水质粪大肠菌群的测定

11 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：
• 按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。 除蒸馏水外，各组分用量增加至三倍。 （即按上述配方比例三倍（除蒸馏水外）， 配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液）
12 EC培养液：
• 成分： 胰胨 20克， 乳糖 5克， 胆盐三号 1.5克，磷酸氢二钾（K2HPO4）4克，磷酸 二氢钾（KH2PO4）1.5克，氯化钠5克，蒸 馏水1000毫升。 • 制法：将上述成分加热溶解，然后分装于 含有 玻璃倒管的试管中。置高压蒸气灭菌 器中，115℃高压灭菌器中灭菌20min，灭 菌后pH应为6.9。
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• 培养液的浓度和量的选择：
• 如接种体积为10 ml，则试管内应装有三倍 浓度乳糖蛋白胨培养液5mL；如接种量为 1mL或少于1mL，则可接种普通浓度的乳糖 蛋白胨培养液10mL中。
16 2. 初发酵试验
将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨 培养液的发酵管中。在 37℃±0.5℃下培养24h±2h。产 酸和产气的发酵管表明试验阳性。 入在倒管内产气不明显，可轻拍试 管，有小气泡升起的为阳性。
26 思考题
• 配制好的培养基保存多少时间？存放时应 注意哪些事项？
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• 答：配制好的培养基不宜保存过久，以少 量勤配为宜。已灭菌的培养基可在4—100C 存放一个月。存放时应避免阳光直射，并 且避免杂菌侵入和液体蒸发。
28 填空题
0C 1. 细菌采样玻璃瓶洗涤干燥后，要在 0C灭菌 干热灭菌 或高压蒸汽 min。 • 2. 对受污染严重的水体，可选择 方法 测定其总大肠菌群数。 • 3. 总大肠菌群测定过程的复发酵试验中， 0C温 接种完菌落后，应将发酵管置于 度下培养 h。 • 4. 复发酵试验使用 培养基。
2 水中微生物简介
• 自然界的水可分为地下水和地面水，除了 地下深层水外，如湖泊，河流，海洋等各 种地面水中都存在着各种各样的微生物。 但它们所含的微生物种类，数量和分布都 不相同。其中有些是“土生土长”的。另 一些水生细菌是外来的，它们来自土壤， 空气，垃圾，工厂废物或城市下水道污水。 而来自下水道的微生物中，很可能含有人 体肠道致病菌，例如霍乱，伤寒，副伤寒 和痢疾等病原菌。
13 培养基的存放
•
在密封瓶中的脱水培养基成品要存放 在大气湿度低，温度低于30摄氏度的 暗处，存放时应避免阳光直接照射， 并且要避免杂菌倾入和液体蒸发。当 培养液颜色变化，或体积变化明显时 应废弃不用。
14 测定步骤
• 1. 水样接种量的选择 • 将水样充分混匀后，根据水样污染的程度 确定水样接种量。每个样品至少用三个不 同的水样量接种。同一接种水样量要有五 管。 • 相对未受污染的水样接种量为10ml、1 ml、 0.1 ml。受污染水样接种量根据污染程度接 种1 ml、0.1 ml、0.01 ml、或0.1 ml、 0.01 ml、0.001 ml等。
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举例：
• 某水样接种10mL 的5 管均为阳性；接种 1mL 的5 管中有2 管为阳性；接种1：10 的 水样1mL 的5 管均为阴性。从最可能数 （MPN）表中查检验结果5-2-0，得知 100mL 水样中的总大肠菌群数为49 个，故 1L 水样中的总大肠菌群数为49×10=490 个。
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4 污水的细菌学检验
•
Fra Baidu bibliotek
水质的细菌学检验主要包括两个 常规项目：细菌总数和总大肠菌群。
5 总大肠菌群测定的两种方法
• 多管发酵法 • 滤膜法
6 粪大肠菌群的定义
• 粪大肠菌群是总大肠菌群的一部分，主要 来自粪便。在44.5℃温度下能生长并发酵乳 糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。 用提高培养温度的方法，造成不利于来自 自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养 出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群， 从而更准确地反映出水质受粪便污染的情 况。
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• 计算题： • 某水样接种10mL 的5 管中有4管 为阳性；接种1mL 的5 管中有3 管 为阳性；接种1：10 的水样1mL 的5 管中有1管为阳性。求1L 水样 中的总大肠菌群数为多少？
7 适用范围
• 本标准适用于地表水，地下水 及废水中粪大肠菌群的测定。
8 原理
• 多管发酵法是以最可能数（most probable number），简称MPN 来表示试验结果的。实际 上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌 密度和卫生质量的一种方法。如果从理论上考虑， 并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有 大于实际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管 重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含 量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显 示阴性的稀释度。因此在实验设计上，水样检验 所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度 而定。
9 培养基及试剂
• 本标准所用试剂除另有说明，均为符合国 家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新 制备的去离子水。
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单倍乳糖蛋白胨培养液：
• 将10g 蛋白胨、3g 牛肉寖膏、5g 乳糖和5g 氯化钠加热溶解于1000mL 蒸馏水中，调节 溶液pH 为7.2—7.4，再加入1.6%溴甲酚紫 乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管中， 于115℃高压灭菌器中灭菌20min，贮存于 冷暗处备用。
17 注意：
• 加入水样时，先将培养管管口用酒 精灯消毒一次，加入水样后再用酒 精灯消毒一次，封口。
18 • 阳性的判别：既产酸又产气： • 观察：24h小时后取出观察培养 管，颜色由紫色变为黄色和有 气泡产生两个方面才能判为阳 性
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3. 复发酵试验
• 轻微震荡初发酵试验阳性结果的发酵管， 用3mm接种环或灭菌棒将培养物转移到EC 培养液中。在44.5℃±0.5℃下培养 24h±2h（水浴箱的水面应高于试管中培养 基液面）。接种后所有发酵管必须在30分 钟内放进水浴中。培养后立即观察，发酵 管产气则证实为粪大肠菌群阳性。
20 结果的计算
• 根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果 的数目，从表2或表3中查得每升水样中的 粪大肠菌群。 • 接种水样为100ml 2份，10ml 10份，总量 300ml 时，查表2可得每升水样中粪大肠菌 群； • 接种5份10ml 水样，5份1ml水样，5份 0.1ml水样时，查表3求得MPN指数，MPN 值再乘10，即为1升水样中的粪大肠菌群；
• 如果接种的水样量不是10mL、1mL 和 0.1mL，而是较低或较高的三个浓度的水样 量，也可查表求得MPN 指数，再经下面公 式换算成每100mL 的MPN 值。
表2 大肠菌群检数表
接种水样总量300mL(100mL2份，10mL10份)
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25 注意事项
• • • • • 灭菌 初发酵后以有阴、有阳稀释效果最好。 水样一定要摇均。 每个稀释倍数要求做5管。 接种环要求用酒精灯灼烧消毒，复发酵接 种时每一管都要在酒精灯上灼烧消毒。