烟草愈伤组织的诱导及再生体系的建立分析

实验步骤 一）材料的消毒 ： 1）剪取生长健壮的叶片，最好带有叶柄。 2）将整个叶片（包括叶柄）全部浸入70％的乙醇中， 不断振荡30 s。 3）将乙醇倒掉，迅速加入0.1％ 的升汞，Baidu Nhomakorabea将整个叶片 （包括叶柄）全部浸入0.1％ 的升汞中，不断振荡 10 min。 4）于工作台上用无菌镊子将上述叶片夹入无菌烧杯中， 同时将升汞倒入盛有硫化钠的桶里。 5）用无菌水冲洗上述叶片3－5遍，取出后用无菌滤纸 吸干，备用。
实验十
烟草愈伤组织的诱导及再生体系的建立
实验目的： 1.通过实验，掌握无菌操作方法，熟悉烟草愈伤组织 的诱导及再生体系的建立的整个过程。 2.学习再生体系的建立方法，为掌握其他植物的组织 培养奠定基础；同时为转基因技术提供一个平台。
再生体系的建立主要应用于以下几个方面： 1、用于验证植物细胞的全能性。 2、是植物基因工程的重要基础，外源基因 转入受体细胞，受体细胞通过脱分化形成愈伤组 织，愈伤组织通过再分化形成植株，从而获得转 基因植株。 3、也是植物快繁的一种方式，通过诱导愈 伤组织再分化，能够在短时间内形成大量的不定 芽或胚状体，从而获得大量的植株。
接种第一天
接种第二天，因为外植体细胞开始被诱导脱分化， 并不断分裂增殖，造成叶片中央与边缘的细胞分 裂不均匀，因此，叶片中央凸起。
接种第五天，脱分化细胞不断分裂增殖，形成愈伤组织， 表现为叶片边缘泛黄增厚，叶片中央进一步凸起。
接种第九天，脱分化细胞不断增值，愈伤组织 不断增厚，整个叶片都翘起，并且已经开始再 分化形成绿色生长点。
实验原理
分化了的植物叶片细胞往往具有全能性，因 此将烟草叶片从植株上分离后，给予一定的培养 条件，可以诱导叶片细胞脱分化，脱分化的细胞 不断分裂就形成愈伤组织，愈伤组织再在合适的 培养条件下又能够再分化形成完整植株，烟草愈 伤组织的再分化是以不定芽的方式，即愈伤组织 先形成不定芽，再由不定芽形成完整植株，从而 完成了再生体系的建立。
二）接种： 在无菌的条件下，取烟草无菌苗的叶片 （或上述消过毒的叶片），剪成（0.5～1cm） *(0.5～1cm)大小的小块，接种于诱导培养 基MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中诱导 愈伤组织，在此培养基上能诱导出愈伤组 织并能够诱导出不定芽。 三）不定芽生根： 将在愈伤组织中生成的不定芽移栽到1/2 MS培养基中，其目的是诱导不定芽生根， 使其发育成烟草小植株。
第九天（诱导生成愈伤组织）
接种第十九天，绿色生长点进一步发育形成了不定芽， 不定芽长度最长可达1 cm 。
第十九天（长出幼叶）
将不定芽在无菌条件下，从芽的基部切下，然后插入生根培养基 中（1/2 MS），诱导生根。
芽的生根情况