实验5蚕豆根尖细胞微核检测技术
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微核试验自70 年代初产生以来的近30 年的时间里,在环境 物质遗传毒理检测方面发挥了重要的作用。它以经济、简便、 快速、敏感、特异、准确等特点,已成为检测染色体损害的致突 变剂和环境污染物的快速初筛试验,已广泛用于筛检具有染色体 损伤作用的致突变剂(Mutagens) 和环境污染物( Environmental Pollutants) 。
一般认为微核是有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。
这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主 核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时， 它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。微核率的多少与和 作用因子的剂量或辐射累积效应有正相关。
二 目的
微核测试用于辐射损伤、辐射保护、化学诱变剂、新药试验、食 品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断。
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17
随着分子生物学技术的迅速发展和不断渗透到微核研究中, 使微核试验的检测应用范围不断扩大,现已发展成为能同时检测 染色体断裂、染色体丢失、分裂延迟、不分离、DNA 损伤修复 障碍、Hprt 基因突变、细胞凋亡、细胞分裂不平衡等多种遗传 损害终点 。
自20 世纪70 年代Heddle 和Schmid 利用啮齿类骨髓细胞建 立了微核试验检测方法以来,各国都在不断研究探索微核试验技 术。主要从三个方面来进行:一是探索微核试验的实验技术,即研 究材料、实验方法、给药方式、染毒途径、制片方法、染色方 法等;二是利用微核试验来检测各种致突变物质;三是通过微核试 验来预测疾病。
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2）污染指数（pollution index)
污染指数（PI)=样品实测MN‰ 平均值/标准水MN‰ 平均值 PI在 0- 1.5 区间为基本无污染
1.5-2.0区间为轻度污染 2.0-3.5区间为中度污染 3.5以上为严重污染 注：1）对严重污染的水环境，监查处理时造成根尖死亡，应稀释 后再做测试； 2）如RT> 35℃，MN本底会增高，但可经污染指数数据处理， 不会影响监测结果。
实验５ 蚕豆根尖细胞微核检测技术
一 原理
微核(Micronucleus,MCN)，也叫卫星核，是真核生物细胞中的一 种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核是 各种理化因子，如辐射，化学药剂对分裂细胞作用产生的。在细胞 间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以 下。其折光率及细胞化学反应性质与主核一样，也具有合成DNA的 能力。
二分体时a 期微核
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➢倒位的细胞学特征： 粗线期倒位圈；后期桥和断片；微核
➢倒位的遗传效应： 改变重组率；基因重排
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微核(micronucleus ,MN) 是指位于生物细胞的细胞质中独 立于主核,直径小于主核1/ 20～1/ 3 ,完全与主核分开的圆形或 椭圆形的微小核。它可以是整条染色体,也可以是染色体断片, 染色性与主核一致,其中部分微核具有DNA 复制能力。微核是 由于外界损害因素使染色体发生断裂,细胞进入下一次分裂时, 染色体不能随有丝分裂进入子细胞,而导致染色体丢失或断裂, 从而形成一个或数个小核.
将微核观察记录于表上
片号
镜检日期 镜检者
各次观察的 细胞数与微 核数
微核数/细胞 数
总计
微核千分率 （MN%o)平 均值
a
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1）各测试样品（包括对照组）微核千分率（MN‰) 的计算为：
MN‰=某测试样点（或对照）观察到的微核数/某测试样点（或对照）观察的细
胞数）
MN‰ 在10‰以下的为基本污染 10‰ - 18 ‰ 区间为轻度污染 18 ‰ - 30 ‰区间为中度污染 30 ‰以上为严重污染 注：每个处理观察3个根尖，每个根尖记数1000个细胞，统计其中 含微核的细胞数然后平均，即为该处理的微核千分率。
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微核试验的产生与发展
微核试验创建于20 世纪70 年代初,首先由Heddle 和Schmid 利用啮齿类骨髓细胞建立了微核测定方法 。1970 年Schmid 及 Heddle 用中国金黄地鼠观察了抗肿瘤药三亚胺醌,观察骨髓与外 周血细胞学的变化。并且提出用本来无核的外周血嗜多染红细 胞中MN 发生率来作为微核试验的基本指标,并正式命名为MNT。 此后至70 年代中期,该研究小组的工作,全面奠定了MNT 的理论 及应用基础。经Heddle 等人30 多年的发展,许多国家和国际组 织已将其规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品、环境化学 物质等毒理安全性评价必做的实验 。
绘出一个具微核的蚕豆根尖细胞图。
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附微核识别标准：
1、凡是主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核； 2、小核着色与主核相当或稍浅； 3、小核形态可为圆形，椭圆形，不规则形等。 凡符合以上3条的小核就是微核（micronucleus,MN)
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Baidu Nhomakorabea
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微核形成机制：
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6
附：实验数据的处理和污染程度的划分
学习蚕豆根尖细胞微核制片与检测技术，了解该技术在诱变作 用检测上的应用。
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1
三 材料 蚕豆根尖（新鲜的固定材料）
四 步骤 1 蚕豆浸种催芽 2 待测液对根尖的处理 3 根尖细胞的恢复培养 4 根尖的固定
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5 根尖的酸水解：将固定的幼根放入青霉素瓶中，用dH 2 O 浸洗2 次，除去水后加入5N HCL 将幼根泡住，放入30OC水浴中水解28 min 左右（水解时间与水温有反相关关系），待幼根软化（同时变 为半透明）即可取出，用dH 2 O 浸洗幼根2次，5min/次。 6 制片：将幼根放在擦净的载片上，用解剖针截下4mm左右的根尖 部分，捣碎，加入1-2滴改良苯酚品红染色液，染色10分钟左右， 然后加盖片，压片。 7 镜检：先在低倍镜下找出具微核的细胞，再转入高倍镜进行仔细 观察。 五 作业
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In an individual heterozygous for a paracentric inversion,
the chromosomes form an inversion loop during pairing
in prophase I.
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后期Ⅰ染色体桥
后期Ⅰ染色体桥和染色体断片
一般认为微核是有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。
这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主 核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时， 它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。微核率的多少与和 作用因子的剂量或辐射累积效应有正相关。
二 目的
微核测试用于辐射损伤、辐射保护、化学诱变剂、新药试验、食 品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断。
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随着分子生物学技术的迅速发展和不断渗透到微核研究中, 使微核试验的检测应用范围不断扩大,现已发展成为能同时检测 染色体断裂、染色体丢失、分裂延迟、不分离、DNA 损伤修复 障碍、Hprt 基因突变、细胞凋亡、细胞分裂不平衡等多种遗传 损害终点 。
自20 世纪70 年代Heddle 和Schmid 利用啮齿类骨髓细胞建 立了微核试验检测方法以来,各国都在不断研究探索微核试验技 术。主要从三个方面来进行:一是探索微核试验的实验技术,即研 究材料、实验方法、给药方式、染毒途径、制片方法、染色方 法等;二是利用微核试验来检测各种致突变物质;三是通过微核试 验来预测疾病。
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2）污染指数（pollution index)
污染指数（PI)=样品实测MN‰ 平均值/标准水MN‰ 平均值 PI在 0- 1.5 区间为基本无污染
1.5-2.0区间为轻度污染 2.0-3.5区间为中度污染 3.5以上为严重污染 注：1）对严重污染的水环境，监查处理时造成根尖死亡，应稀释 后再做测试； 2）如RT> 35℃，MN本底会增高，但可经污染指数数据处理， 不会影响监测结果。
实验５ 蚕豆根尖细胞微核检测技术
一 原理
微核(Micronucleus,MCN)，也叫卫星核，是真核生物细胞中的一 种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核是 各种理化因子，如辐射，化学药剂对分裂细胞作用产生的。在细胞 间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以 下。其折光率及细胞化学反应性质与主核一样，也具有合成DNA的 能力。
二分体时a 期微核
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➢倒位的细胞学特征： 粗线期倒位圈；后期桥和断片；微核
➢倒位的遗传效应： 改变重组率；基因重排
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微核(micronucleus ,MN) 是指位于生物细胞的细胞质中独 立于主核,直径小于主核1/ 20～1/ 3 ,完全与主核分开的圆形或 椭圆形的微小核。它可以是整条染色体,也可以是染色体断片, 染色性与主核一致,其中部分微核具有DNA 复制能力。微核是 由于外界损害因素使染色体发生断裂,细胞进入下一次分裂时, 染色体不能随有丝分裂进入子细胞,而导致染色体丢失或断裂, 从而形成一个或数个小核.
将微核观察记录于表上
片号
镜检日期 镜检者
各次观察的 细胞数与微 核数
微核数/细胞 数
总计
微核千分率 （MN%o)平 均值
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1）各测试样品（包括对照组）微核千分率（MN‰) 的计算为：
MN‰=某测试样点（或对照）观察到的微核数/某测试样点（或对照）观察的细
胞数）
MN‰ 在10‰以下的为基本污染 10‰ - 18 ‰ 区间为轻度污染 18 ‰ - 30 ‰区间为中度污染 30 ‰以上为严重污染 注：每个处理观察3个根尖，每个根尖记数1000个细胞，统计其中 含微核的细胞数然后平均，即为该处理的微核千分率。
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微核试验的产生与发展
微核试验创建于20 世纪70 年代初,首先由Heddle 和Schmid 利用啮齿类骨髓细胞建立了微核测定方法 。1970 年Schmid 及 Heddle 用中国金黄地鼠观察了抗肿瘤药三亚胺醌,观察骨髓与外 周血细胞学的变化。并且提出用本来无核的外周血嗜多染红细 胞中MN 发生率来作为微核试验的基本指标,并正式命名为MNT。 此后至70 年代中期,该研究小组的工作,全面奠定了MNT 的理论 及应用基础。经Heddle 等人30 多年的发展,许多国家和国际组 织已将其规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品、环境化学 物质等毒理安全性评价必做的实验 。
绘出一个具微核的蚕豆根尖细胞图。
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附微核识别标准：
1、凡是主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核； 2、小核着色与主核相当或稍浅； 3、小核形态可为圆形，椭圆形，不规则形等。 凡符合以上3条的小核就是微核（micronucleus,MN)
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Baidu Nhomakorabea
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微核形成机制：
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附：实验数据的处理和污染程度的划分
学习蚕豆根尖细胞微核制片与检测技术，了解该技术在诱变作 用检测上的应用。
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三 材料 蚕豆根尖（新鲜的固定材料）
四 步骤 1 蚕豆浸种催芽 2 待测液对根尖的处理 3 根尖细胞的恢复培养 4 根尖的固定
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5 根尖的酸水解：将固定的幼根放入青霉素瓶中，用dH 2 O 浸洗2 次，除去水后加入5N HCL 将幼根泡住，放入30OC水浴中水解28 min 左右（水解时间与水温有反相关关系），待幼根软化（同时变 为半透明）即可取出，用dH 2 O 浸洗幼根2次，5min/次。 6 制片：将幼根放在擦净的载片上，用解剖针截下4mm左右的根尖 部分，捣碎，加入1-2滴改良苯酚品红染色液，染色10分钟左右， 然后加盖片，压片。 7 镜检：先在低倍镜下找出具微核的细胞，再转入高倍镜进行仔细 观察。 五 作业
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In an individual heterozygous for a paracentric inversion,
the chromosomes form an inversion loop during pairing
in prophase I.
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后期Ⅰ染色体桥
后期Ⅰ染色体桥和染色体断片