(整理)酶联免疫反应常用底物
分子医学练习题
单选题:1.酶联免疫吸附试验间接法的“酶联”意指( )A．酶与酶标反应板相结合B．酶与已知抗原相结合C．酶与已知抗体相结合D．酶与免疫学反应相结合E．酶与抗原抗体复合物相结合2.酶联免疫吸附试验是最常用的一种( )A．免疫荧光技术B．同位素标记技术C．免疫酶技术D．免疫组化技术E．以上都不是3.酶联免疫吸附试验双抗体夹心法一般用于检测( )A．抗原B．抗体C．补体D．酶E．蛋白质4.酶联免疫吸附试验竞争法可以用于检测( )A．抗原B．抗体C．抗原或抗体D．酶E．补体5.若要检测血清中的某种抗体，我们可选择酶联免疫吸附试验的( )A．间接法B．双抗体夹心法C．竞争法D．以上A或C E．以上B或C6.若要检测某种抗原，我们可选择酶联免疫吸附试验的( )A．间接法B．双抗体夹心法C．竞争法D．以上A或C E．以上B或C7.酶联免疫吸附试验双抗体夹心法第一步吸附到酶标反应板上的是( )A．已知抗原B．已知抗体C．已知抗原或抗体D．已知酶标抗体E．已知酶标抗原8.酶联免疫吸附试验间接法第三步吸附到酶标反应板上的是( )A．待测抗原B．待测抗体C．待测抗原或抗体D．待测酶标抗体E．待测酶标抗原9.酶联免疫吸附试验间接法第四步吸附到酶标反应板上的是( )A．已知抗原B．已知抗体C．已知抗原或抗体D．已知酶标二抗E．已知酶标抗原10.酶联免疫吸附试验每步的洗涤非常重要，洗涤的目的主要是( )A．洗去影响实验结果的杂质B．洗去吸附不牢的抗原（或抗体），以及非特异性吸附的抗原（或抗体）C．洗去吸附不牢的抗原（或抗体）D．洗去非特异性吸附的抗原（或抗体）E．洗去与实验反应无关的物质11.酶联免疫吸附试验最常用的酶是( )A．细胞色素氧化酶B．辣根过氧化物酶C．蛋白酶D．核酸酶E．Taq酶12.酶联免疫吸附试验最终酶催化的常用底物是( )A．ODA B．MAC C．TMB D．ABTS E．5-AS13.酶联免疫吸附试验间接法参与反应的免疫学成分包括( )A．一种抗原和两种抗体B．一种抗体和两种抗原C．一种抗原和一种抗体D．一种抗原、一种抗体和补体E．一种抗原、一种抗体和一种酶14.酶联免疫吸附试验间接法检测结果，底物的显色程度( )A．与待测抗体呈反比B．与待测抗体呈正比C．与包被抗原呈反比D．与包被抗原呈反比E．与底物量呈正比15.系统性红斑狼疮可通过酶联免疫吸附试验间接法检测的血清中（）A．抗线粒体抗体B．抗红细胞抗体C．抗甲状腺球蛋白抗体D．类风湿因子E．抗核抗体16.酶联免疫吸附试验间接法底物显色后用于终止反应的物质是( )A．1mol/L H2S04 B．2mol/L H2S04 C．1mol/L HCL D．2mol/L HCL E．以上都不对17.酶联免疫吸附试验间接法用酶标仪测定实验结果时（用TMB做底物），选择的波长为( )A．450nm B．492 nm C．260 nm D．300 nm E．270 nm18.下列关于酶联免疫吸附试验的内容，错误的是( )A．酶联免疫吸附试验是一种常用的免疫酶技术B．将酶催化的高效性和抗原抗体反应的特异性有机的结合在一起C．灵敏度非常高D．测抗体通常选择双抗体夹心法E．参与反应的通常不只一对抗原-抗体系统19.酶联免疫吸附试验双抗体夹心法适用于检测的是( )A．小分子半抗原B．多价抗原C．单体抗体D．聚体抗体E．小分子抗体20.下列关于酶标仪的描述，错误的是( )A．使用酶标仪前必须预热B．酶标仪和分光光度计的原理相同C．使用后直接拔下电源插头D．避免太阳光直射酶标仪E．酶标仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器21.下列物质不能作为免疫标记技术的示踪物质的是( )A．EB B．放射性核素C．酶D．胶体金E．荧光素22.关于如何使用微量加样器的描述错误的是( )A．微量加样器不用时应调到最大值B．使用之前先将其调节至所需的刻度C．取液时应先按下微量加样器按杆至第一阻力处，再吸取液体D．吸尖安装时不可使用手E．加样时不应该将微量加样器按杆按到底23.下列与PCR反应无关的物质是( )A．酶B．引物C．dNTP D．模板DNA E．Ca2+24.决定PCR反应特异性的关键物质是( )A．酶B．引物C．dNTP D．模板DNA E．Ma2+25.用于PCR的引物的适宜长度为( )A．15 bp～30bp B．10 bp～20bp C．20 bp～30bp D．25 bp～50bp E．30 bp～45bp26.用于PCR的引物，其碱基尽可能随机分布，G+C含量不宜过高或过低，其最适宜的比例是( )A．10%～30% B．20%～40% C．30%～50% D．40%～60%E．60%～80%27.决定PCR反应特异性的因素中最关键的是 ( )A．引物与模板DNA特异正确的结合B．碱基配对原则C．Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性D．靶基因的特异性与保守性E．以上都不对28.PCR反应中，若目的DNA长度不足1Kb，延伸的温度与时间宜为( )A．65℃lmin B．65℃2min C．72℃1min D．72℃2min E．94℃lmin29.PCR反应的循环次数一般为( )A．10次～20次B．15次～25次C．25次～35次D．40次～50次E．50次～60次30.理论上PCR过程中反应产物是以指数规模增长的，而实际的PCR扩增曲线呈现( ) A．直线形B．S形C．V形D．U形E．抛物线形31.关于PCR反应体系中Mg2+的描述，正确的是( )A．Mg2+浓度对PCR反应特异性无影响B．Mg2+浓度浓度以1.5mmol/L～2.0mmol/L为宜C．Mg2+浓度过低可降低PCR扩增的特异性D．浓度过高则影响会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少E．以上都不对32.关于PCR反应体系中dNTP的描述，正确的是( )A．4种dNTP浓度差不多即可B．dNTP浓度过低会增加碱基的错误掺入率，使反应特异性下降C．dNTP浓度过高反而会导致反应速度下降D．均衡的dNTP有利于减少错配和提高使用效率E．以上都不对33.关于PCR反应的退火温度与时间的描述，错误的是( )A．退火温度=Tm值（解链温度）-（5℃～10℃）B．复性时间一般为30～60secC．退火温度与时间取决于目的基因的长度D．退火温度太低容易发生引物与模板之间的非特异结合E．退火温度太高不能有效退火34.关于PCR反应的延伸温度与时间的描述，错误的是( )A．延伸常用温度为65℃B．延伸温度过高不利于引物和模板的结合C．延伸时间一般为1min /1KbD．延伸时间过长，会出现非特异性的扩增产物E．对低浓度模板的扩增，延伸时间可以稍长些35.Taq DNA聚合酶酶促反应最适温度是( )A．37℃B．50℃~55℃C．60℃~65℃D．70℃~75℃E．93℃~94℃36.关于PCR反应中引物的描述，错误的是( )A．引物的适宜浓度约为0.1～1mol/LB．引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增C．引物浓度偏高可增加引物之间形成二聚体的机会D．引物应与目的基因以外的其它序列无明显同源性E．引物长度常为20bp左右37.关于PCR反应体系中Mg2+的描述，错误的是( )A．Mg2+浓度比dNTP总浓度高出0.5mmol/L～1.0mmol/L为宜B．Mg2+浓度对PCR反应效率有重要影响C．Mg2+浓度对PCR特异性无影响D．浓度过低则会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少E．Mg2+浓度过高可降低PCR扩增的特异性38.关于PCR反应的延伸温度与时间的描述，错误的是( )A．延伸时间过长，会出现非特异性的扩增产物B．延伸常用温度为72℃C．延伸时间一般为2min /1KbD．延伸温度过高不利于引物和模板的结合E．对低浓度模板的扩增，延伸时间可以稍长些39.可用于PCR反应的酶是 ( )A．HindⅢB．Taq DNA聚合酶C．RNA酶D．大肠杆菌连接酶E．T4连接酶40.关于PCR反应中引物的描述，错误的是( )A．引物的适宜浓度约为0.1μmol/L～1μmol/LB．引物碱基G+C含量以40～60%为宜C．引物浓度偏高可增加引物之间形成二聚体的机会D．引物应与目的基因以外的其它序列无明显同源性E．引物浓度过低会引起错配和非特异性扩增41.核酸在紫外光区的吸收峰是( )A．230nm B．260nm C．280nm D． 300nm E． 495nm42.盐和小分子在紫外光区的吸收峰是( )A．230nm B．260nm C．280nm D． 300nm E． 495nm43.DNA纯品OD260/OD280的值约为( )A．1.6 B．1.8 C．1.9 D． 2.0 E． 1.544.提取DNA后进行光密度检测，若测得OD260/CD280的值为2.0，可能的原因是( ) A．盐或小分子污染B．RNA污染C．蛋白质污染 D．有机溶剂污染E．以上都不对45.提取DNA后进行光密度检测，若测得OD260/CD280的值为1.5，可能的原因是( ) A．DNA降解B．RNA污染C．蛋白质污染 D．盐污染E．其它小分子污染46.核酸在碱性电泳缓冲液中解离的状态是( )A．核酸等电点低于缓冲液pH，故带正电B．核酸等电点低于缓冲液pH，故带负电C．核酸等电点高于缓冲液pH，故带正电D．核酸等电点高于缓冲液pH，故带负电E．核酸等电点等于缓冲液pH，故不带电47.不同核酸分子在琼脂糖凝胶中泳动时出现迁移率的差异，最为主要的原因是( ) A．电荷效应B．浓缩效应C．分子筛效应 D．电压梯度效应E．不连续效应48.下列关于微量移液器的操作，错误的是( )A．先按到第一档，垂直进入液面再缓慢松开B．打出液体时应贴壁并有一定角度C．打出液体时先按到第一档，稍微停顿1s后，待剩余液体聚集后，再按到第二档将剩余液体全部压出D．平放带有残余液体吸头的移液器E．应该垂直吸液，慢吸慢放49.对标准品来说，当OD260=1时，dsDNA的浓度约为( )A．30ug/mL B．37ug/mL C．40ug/mL D． 50ug/mL E． 60ug/mL50.提取细胞或组织RNA时，决定实验成败的关键因素是( )A．必须要取新鲜的组织B．防止Rnase对RNA的降解C．裂解液的量不足D．蛋白质污染E．以上都不对51.提取细胞或组织RNA所用的裂解液主要成分是( )A．DEPC B．异硫氰酸胍C．氯仿D．苯酚E．以上均是52.组织或细胞基因组DNA的提取一般使用的离心机是( )A．低速离心机B．高速离心机C．超高速离心机D．常速离心机E．过滤离心机53.提取组织或细胞基因组DNA使用的细胞裂解缓冲液中EDTA的作用是( )A．破坏细胞膜、核膜B．使组织蛋白与DNA分离C．抑制DNase的活性D．降解蛋白质E．抑制RNase的活性54.提取组织或细胞基因组DNA使用的蛋白酶K的作用是( )A．破坏细胞膜、核膜B．使组织蛋白与DNA分离C．抑制DNase的活性D．降解蛋白质E．抑制RNase的活性55.基因工程技术的基本操作步骤：①使目的基因与与载体相连；②将目的基因导入受体细胞；③检测目的基因的表达；④提取目的基因，正确的操作顺序为( )A．②④①③B．④②①③C．④②③①D．②④③①E．④①②③56.不属于基因工程技术生产的药物是( )A．干扰素B．青霉素C．白细胞介素D．乙肝疫苗E．人-鼠嵌合抗体57.基因工程技术中我们用“剪刀”、“针线”分别代表( )A．Taq酶、引物B．Taq酶、DNA连接酶C．限制性内切酶、DNA连接酶D．限制性内切酶、RNA连接酶E．Taq酶、RNA连接酶58.下列操作中，不发生碱基配对的是( )A．人工合成基因B．将目的基因导入受体细胞C．目的基因与质粒载体结合D．PCR E．目的基因检测59.基因工程中最为常用的连接酶是( )A．大肠杆菌DNA连接酶B．T4 DNA连接酶C．大肠杆菌DNA连接酶D．T4 RNA连接酶E．以上都不对60.基因工程中最为常用的基因载体是( )A．质粒B．噬菌体C．病毒D．穿梭质粒E．基因组61. 基因工程技术应用最广泛地受体是（）A. 支原体B. 动物细胞C. 酵母细胞D. 植物细胞E. 大肠杆菌62.加速催化剂催化Acr和Bis聚合反应的物质是( )A．硫酸铵B．硫化铵C．TEMED D．过硫酸铵E．核黄素63.下列关于TEMED的描述，错误的是( )A．中文名为N,N,N′,N′－四甲基乙二胺B．具有强神经毒性C．易挥发，使用后立即盖紧瓶盖D．是Acr和Bis聚合反应的催化剂E．宜避光保存64.聚丙烯酰胺凝胶是三维网状结构，控制其孔径大小的因素主要是( ) A．丙烯酰胺的浓度B．甲叉双丙烯酰胺的浓度C．凝胶凝固的时间长短D．丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的交联度E．丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺总浓度65. 聚丙烯酰胺凝胶电泳的英文缩写为( )A．PGAE B．PAGE C．PEGA D．PEAG E．PAEG66.不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳上下层胶依次为( )A．大孔径分离胶、小孔径浓缩胶B．大孔径浓缩胶、小孔径分离胶C．小孔径浓缩胶、大孔径分离胶D．小孔径分离胶、大孔径浓缩胶E．孔径一致的分离胶、浓缩胶67.不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶中跑在最前面的是( )A．Gly－B．Pr－C．Cl－D．核酸E．以上都不对68.不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶中跑在最后面的是( )A．Gly－B．Pr－C．Cl－D．核酸E．以上都不对69.不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶胶中跑的最慢的是( )A．Gly－B．Pr－C．Cl－D．溴酚蓝E．以上都不对70.不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳时出现的肉眼可见指示条带是( )A．Gly－B．Pr－C．Cl－D．溴酚蓝E．以上都不对71. 聚丙烯酰胺凝胶上层浓缩胶中的待测蛋白质离子被哪两种离子形成的狭小夹层所浓缩( )A．CH3COO－、Pr－B．CH3COO－、Cl－C．Gly－、Pr－D．Gly－、Cl－E．CH3COO－、Pr－72. 聚丙烯酰胺凝胶上层浓缩胶中三种离子泳动率关系为( )A．Pr－＞Gly－＞Cl－B．Gly－＞Cl－＞Pr－C．Cl－＞Pr－＞Gly－D．Cl－＞Gly－＞Pr－E．Gly－＞Pr－＞Cl－73. 聚丙烯酰胺凝胶电泳用到的蛋白质染色剂为( )A．溴化乙锭B．溴酚蓝C．考马斯亮蓝D．氨基黑E．硝酸银74.聚丙烯酰胺凝胶电泳配制浓缩胶所用缓冲液是( )A．pH8.8 Tris-HCl缓冲液B．pH6.8 Tris-HCl缓冲液C．pH8.3Tris-甘氨酸缓冲液D．PBS缓冲液E．1×TAE75.聚丙烯酰胺凝胶电泳配制分离胶所用缓冲液是( )A．pH8.8 Tris-HCl缓冲液B．pH6.8 Tris-HCl缓冲液C．pH8.3Tris-甘氨酸缓冲液D．PBS缓冲液E．1×TAE76.聚丙烯酰胺凝胶电泳所用电泳缓冲液为( )A．pH8.8 Tris-HCl缓冲液B．pH6.8 Tris-HCl缓冲液C．pH8.3Tris-甘氨酸缓冲液D．PBS缓冲液E．1×TAE77.聚丙烯酰胺凝胶电泳加样前将样品煮沸处理，其目的在于( )A．破坏样品中的核酸B．浓缩蛋白C．使其裂解成小分子D．破坏蛋白质的空间构象E．以上都对78.连续和不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳最关键的差别在于( )A．有无电压梯度效应B．有无浓缩效应C．有无电荷效应D．凝胶在空间上是否连续E．有无分子筛效应79.下列物质对人体无毒的是( )A．溴化乙锭B．聚丙烯酰胺C．TEMED D．丙烯酰胺E．甲叉双丙烯酰胺80.聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离胶和浓缩胶成分的区别在于( )A．孔径大小不同B．发挥功能不同C．配制所用缓冲液pH值不同D．丙烯酰胺浓度不同E．以上都对81.用于凝胶过滤层析的凝胶使用前应该做的预处理是( )A．加热B．溶胀C．平衡D．装柱E．预冷82.脲酶的凝胶过滤分离纯化实验中，将凝胶装柱之前要做的是( )A．平衡层析柱B．溶胀C．检查是否通畅D．关闭出口E．调整流速83.脲酶的凝胶过滤分离纯化实验中，绘制蛋白酶活性曲线的横、纵坐标分别是（）A．试管编号、A480 B．试管编号、A280C．试管编号、酶活性D．NH3的μmol数、A280 E．NH3的μmol数、A480参考答案单选题：1.C2.C3.A4.C5.D6.E7.B8.B9.D 10.B 11.B12.C 13.A 14.B 15.E 16.B 17.A 18.D 19.B 20.C 21.A 22.E 23.E 24.B 25.A 26.D 27.A 28.C 29.C 30.B 31.B 32.D 33.C 34.A 35.D 36.A 37.C 38.C 39.B 40.E 41.B 42.A 43.B 44.B 45.C 46.B 47.C 48.D 49.D 50.B 51.B 52.B 53.C 54.D 55.E 56.B 57.C 58.B 59.B 60.A 61.E 62.C 63.D 64.E 65.B 66.B 67.C 68.A 69.B 70.D 71.D 72.C 73.C 74.B 75.A 76.C 77.D 78.B 79.B 80.E 81.B 82.C 83.C单选题:101.凝胶过滤层析分离混合物的基本原理是（）A．离子交换B．分配系数差异C．吸附力差异D．电荷差异E．分子筛作用102.凝胶过滤层析一般包括三大主要步骤，按顺序依次是（）A．加样、装柱、洗脱B．装柱、加样、洗脱C．装柱、平衡、加样D．装柱、平衡、洗脱E．加样、平衡、洗脱103.凝胶过滤层析是根据分子什么特点进行分离的（）A．分子量大小B．对吸附剂吸附的能力不同C．分配系数不同D．带电性质与荷电量不同E．构像不同104.离子交换层析是根据分子什么特点进行分离的（）A．分子量大小B．对吸附剂吸附的能力不同C．分配系数不同D．带电性质与荷电量不同E．构像不同105.亲和层析是根据分子什么特点进行分离的（）A．分子量大小B．对吸附剂吸附的能力不同C．分配系数不同D．带电性质与荷电量不同E．与相应受体或配体亲和力不同106.脲酶催化尿素水解释放氨，再与下列何种试剂反应产生黄色化合物，根据颜色深浅即可判断酶活性大小（）A．班氏试剂B．奈氏试剂C．酚试剂D．考马斯亮蓝E．TEMED107.用Nessler试剂检测氨可产生什么颜色的化合物（）A．红色B．黄色C．蓝色D．紫色E．橙色108.碱裂解法提取质粒所用的溶液I、溶液Ⅱ、溶液III发挥的作用分别是( )A．裂解、中和、悬浮B．中和、悬浮、裂解C．悬浮、裂解、中和D．裂解、悬浮、中和E．悬浮、中和、裂解109.对理想的克隆载体的描述，错误的是( )A．大小一般在1kb～15kb之间B．分子量小、单拷贝、紧密控制型C．具有多种常用的限制性内切酶的单切点D．能插入较大的外源DNA片段E．具有容易操作的检测表型110．取质粒最常用的方法是( )A．煮沸法B．冷冻法C．超声波法D．碱裂解法E．酶解法111．裂解法提取质粒所用的试剂中，最关键的是( )A．悬浮缓冲液B．裂解缓冲液C．中和缓冲液D．TE缓冲液E．酚:氯仿:异戊醇112．裂解法提取质粒所用悬浮缓冲液试剂中，包括的成分是( )A．50 mmol/L 葡萄糖，10mmol/L EDTAB．0.2 mol/L NaOH，1％SDSC．3mol/L乙酸钾，2mol/L冰醋酸D．50 mmol/L 葡萄糖，25 mmol/L Tris-Cl ，10mmol/L EDTA，RNase E．1％SDS，25 mmol/L Tris-Cl，10mmol/L EDTA113.裂解法提取质粒所用裂解缓冲液试剂中，包括的成分是( )A．50 mmol/L 葡萄糖，10mmol/L EDTAB．0.2 mol/L NaOH，1％SDSC．3mol/L乙酸钾，2mol/L冰醋酸D．50 mmol/L 葡萄糖，25 mmol/L Tris-ClE．1％SDS，25 mmol/L Tris-Cl114.裂解法提取质粒所用中和缓冲液试剂中，包括的成分是( )A．50 mmol/L 葡萄糖，10mmol/L EDTAB．0.2 mol/L NaOH，1％SDSC．3mol/L乙酸钾，2mol/L冰醋酸D．50 mmol/L 葡萄糖，2mol/L冰醋酸E．1％SDS，25 mmol/L Tris-Cl115.于高速离心机的使用和维护，下列描述错误的是( )A．离心机应放置在水平而坚实的台面上，以免离心时造成机器震动B．转头中不能装载单数的管子C．离心管一定要对称放置D．使用前，换上所需的转头E．预设时间一到即可打开机盖取出离心管116.裂解法提取质粒时，加入裂解缓冲液，反应时间不超过( )A．2min B．3min C．4min D．5min E．7min117.裂解法提取质粒时，裂解细胞这一步必须要轻柔的重要原因是( ) A．避免基因组DNA断裂B．避免基因组DNA变性C．避免质粒DNA变性D．避免质粒DNA开环E．避免质粒DNA断裂118.解法提取质粒时，裂解细胞这一步时间不能过长的重要原因是( )A．避免基因组DNA断裂B．避免基因组DNA变性C．避免质粒DNA变性D．避免质粒DNA开环E．避免质粒DNA断裂119.解法提取质粒时，形成大量沉淀的步骤是( )A．加入RB后B．加入LB后C．加入NB后D．加酚:氯仿:异戊醇后E．加无水乙醇后120.解法提取质粒时，加入NB后形成大量沉淀，与之有关的重要成分是( )A．乙酸钾和冰醋酸B．SDS和乙酸钾C．SDS和冰醋酸D．EDTA E．SDS121.裂解法试剂LB在温度较低时，可能会产生沉淀，应怎样处理( )A．无需处理，不影响结果B．在室温下放置一段时间C．说明已经变性，应予废弃D．摇匀至沉淀消失再用E．需先用水浴加热溶解，混匀后再用122.裂解法试剂LB易被空气中的CO2酸化，用完后应立即盖紧瓶盖。
酶联免疫吸附实验
记录结果有下列几种方法： 1、“+”或“-”：所有超过规定的O.D值（如O.D，0.4） 的标本均属阳性，此规定O.D值是根据事先测定大量阴 性标本所取得的，此规定值是阴性标本的上限。或者以 一组阴性标本O.D平均值加2～3个标准差作为阳性阈值。 2、直接以O.D值来表示，如0.4、0.7、1.2，O.D值越 大，阳性反应越强，但此数值是在固定实验条件下得到 的结果，而且每次实验都要有参考标本作对照。 3、以终点滴度表示：将标本作连续稀释，最高稀释度 能出现阳性反应者（即OD值仍大于阳性阈值，即为该 标本的滴度。
（三）试验样品
（四）结合物
(五）洗涤剂与稀释剂
（六）底物
（七）作用时间
（八）结果判断
(九)试验的重复性（精确度）
（十）对使用仪器要求
整理版ppt
24
（一）固相载体
在ELISA中最常用的是聚苯乙烯或聚氯乙烯微量反应板及塑 料管。但每批微量反应板对抗原或抗体蛋白质的吸附性能 是有显著差别的。实验证明，吸附效果似乎与塑料的类型 及其表面性质有关。特别是塑料制品在加工过程中因工艺 不同或受其他因素的影响而造成吸附性能的极大差异，甚 至完全丧失吸附能力。因此，对每批制品在使用前，必须 经过实验室鉴定 。
5、以“单位”来表示：在测定被检标本的同时，再测定一 个含已知单位数的阳性参考血清，用不同稀释度作ELISA检 测后，以O.D值为纵坐标，单位数为横坐标，画出标准曲线。 以后可根据被检标本的O.D值，从曲线上找出相应的单位数， 再乘于血清的稀释倍数，即可得出被检标本的单位数。
整理版ppt
34
（十）对使用仪器要求
整理版ppt
31
（八）结果判断
ELISA的试验结果可用肉眼观察颜色反 应的深浅作出判断，也可用分光光度计作 精确测定。当然,后者更为正确。而肉眼观 察更为简便，而且也有一定正确性。
临床医学检验技术(师)：酶免疫技术测试题真题
临床医学检验技术(师)：酶免疫技术测试题真题1、单选?采用ELISA竞争一步法检测抗HBc抗体如果固相包被的物质是抗原如果标本离心不充分，存在纤维蛋白，可能会导致（）A.假阴性B.假阳性C.灵敏度增加D（江南博哥）.特异性增加E.临界值下降正确答案：A2、单选ELISA板包被后，最常用的封闭物质是（）A.人白蛋白B.人球蛋白C.牛血清白蛋白D.牛血清球蛋白E.鼠白蛋白正确答案：C参考解析：牛血清白蛋白是ELISA板包被后最常用的封闭物质。
3、单选?采用ELISA竞争一步法检测抗HBc抗体如果固相包被的物质是抗原酶标记物是（）A.酶标记的HBeAgB.酶标记的抗HBe抗体C.酶标记的抗HBc抗体D.酶标记的鼠抗人IgG抗体E.酶标记的鼠抗人抗体正确答案：C4、单选检测HBV血清学标志物最常用的方法为（）A.免疫荧光法B.ELISAC.中和试验D.免疫印迹试验E.放射免疫法正确答案：B参考解析：目前在国内的临床实验室中最常用的是酶联免疫吸附试验（ELISA）。
ELISA灵敏度高、特异性强、简便快速、成本低。
5、单选ELISA双抗原夹心法检测抗体时，固相载体包被物是（）A.酶标记的抗体B.酶标记的抗原C.未标记的已知抗原D.未标记的已知抗体E.未标记的抗抗体正确答案：C参考解析：间接法测抗体是检测抗体最常用的方法，其操作步骤如下：①将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原，洗涤；②加稀释的受检血清；③加酶标抗抗体；④加底物显色。
由此可知固相载体包被物是未标记的已知抗原。
6、单选生化标志最低检测限为（）个肿瘤细胞A.105B.106C.107D.108E.109正确答案：D7、单选酶扩大免疫测定技术是最早取得实际应用的何种酶免疫测定方法（）A.均相酶免疫测定B.异相酶免疫测定C.固相酶免疫测定D.液相酶免疫测定E.固相-液相酶免疫测定正确答案：A8、单选艾滋病病毒检测的确证试验通常采用何种检测方法（）.A.化学发光法B.免疫印迹法C.ELISAD.斑点免疫渗滤试验E.斑点-ELISA法正确答案：B9、单选用于标记的酶应符合的要求中，哪一项可以除外（）A.酶活性高B.具有可与抗原、抗体结合的基团C.具有可与生物素、亲和素结合的基团D.酶催化底物后的成色信号易判断E.纯度及比活性高正确答案：C参考解析：标记酶应该具有酶活性高；可与抗原、抗体结合的基团；纯度及比活性高；酶催化底物后的成色信号易判断。
酶联免疫反应的原理和步骤
酶联免疫反应的原理和步骤一、酶联免疫反应的原理酶联免疫反应是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析抗原或抗体的存在和浓度。
其原理基于抗原与抗体之间的特异性结合反应，通过将酶标记的二抗与特异性抗体结合形成免疫复合物，再利用酶的催化作用产生可定量检测的产物，从而实现对抗原或抗体的检测和定量。
酶联免疫反应的原理可以简单概括为以下几个步骤：1. 免疫吸附：将待测物（抗原或抗体）吸附在固相载体（如酶标板、磁珠等）上，使其与固相载体结合。
2. 阻断：为了防止非特异性结合，需要在免疫吸附之前或之后对固相载体进行阻断处理，通常使用牛血清蛋白（BSA）或牛血清白蛋白（BSA）来阻断非特异性结合位点。
3. 特异性结合：加入特异性抗体与待测物进行结合反应，形成抗原-抗体复合物。
4. 二抗结合：加入酶标记的二抗，该二抗与特异性抗体结合，形成二抗-抗原-抗体复合物。
5. 底物反应：加入底物，该底物受酶的催化作用产生可定量测量的产物。
常用的底物有TMB（三甲基苯胺）、ABTS（2,2'-联氨基丙烷磺酸）等。
6. 反应终止：加入适当的反应终止液，停止底物反应过程。
7. 测量：通过光度计或荧光计测量产物的光吸收或荧光强度，以反映抗原或抗体的浓度。
二、酶联免疫反应的步骤酶联免疫反应通常包括以下几个步骤：1. 表面处理：将固相载体（如酶标板）表面进行处理，以增强待测物的吸附能力和特异性结合。
常用的方法有物理吸附、化学共价结合、亲和结合等。
2. 阻断处理：为了防止非特异性结合，需要对固相载体进行阻断处理，通常使用牛血清蛋白（BSA）或牛血清白蛋白（BSA）来阻断非特异性结合位点。
3. 特异性结合：加入待测物（抗原或抗体），与固相载体上的特异性抗体进行结合反应，形成抗原-抗体复合物。
4. 二抗结合：加入酶标记的二抗，该二抗与特异性抗体结合，形成二抗-抗原-抗体复合物。
5. 底物反应：加入底物，该底物受酶的催化作用产生可定量测量的产物。
临床检验技术 相关专业知识试题
临床检验技术相关专业知识试题1.适用于尿17-羟、17-酮检查的防腐剂是A.二甲苯B.甲醛C.浓盐酸D.浓硫酸E.麝香草酚答案：C解析：盐酸使尿液保持酸性，阻止细菌繁殖，同时防止一些化学物质因尿液碱化而分解，常用于 17-羟皮质类固醇和 17-酮类固醇等定量测定。
2.镜下血尿是指尿液中的红细胞大于A.5 个/HPFB.4 个/HPFC.3 个/HPFD.1 个/HPFE.10 个/HPF答案：C解析：镜下血尿是指尿外观变化不明显，离心沉淀后，镜检时每高倍视野红细胞平均大于3个，血中红细胞随同尿液一起排出体外的现象。
3.下列哪种试验与苯酚结合出现不溶性蛋白盐而.出现浑浊A.Ross-JoneB.Nonne-ApeltC.Pandy试验D.Rivalta试验E.李凡他试验答案：C解析：Pandy 试验为脑脊液中蛋白质与苯酚结合形成不溶性的蛋白盐，所需脑脊液标本量少，检测灵敏度高，结果易于观察，沉淀物的多少与标本中蛋白质含量成正比。
4.阴道清洁度为II度时，球菌的数量为A. +C. ++D. +++E. ++++答案：C5.酶联免疫反应常用的底物是A.四乙基罗丹明B.四甲基联苯胺C.邻苯二胺(0PD)D.氨基水杨酸E.四甲基-伞酮基-R-D-半乳糖苷答案：B解析：四甲基联苯胺（TMB）是一种优于OPD的新型色原底物，具有稳定性好，成色无避光，无致突变作用等优点，已成为目前ELISA中应用最广泛的底物。
6.革兰阳性菌特有的成分是A.肽聚糖B.磷壁酸C.荚膜D.脂多糖E.脂蛋白答案：B解析：革兰阳性细菌细胞壁的特有成分是磷壁酸，包括壁磷壁酸和膜磷壁酸两种，它们构成革兰阳性菌的表面抗原，可用于血清学分型。
7.20 世纪初法国有两位细菌学家，他们足足花了13年的时间，终于成功培育了第230代被驯服的结核杆菌，作为人工疫苗，又称“卡介苗”。
关于卡介苗的说法，正确的是A.是毒力减弱而保留免疫原性的病毒B.是毒力减弱而保留免疫原性的非变异株C.是毒力臧弱而保留免疫原性的变异株D.是毒力增强而保留免疫原性的非变异株E.是毒力增强而未保留抗原性的变异株答案：C解析：卡介苗是将有毒的牛分枝杆菌在含有甘油、胆汁、马铃薯的培养基中经13年230次传代而获得的减毒活疫苗，是毒力减弱而保留免疫原性的变异株。
酶联免疫反应
均相酶免测定的对象为小分子抗原或半 抗原，主要用于药物测定。可以直接用 于全自动生化分析仪测定。
非均相酶免疫分析法（heterogeneous enzyme immunoassay） 常用的酶免疫分析 法多为非均相法，又可分为液相酶免疫法和 固相酶免疫法两种，以后者最常用，称为酶 联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）。ELISA是 临床上最常用的免疫分析方法。需经过结合 的标记物和游离的标记物的分离才能测定. 分离的方法主要通过固相载体吸附后清洗未 结合的游离标记物。
环 境 因 素
通风、采光与防尘。 控制温度及湿度, 环境温度与湿度随地理位 置不同可有很大差异应使用系统空调进行控 温, 并要求控制空气湿度为40%～70%之间 消除噪音与电磁干扰。 稳定水电, 实验过程中应采用蒸馏水(纯水) 或经软化处理的自来水。
六、ELISA应用
ELISA在饲料安全检测中的应用
固相抗原或抗体
1、固相载体的性状 固相载体在ELISA 测定过程中作为吸附剂和容器，不 参与化学反应。 ELISA 载体的形状主要有：膜（NC膜、PVDF膜、尼 龙膜）、微量滴定板（96孔板）、小珠和小试管，以 微量滴定板（96孔板）最为常用。 良好的ELISA 用96孔板应该是吸附性能好，空白值低， 孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间性能相近。 2、包被用抗原 用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗 原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。 3、包被条件
酶免疫组化技术
双抗体夹心法
竞争法
双抗原夹心法
间接法
双抗体夹心法
竞争法
间接法
ELISA基本实验过程 包被：将已知抗原或抗体通过物理吸附 到固相载体表面，使抗原或抗体固相化 抗原抗体反应：先后加入被检标本和酶 结合物，使之与固相抗原或抗体发生免 疫反应而被结合固定 酶促反应：在反应体系中加入酶作用的 底物，使发生酶促反应而显色
酶联免疫
分子生物学与生物化学课程论文酶联免疫（ELISA）检测方法学院: 山西农业大学信息学院系部: 农业与生命科学系专业: 生物技术班级: 102 班学号: 2010010229姓名: 高淼时间: 2013年5月5日酶联免疫（ELISA）检测方法摘要：酶联免疫法简称ELISA，是酶免疫测定技术中应用最广的技术。
其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。
常用的ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。
关键词：ELISA 基本方法抗体抗原前言：1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 。
ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。
由于ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点，使其得到迅速的发展和广泛应用。
尽管早期的ELISA 由于特异性不够高而妨碍了其在实际中应用的步伐，但随着方法的不断改进、材料的不断更新，尤其是采用基因工程方法制备包被抗原，采用针对某一抗原表位的单克隆抗体进行阻断ELISA试验，都大大提高了ELISA的特异性，加之电脑化程度极高的ELISA检测仪的使用，使ELISA更为简便实用和标准化，从而使其成为最广泛应用的检测方法之一。
一、基本原理将抗原或抗体结合到某种固相载体，并保持其免疫活性，将抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留酶的活性，也不会改变抗体的免疫学特性。
而常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP)、碱性磷酸酶（AKP)等。
临床医学检验临床免疫技术：酶免疫技术必看题库知识点
临床医学检验临床免疫技术：酶免疫技术必看题库知识点1、单选制备酶标记物的交联剂的反应基团至少应有（）A.5个B.4个C.3个D.2个E.1个正确答案：D2、单选ELISA双抗体夹心法（）A.将（江南博哥）酶标记特异抗体用于检测抗原B.先将待测抗原包被于固相载体C.标记一种抗体可检测多种抗原D.能用于半抗原的测定E.将酶标记抗抗体用于抗原检测正确答案：A3、单选为消除非特异性显色导致的本底偏高，酶免疫技术中将抗原抗体包被后需再进行封闭的是（）A.15％～25％牛血清白蛋白B.10％～15％牛血清白蛋白C.10％牛血清白蛋白D.1％～10％牛血清白蛋白E.1％～5％牛血清白蛋白正确答案：E4、单选下述哪一种酶联免疫吸附实验方法最常用于抗原测定（）A.间接法ELISAB.反向间接法ELISAC.竞争法ELISAD.双抗体夹心法ELISAE.捕获法正确答案：D5、单选以下哪一种复合物的形成属于间接法ELISA免疫反应结果（）A.固相抗原-抗体-酶标二抗B.固相抗体-抗原-酶标抗体C.固相二抗-IgM抗原-酶标抗体D.固相抗体-酶标抗原E.固相抗体-抗原-抗体-酶标抗体正确答案：A参考解析：间接法是检测抗体常用的方法。
其原理为利用酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。
6、单选酶免疫技术中的酶结合物指的是（）A.酶标记抗体B.酶标记抗原C.酶标记抗原或抗体D.结合在固相载体上的酶E.酶与底物的结合正确答案：C7、单选酶联免疫吸附试验（ELISA）中应用最多的底物是（）A.邻苯二胺（OPD.B.四甲基联苯胺（TMB.C.ABTSD.对硝基苯磷酸酯（p-NPP）E.以上都不是正确答案：B参考解析：邻苯二胺灵敏度高，比色方便，是ELISA中应用最早的底物，但稳定性差，反应过程需要避光，还具有致癌性；四甲基联苯胺稳定性好，反应无需避光，没有致突变作用，是目前应用最广泛的底物，但是水溶性差。
酶联反应的基本原理和应用
酶联反应的基本原理和应用基本原理酶联反应（enzyme-linked immunosorbent assay，简称ELISA）是一种广泛应用于生物学、医学和环境科学等领域的实验技术。
其基本原理可以概括为以下几个步骤：1.血清样品准备：首先，需要从被测样品中提取并纯化所需的分析物。
一般以血清为例，可以通过离心、稀释等方法得到要分析的样品。
2.固定抗原：在一个固定的表面上，将要检测的抗原定向地固定下来。
这个表面可以是试管、96孔板等。
常用的固定方法有吸附、共价结合等。
3.样品处理：将准备好的样品加入到固定抗原的表面上，使得样品中的抗体与抗原发生特异性反应。
这个步骤可以用来检测血清中是否存在特定的分析物。
4.添加标记抗体：将已标记的抗体加入到样品中，使得抗体和抗原形成特异性的结合。
标记抗体一般会选择与被测抗原不同来源的抗体，以便于检测。
5.检测信号：通过添加一定的底物，使得标记抗体产生可视的信号。
常见的底物有酶类、荧光染料等。
这个信号可以通过光学或电化学等方式进行测定。
应用酶联反应在生物科学中有着广泛的应用，其中包括以下几个方面：1.医学诊断：酶联反应是一种常见的临床检验方法，可以用于检测血液中的特定抗体、抗原以及其他生物分子。
比如，ELISA可以用于检测病毒感染、免疫相关疾病等。
此外，ELISA还可以用于检测肿瘤标记物、药物残留等。
2.免疫学研究：酶联反应是免疫学研究中的重要工具，可以用于检测和定量特定蛋白质、抗体以及其他分子的存在和表达水平。
通过ELISA，可以对免疫应答、免疫学相关疾病等进行深入的研究。
3.食品安全监测：ELISA可以用于检测食品中的各种污染物，如重金属、农药残留、有害微生物等。
这对于保障食品安全具有重要意义。
4.环境监测：酶联反应在环境科学中也有广泛的应用。
比如，ELISA可以用于检测水体、土壤和空气中的有害物质，如重金属、有机污染物等。
这对于环境污染的监测和评估具有重要意义。
酶联免疫吸附测定法
一、基本原理 它采用抗原与抗体的特异反应将待 测物与酶连接，然后通过酶与底物产生 颜色反应，用于定量测定。测定的对象 可以是抗体也可以是抗原。 在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物） ③酶作用的底物（显色剂）
测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上， 但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原） 与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保 留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体 上的抗原（抗体）反应结合后， 再加上酶 的相应底 物，即起 催化水解 或氧化还 原反应而 呈颜色。
特点二：特异性
其特异性来自抗体或抗原的选择性。 抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的 抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。 由于两者在化学结构和空间构型上呈互 补关系，所以抗原抗体反应具有高度的 特异性。
例如乙肝病毒中的 表面抗原（HBsAg）、e 抗原（HBeAg）和核心抗 体（HBcAg），虽来源于 同一病毒，但仅与其相 应的抗体结合，而不与 另外两种抗体反应。抗 原抗体反应的这种特异 性使免疫测定能在一非 常复杂的蛋白质化合物 （例如血清）中测定某 一特定的物质，而不需 先分离待检物。
是elisa成败的关键试剂它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应还具有酶促反应显示出生物放大作用但不同的酶选用不同的底物显色反应测定波长辣根过氧化物酶四甲替联苯胺氨基水杨酸邻联苯甲胺22连胺基23乙基唑啉磺酸6铵盐橘红色黄色棕色蓝绿色492460449425642碱性磷酸酯酶硝基酚磷酸盐pnp萘酚asmx磷酸盐重氮盐黄色红色400500葡萄糖氧化酶abtshrp葡萄糖葡萄糖黄色深蓝色405420甲基伞酮基半乳糖苷4mug硝基酚半乳糖苷onpg荧光黄色360450420elisa的种类和变化一双抗体夹心法二间接法三竞争法四双位点一步法五捕获法测igm抗体六应用亲和素和生物素的elisa一双抗体夹心法此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原获得待分析物的未标定抗体将特异性抗体与固相载体连接形成固相抗体洗涤除去未结合的抗体及杂质加入封闭蛋白溶液以封闭载体表面残留的蛋白结合位点洗涤并除去未结合的封闭蛋白加受检标本抗原形成固相抗体抗原复合物洗涤除去其他未结合的物质加酶标抗体生成抗体待测抗原酶标记抗体的复合物彻底洗涤未结合的酶标抗体加底物进行酶催化反应根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量测定间接法是检测抗体最常用的方法其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体故称为间接法
酶联免疫吸附试验(ELISA)
前两种方法主要用于测定抗体和大分 子抗原，适用于临床诊断上，而竞争法事 测定小分子抗原的方法，因而尤其适用于 食品分析。
ELIZA 方法图示
间接法
“Indirect” ELISA
The steps of "indirect" ELISA follows the mechanism below: 1. A buffered solution of the protein antigen to be tested for is added to each well of a microtiter plate, where it is given time to adhere to the plastic through charge interactions. 2. A solution of non-reacting protein, such as bovine serum albumin, or casein is added to block any plastic surface in the well that remains uncoated by the protein antigen. 3. Then the serum is added, which contains a mixture of the serum donor's antibodies, of unknown concentration, some of which may bind specifically to the test antigen that is coating the well. 4. Afterwards, a secondary antibody is added, which will bind any antibody produced by a member of the donor's species (for example, an antibody produced in a mouse that will bind any rabbit antibody). This secondary antibody often has an enzyme attached to it, which has no effect on the binding properties of the antibody. 5. A substrate for this enzyme is then added. Often, this substrate changes color upon reaction with the enzyme. The color change shows that secondary antibody has bound to primary antibody, which strongly implies that the donor has had an immune reaction to the test antigen. This can be helpful in a clinical setting, and in R&D. 6. The higher the concentration of the primary antibody that was present in the serum, the stronger the color change. Often a spectrometer is used to give quantitative values for color strength
常用免疫组化试剂介绍完整版
常用免疫组化试剂介绍完整版免疫组化试剂是一类用于检测细胞和组织中特定分子的试剂。
它们能够与目标分子发生特异性的结合反应，通过显色、荧光等方式实现目标分子的定位和检测。
常用的免疫组化试剂有抗体、底物、荧光染料等。
下面将详细介绍常用的免疫组化试剂。
一、抗体单克隆抗体：单克隆抗体是由单个克隆的B细胞分泌的抗体组成。
它们具有更高的特异性和一致性，适用于特定的免疫组化实验。
单克隆抗体一般通过酶联免疫吸附试验或杂交瘤技术获得。
二、底物底物是一种被特定酶催化后能够产生染色或荧光信号的化学物质。
在免疫组化实验中，常用的底物有DAB、VIP、AP、HRP等。
DAB：DAB（3,3'-二氨基联吡啶）是一种常用的免疫组化染色底物。
当DAB与过氧化物酶结合后，在特定条件下会产生棕色沉淀物，用于检测目标分子的位置。
VIP：VIP（维珍纳胶体阳离子）是一种特殊的底物，其在经过过氧化物酶催化后，形成带有阳离子电荷的胶体颗粒。
VIP用于染色后，可以形成黑色沉淀物。
AP：AP（碱性磷酸酶）是一种常用的底物，可以和特定基质反应生成可见或荧光信号。
AP基质有两种常用的类型，一种是快速红色溶液（Fast Red），另一种是紫色溶液。
HRP：HRP（过氧化物酶）是一种广泛使用的底物，在过氧化物酶的作用下可以产生明亮的荧光或染色信号。
HRP染色通常呈现为褐色或黑色。
三、荧光染料荧光染料是一种通过吸收特定波长的光线并在另一个波长下发射荧光的化合物。
免疫组化实验中常用的荧光染料有FITC、TRITC、Cy3、Cy5等。
FITC：FITC（荧光异硫氰酸酯或荧光同硫氰酸酯）是一种常用的绿色荧光染料，其在激发波长为488nm的波长下产生绿色荧光。
TRITC：TRITC（荧光异硫氰酸酯）是一种常用的红色荧光染料，其在激发波长为568nm的波长下产生红色荧光。
Cy3：Cy3是一种荧光发色团，其在激发波长为550nm的波长下产生黄绿色荧光。
Cy5：Cy5是一种荧光发色团，其在激发波长为650nm的波长下产生红色荧光。
酶免疫技术
1、酶标记抗体免疫组化技术类型： （1）直接法：■-Ag + Ab*E → ■-Ag-Ab*E
优点：简单、快速、特异 缺点：一种酶标抗体只能测一种抗原，敏感性较差
（2）间接法：■-Ag + Ab1 + Ab2*E → ■-Ag-Ab1-Ab2*E
优点：一种酶标抗体能测多种抗原，实用性敏感性 较直接法好 缺点：敏感性低于非标记抗体酶法与三步法
（一）斑点-酶联免疫吸附试验 （dot-ELISA ）
原理：似ELISA，但载体为硝酸纤维素 （NC）膜。更灵敏、节约、简便，易 保存 以检测抗体为例：
Ag
Ab1？
Ab2-E
底物
（二）斑点-酶免疫渗滤试验 Immunofiltration Assay，IFA
原理：以NC膜为载体，利用微孔滤膜 的可滤过性，使抗原抗体反应和洗涤在 一特殊渗滤装置上以液体渗滤过膜的方 式迅速完成。以胶体金为标记物的金免 疫渗滤试验省却了酶对底物的反应，更 加简便快速。
（二）类
型
根据检测目的和操作步骤不同： 双抗体夹心法 间接法 竞争法 捕获法 dot-ELISA BAS-ELISA
双抗体夹心法
此法常用于测定抗原，适用于多价大分 子抗原的检测，而不能用于测定半抗原 等小分子物质。
双抗体夹心法
间接法
此法是测定抗体最常用的方法。
酶免疫标记用于抗原检测
（一）基本原理
酶标记抗体或抗原： 抗体或抗原的免疫学反应特异性 ＋ 酶活性 酶是一种有机催化剂： 使底物基质水解而呈色 使供氢体由无色还原型变为有色氧化型 ∴ 可用呈色反应显示酶的存在。 很少量的酶即可导致大量的催化过程， 所以极为敏感。
酶联免疫吸附测定法优秀文档
HRP反应终止液为硫酸，一般采用2mol/L
AP用NaOH终止
实验方法:
1. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于已包被之反应 孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴 性对照孔及阳性对照孔)。 2. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗 体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。 3. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的底物溶 液0.1ml，37℃10～30分钟。 4. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 5. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果： 反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极 浅。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，以空白对照孔调 零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍， 即为阳性。
TMB经HRP作用后共产物显蓝色，用HCL或H2SO4终止后，由蓝色呈黄色，最适吸收波长为405nm 阳性对照品(positive control)和阴性对照品(negative control) 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅。
ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。 ③酶作用的底物（显色剂）
实验原理 双抗体夹心法
DNM-9602G酶标分析仪 供氢体：邻苯二胺(OPD)、四甲基联苯胺(TMB) 酶结合物是酶与抗体或抗原联结的产物。
DNM-9602 标配酶标分析仪 阴性对照品须先行检测，确定其中不含待测物质。
DNM-9602G酶标分析仪 在这种测定方法中有3种必要的试剂： 1、HRP催化过氧化物的氧化反应。 ②酶标记的抗原或抗体（标记物）
酶联免疫法操作方法
酶联免疫法操作方法酶联免疫法（ELISA）是一种常用的生物化学技术，可以用于检测生物样品中特定的分子或抗原。
这种技术通常用于医学、疾病诊断、生命科学研究等领域。
本文将对酶联免疫法的操作方法进行详细讲解。
1. 材料准备酶联免疫法需要使用许多化学试剂和实验室设备。
以下是您需要准备的材料和设备清单：- 酶标仪：用于检测酶反应的仪器。
- 酶标板：一个96孔板，用于承载样品和试剂。
- 一组特定抗体：一组适当的抗体，用于特定抗原的检测。
- 酵素标记抗体：与特定抗体配对的抗体。
- 色素反应底物：反应底物一般为辣根过氧化酶（HRP），可以加速反应。
- 缓冲液：用于控制pH 值。
- 洗涤缓冲液：用于除去未结合的抗体。
- 减少反应的溶剂：例如乙醇或醋酸。
2. 酶标板涂层- 将一组特定抗体叠加在酶标板上，至少在每个阱中基本完成。
- 冷藏或浸泡后，高温杀菌30分钟，使其粘附在阱壁上。
3. 样品和对照添加- 在练习之前，使用缓冲液中的或本地实验室中已知的标准，制备出标准曲线。
其他实验室设施可以提供您所需的标准曲线。
- 将准备好的标准曲线涂在第一行子孔中。
- 取一个样品孔，加入预处理样品。
- 取一个对照阱，一个不含想要检测的抗原和一个包含缓冲液的孔。
4. 抗原结合- 对孔进行洗涤，去掉阻止抗体绑定的所有未结合蛋白质和其他物质。
- 添加酵素标记型抗体，较少磷的酵素标记反应产物将被通过底部反应条件发生变化，使其与标准曲线匹配。
5. 颜色的开发和减少反应- 对酶标板进行染色反应，将底物添加到孔中，添加适量的少量底物和过氧化物，这样将产生所需的产品。
- 减少反应的过程是使用一定浓度的乙醇或醋酸来中断反应。
- 首先可以使用组织吸气纸吸去孔中液体，再用洗涤缓冲液反复洗涤以去除底物和其他离子，以减少背景噪音而无指结束反应。
6. 酶标仪检测- 使用酶标仪检测每个孔的吸光度，以比较样品吸收和标准曲线的吸收。
吸光度与知道浓度的标准曲线相对应。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
酶联免疫反应常用底物
辣根过氧化物酶HRP底物
辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP）具有分子量小，标记方法简单，性质稳定等优点，是临床检验试剂中常用的酶。
该产品广泛用于各类生化检测项目及免疫类（ELISA）试剂盒。
中华试剂网辣根过氧化物酶的底物种类丰富，可满足不同的实验需求。
■ HRP的发色底物
辣根过氧化物酶发色底物为过氧化物和供氢体（DH2），其真正底物是H2O2，但人们习惯把供氢体称为底物或统称供氢体底物。
在ELISA中常用的供氢体有以下几种：
1、OPD是ELISA技术中应用较多的供氢体，酶作用后显黄色（最大吸收波长为492 nm），其灵敏度高，测定方便。
2、TMB是近年来常用的一种供氢底物，经酶作用后显天蓝色，目测对比度鲜明，加酸终止酶反应后变黄色（最大吸收波长为450 nm），易比色定量测定。
3、DBA供氢底物，其反应产物为不能溶解的棕色吩嗪衍生物，可用不同光镜观察。
此种多聚物能被还原和
唑-6-磺酸)铵盐
3-氨基-9-乙基咔唑3-Amino-9-ethylcarbazole, AEC
红色、可
溶性
132-32-1
5 g
25
g
4-氯-1萘酚
Chloro-1-naphthol 蓝色、可
溶性
604-44-425
g
※小贴士：氧化物、硫化物、氟化物及叠氮化物等可抑制HRP的活性，故勿用这类试剂作为防腐剂。
■ HRP的发光底物
鲁米诺（3-氨基邻苯二甲酰肼，Luminol）或其衍生物如异鲁米诺（4-氨基邻苯二甲酰肼，Isoluminol），是一类重要的发光试剂。
用HRP标记抗体，进行免疫反应后，利用鲁米诺作为发光底物，在HRP和起动发光试剂(NaOH+H2O2)作用下，鲁米诺发光，发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。
反应过程如下图所示：
产品编号中文名称英文名称
CAS
纯度包装
328061 鲁米诺
Luminol 521-31-398%
1 g
5 g
25 g
分子式：C8H7N3O2
分子量：433.63
熔点：194-195℃
储存条件： 2-8°C
产品编号中文名称英文名称CAS号纯度包装
A5300 异鲁米诺Isoluminol 3682-14-298%
1 g 10 g
分子式：C8H7N3O2
分子量：177.16
熔点：194-195℃
储存条件： 2-8°C
■配套产品
中文名称英文名称CAS号纯度包装
4-碘苯酚4-Iodophenol 540-38-5 99%
5 g 25 g 100 g
四苯基硼酸钠Sodium tetraphenylborate 143-66-8 99.5%(ACS)
25 g 100 g 500 g
牛血清白蛋白Bovine serum albumin [ Fraction
V], BSA
9048-46-8 ——
5 g
25 g
100 g
十二烷基硫酸钠Dodecyl sulfate sodium salt, SDS 151-21-3 99% 100 g 500 g
脱氧胆酸钠Sodium deoxycholate 302-95-4 98%
25 g 100 g 500 g
苯甲基磺酰氟化物Phenylmethylsulfonyl
fluoride, PMSF
329-98-6 99%
25 g
100 g
亮抑酶肽Leupeptin 103476-89-7 96.5% 10 mg 50 mg
三（羟甲基）氨基甲烷盐酸盐Tris(hydroxymethyl)aminomethane
hydrochloride, Tris-HCl
1185-53-1 99%
25 g
100 g
500 g
吐温80 Polysorbate 80 9005-65-6 ——250 mL
1 L
碱性磷酸酶底物
碱性磷酸酶(Alkaline phospharase, AP)是一种能够在碱性情况下将对应底物去磷酸化的酶，广泛分布于人体的各脏器器官中，以肝脏、骨骼、小肠中存在的量最多。
其含量的变化能引起肝炎、肝癌等疾病，是目前免疫诊断试剂产品最常用的标记酶之一。
PNPP（p-Nitrophenyl phosphate disodium salt）是常用的碱性磷酸酶底物，当碱性磷酸酶与PNPP反应后，形成黄色水溶性反应产物，其在&lambda＝405 nm有光吸收。
其反应灵敏，颜色鲜明，在诊断试剂盒生产中得到广泛应用。
■ PNPP
产品编号中文名称英文名称CAS包装254303
4-硝基苯磷酸二钠盐六水合
物
p-Nitrophenyl phosphate disodium
hexahydrate, 98%
333338-18-4
1 g
5 g
25 g 分子式：C6H4NNa2O6P · 6H2O
分子量：371.14
熔点：>300 °C
储存条件：2-8°C
BCIP和NBT是碱性磷酸酶最佳的发色底物组合之一，产物为深蓝色。
在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan，从而达到标记作用。
产品编号中文名称英文名称CAS包装338560
5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸酯对
甲苯胺盐
5-Bromo-4-chloro-3-indolyl
phosphate p-toluidine salt,
BCIP, 98%
6578-06-9
100 mg
250 mg
1 g 分子式：C8H6BrClNO4P · C7H9N
分子量：433.63
熔点：194-195℃
储存条件：2-8°C
产品编号中文名称英文名称CAS包装577118 氯化硝基四氮唑兰
Nitrotetrazolium Blue chloride,
NBT, 90%
298-83-9
100 mg
1 g
分子式：C40H30N10O6· 2Cl
分子量：817.64
熔点：200°C
储存条件：2-8°C
产品编号中文名称英文名称终颜色及水溶性CAS包装
1084029 4-硝基苯磷酸
二钠
Disodium 4-nitrophenylphosphate,
99%
黄色、可溶性4264-83-9 Inquire
209946 萘酚AS-BI磷
酸盐
Naphthol AS-BI phosphate, NABP,
95%
红色、不溶性1919-91-1
100 mg
500 mg
1 g
3000201 萘酚-AS-MX-磷
酸盐
Naphthol-AS-MX-phosphate, NAMP,
99%
红色、不溶性1596-56-1 250 mg
产品编号中文名称英文名称CAS包装
141887 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl
phosphate, disodium salt
sesquihydrate
102185-33-1
100 mg
250 mg
BIB1419 5-溴-6-氯-3-吲哚磷酸二钠盐5-Bromo-6-chloro-3-indoxyl
phosphate, disodium salt monohydrate
404366-59-2
100 mg
250 mg
I655000 3-吲哚酰磷酸酯二钠盐3-Indoxyl phosphate, disodium salt 3318-43-2 500 mg
5 g
565360 4-甲基伞形酮磷酸酯4-Methylumbelliferyl phosphate,
free acid
3368-04-5
1 g
5 g
272074 酚酞磷酸双环己烷铵盐Phenolphthalein monophosphate,
bis(cyclohexylammonium) salt
14815-59-9
1 g
5 g
M04138 环己基溴化镁Bis(4-methylumbelliferyl)phosphate 51379-07-8 1 g。