatic Reactions

一、实验原理

凡能降低酶活性甚至使酶丧失活性的物质，称为酶的抑制剂。酶的特异性抑制剂可分为可逆性和不可逆性两类。可逆性抑制剂又可分为竞争性和非竞争性两类。竞争性抑制剂的作用特点是该酶的Km值增大，但最大的反应速率不变，而非竞争性抑制剂的作用特点是不影响底物与酶结合，故其Km值不变，而能降低其最大反应速度。

本实验中观察无机磷酸盐对碱性磷酸酶的抑制作用，用磷酸苯二钠法测酶活性，使各管底物浓度不同，其他条件相同，除各管都加有同样量Na2HPO4外，实验操作完全同前一实验。计算结果，画出曲线，判定Na2HPO4对碱性磷酸酶的影响。

二、实验操作

管号 1 2 3 4 5 6 S B 0.04mol/L基质液（mL）0.10 0.20 0.30 0.40 0.80 1.00

水（mL） 1.30 1.20 1.10 1.00 0.60 0.40 1.50 1.40 0.04mol/L Na2HPO4 (mL) 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 —0.10 碳酸盐缓冲液含（AAP）(mL) 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50

摇匀，37℃保温5min

酶液（mL）0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 —0.10 酚标准应用液（mL）——————0.10 —

充分摇匀，37℃准确保温15min

0.5%铁氰化钾（mL） 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00

充分摇匀，室温放置10min

在510nm，以B管调零时读取各管光密度值。

计算并作图要领同实验一，求出Km值，判定结果，Na2HPO4属于哪种抑制剂。

三、思考题

联系实验结果，讨论抑制剂对酶活性的影响。

四、英语关键词

最大反应速度：Maximum velocity

米—曼式方程：Michaelis—Menten Equation

特性常数：Characteristic constant

绘图：Plot

直线：Straight Line

截距：Intercept

斜率：Slope

磷酸苯二钠：Disodium Phenylphosphate

4-氨基安替比林：4-Aminoantipyrine