流感病毒实验室PCR检测技术【实用参考】
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（2）将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋密封； 每袋装一份标本。
（3）在采样管上用油性记号笔做好标记用塑料袋密 封。同时填写人感染猪流感监测病例标本原始登记 表，用另一塑料袋密封。
（4）将标本密封袋放入专用运输箱内，放入冰排， 然后以柔软物质填充，内衬具有吸水和缓冲能力的 材料。同一患者2份以上的密封标本，可以放在同 一塑料袋内再次做密封。所有容器必须有生物危险 标识。
▪ A类感染性物质使人染病或使人和动物都染病者 联合国编号为UN2814，其运输专用名称为危害人 的感染性物质；
▪ 仅使动物染病者联合国编号为UN2900，其运输专 用名称为仅危害动物的感染性物质。
流感病毒实验室PCR检测技术
A类感染性物质的包装与标签
流感病毒实验室PCR检测技术
临床标本的包装源自文库
（1）标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡及圈 的塑料管里，拧紧。
流感病毒实验室PCR检测技术
标本采集（二）
血清： ➢采集5-10ml全血放入带垫圈的螺口管中，
不加抗凝剂，待血液凝固分离血清，-20℃ 保存，血凝块灭菌处理后弃掉； ➢采集时间：入院后24小时；14-28天或出院 当日。
流感病毒实验室PCR检测技术
采样液的要求
▪ 标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存 ▪ 采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素 ▪ 最佳采样液：Hank’s液，Eagel’s液,生理盐水 ▪ BD15ML采样管 ▪ 拭子是聚脂纤维杆可折断，不推荐棉拭和木杆
院内进一步传播扩散，因而此时实验室检测可以采用 免疫荧光、快速抗原检测（快诊）等技术进行病理诊 断，并且在有可能的情况下进行耐药性检测。
流感病毒实验室PCR检测技术
禽流感(H5N1)病毒的检测方法
抗原检测
•IFA •ELISA •胶体金
诊断快速； 特异度高； 灵敏度低；
核酸检测 •PCR •MDD •NASBA
标本采集（一）
▪ 主要采集上呼吸道标本 ▪ 鼻咽拭子：将棉签平行于上颚插入鼻孔，保持几
秒吸收分泌物。 ▪ 口咽拭子：拭抹咽后壁和扁桃体部位，避免触及
舌部；迅速将棉签放入无菌、内装3-5ml样本运 送液及带垫圈的螺口塑料管中，在靠近顶端处折 断，旋紧管盖并密封。 ▪ 气管分泌液：收集气管吸取液或支气管灌溉液510ml放入无菌、带垫圈的50ml螺口塑料管中，立 即密封。
抗体检测 •HI •MN •SRH
诊断快速； 特异度高； 灵敏度高； 得不到病毒；
特异度高；
无法进行早 期诊断；
病毒分离
•细胞分 离
•鸡胚分 离
金标准； 病毒可用于其 它研究； 需要较严格的 实验条件；
流感病毒实验室PCR检测技术
实验室检测方法
▪ 推荐的检测方法 ▪ 用Real-time RT-PCR 方法检测猪流行性感
流感病毒实验室PCR检测技术
临床样本收集的注意事项
▪ 操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护 ▪ 采集标本要有一定力度 ▪ 标本采集后应迅速至于冰上或者4℃以下保存，因为
流感病毒对热很敏感 ▪ 标本管上写明：医院名称，标本号，患者姓名，性别，
采样日期 ▪ 标本采集后4℃保存，尽量在24小时内送到实验室进
▪ 快速流感抗原检测 ▪ 可以区分A 和B 型流感病毒，不能区分亚
型快速检测实验A 型流感阳性的病例符合 可能病例的标准 ▪ 但由于和其它检测方法相比灵敏度较低， 因此，快速检测阴性结果可能是假阴性， 不能作为猪流感感染的最后诊断。
流感病毒实验室PCR检测技术
快诊方法的特点
➢ 操作简单 ➢ 快速（＜30min） ➢ 教过容易判断和解释 ➢ 无仪器设备需求，可用于疫情现场检测 ➢ FluA和FluB ➢ 不能进行亚型的鉴别
冒（ H1N1 病毒）病毒。检测A 型流感病 毒的M 基因、Swine（ H1N1）的HA 基因 和NP 基因，以及质控对照RNP 基因 ▪ 确诊猪流感病毒A/H1N1 的唯一可靠的方 法是进行病毒分离（病毒分离应在BSL-3 实验室进行），并且进行部分/全基因测序。
流感病毒实验室PCR检测技术
其他检测方法
行检测，未能及时进行检测的 应放-70℃或以下保存， 放置4℃不应超过4天
流感病毒实验室PCR检测技术
临床标本运输
▪ 临床标本应按照A 类包装要求运送，并用 干冰运输。
▪ 所有标本应标示清楚。疑似病例标本运送 应包含的信息请参照禽流感标本运输。
流感病毒实验室PCR检测技术
A类感染性物质
▪ 指在运输过程中与之接触能对健康人或动物造成 永久性残疾或致命疾病的感染性物质。此处“接 触”系指感染性物质离开保护性包装与人或动物 的身体接触或经呼吸道吸入的情况。
流感病毒实验室PCR检测技术
佳木斯市疾病预防控制中心
流感病毒实验室PCR检测技术
标本采集
▪ 应遵循标准的流感检测方案 ▪ 应采集鼻拭子和/或咽拭子，和/或依据标
准操作来进行采集。对标本采集者应采取 ▪ 适当的防护。 ▪ 对于标本的处理、储存和运输应遵照流感
病毒A H5N1的操作指南来进行。
流感病毒实验室PCR检测技术
流感病毒实验室PCR检测技术
快诊的应用价值
➢ 感染病例的处理：辅助流感病例的临床治疗策略和医 院处理方案的制定。
➢ 爆发疫情的处理：有助于对爆发疫情的预防控制制度 的建立。
➢ 公共健康：在流感爆发期间，对于公共场所（如商业 区、旅游区）的人群健康，快速诊断将提供有效的信 息以供控制方案的制定，提供有效的公共健康建议。
流感病毒实验室PCR检测技术
实验室检测决策
➢ 流行早期阶段 重点在于控制和预防，此时高灵敏度的检测手段
（如流行株特异性核酸检测）实优先被选择的，目的 在于发现起始病例或病例群，以便能够及时地进行抗 病毒治疗和制定相应的预防策略。
流感病毒实验室PCR检测技术
实验室检测决策
流感已经广泛流行期间 此时的重点在于临床病例的确认，进而防止在医
流感病毒实验室PCR检测技术
临床标本运送、接收和保存
根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务 院424号令）的有关规定，人禽流感标本应当由不少 于两人的专人护送，并采取相应的防护措施，不得通 过公共电（汽）车和城市铁路运输。
标本接受不少于两人，做好记录，办理相关接受手续。 标本保存应设立专库或专柜单独保存
（3）在采样管上用油性记号笔做好标记用塑料袋密 封。同时填写人感染猪流感监测病例标本原始登记 表，用另一塑料袋密封。
（4）将标本密封袋放入专用运输箱内，放入冰排， 然后以柔软物质填充，内衬具有吸水和缓冲能力的 材料。同一患者2份以上的密封标本，可以放在同 一塑料袋内再次做密封。所有容器必须有生物危险 标识。
▪ A类感染性物质使人染病或使人和动物都染病者 联合国编号为UN2814，其运输专用名称为危害人 的感染性物质；
▪ 仅使动物染病者联合国编号为UN2900，其运输专 用名称为仅危害动物的感染性物质。
流感病毒实验室PCR检测技术
A类感染性物质的包装与标签
流感病毒实验室PCR检测技术
临床标本的包装源自文库
（1）标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡及圈 的塑料管里，拧紧。
流感病毒实验室PCR检测技术
标本采集（二）
血清： ➢采集5-10ml全血放入带垫圈的螺口管中，
不加抗凝剂，待血液凝固分离血清，-20℃ 保存，血凝块灭菌处理后弃掉； ➢采集时间：入院后24小时；14-28天或出院 当日。
流感病毒实验室PCR检测技术
采样液的要求
▪ 标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存 ▪ 采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素 ▪ 最佳采样液：Hank’s液，Eagel’s液,生理盐水 ▪ BD15ML采样管 ▪ 拭子是聚脂纤维杆可折断，不推荐棉拭和木杆
院内进一步传播扩散，因而此时实验室检测可以采用 免疫荧光、快速抗原检测（快诊）等技术进行病理诊 断，并且在有可能的情况下进行耐药性检测。
流感病毒实验室PCR检测技术
禽流感(H5N1)病毒的检测方法
抗原检测
•IFA •ELISA •胶体金
诊断快速； 特异度高； 灵敏度低；
核酸检测 •PCR •MDD •NASBA
标本采集（一）
▪ 主要采集上呼吸道标本 ▪ 鼻咽拭子：将棉签平行于上颚插入鼻孔，保持几
秒吸收分泌物。 ▪ 口咽拭子：拭抹咽后壁和扁桃体部位，避免触及
舌部；迅速将棉签放入无菌、内装3-5ml样本运 送液及带垫圈的螺口塑料管中，在靠近顶端处折 断，旋紧管盖并密封。 ▪ 气管分泌液：收集气管吸取液或支气管灌溉液510ml放入无菌、带垫圈的50ml螺口塑料管中，立 即密封。
抗体检测 •HI •MN •SRH
诊断快速； 特异度高； 灵敏度高； 得不到病毒；
特异度高；
无法进行早 期诊断；
病毒分离
•细胞分 离
•鸡胚分 离
金标准； 病毒可用于其 它研究； 需要较严格的 实验条件；
流感病毒实验室PCR检测技术
实验室检测方法
▪ 推荐的检测方法 ▪ 用Real-time RT-PCR 方法检测猪流行性感
流感病毒实验室PCR检测技术
临床样本收集的注意事项
▪ 操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护 ▪ 采集标本要有一定力度 ▪ 标本采集后应迅速至于冰上或者4℃以下保存，因为
流感病毒对热很敏感 ▪ 标本管上写明：医院名称，标本号，患者姓名，性别，
采样日期 ▪ 标本采集后4℃保存，尽量在24小时内送到实验室进
▪ 快速流感抗原检测 ▪ 可以区分A 和B 型流感病毒，不能区分亚
型快速检测实验A 型流感阳性的病例符合 可能病例的标准 ▪ 但由于和其它检测方法相比灵敏度较低， 因此，快速检测阴性结果可能是假阴性， 不能作为猪流感感染的最后诊断。
流感病毒实验室PCR检测技术
快诊方法的特点
➢ 操作简单 ➢ 快速（＜30min） ➢ 教过容易判断和解释 ➢ 无仪器设备需求，可用于疫情现场检测 ➢ FluA和FluB ➢ 不能进行亚型的鉴别
冒（ H1N1 病毒）病毒。检测A 型流感病 毒的M 基因、Swine（ H1N1）的HA 基因 和NP 基因，以及质控对照RNP 基因 ▪ 确诊猪流感病毒A/H1N1 的唯一可靠的方 法是进行病毒分离（病毒分离应在BSL-3 实验室进行），并且进行部分/全基因测序。
流感病毒实验室PCR检测技术
其他检测方法
行检测，未能及时进行检测的 应放-70℃或以下保存， 放置4℃不应超过4天
流感病毒实验室PCR检测技术
临床标本运输
▪ 临床标本应按照A 类包装要求运送，并用 干冰运输。
▪ 所有标本应标示清楚。疑似病例标本运送 应包含的信息请参照禽流感标本运输。
流感病毒实验室PCR检测技术
A类感染性物质
▪ 指在运输过程中与之接触能对健康人或动物造成 永久性残疾或致命疾病的感染性物质。此处“接 触”系指感染性物质离开保护性包装与人或动物 的身体接触或经呼吸道吸入的情况。
流感病毒实验室PCR检测技术
佳木斯市疾病预防控制中心
流感病毒实验室PCR检测技术
标本采集
▪ 应遵循标准的流感检测方案 ▪ 应采集鼻拭子和/或咽拭子，和/或依据标
准操作来进行采集。对标本采集者应采取 ▪ 适当的防护。 ▪ 对于标本的处理、储存和运输应遵照流感
病毒A H5N1的操作指南来进行。
流感病毒实验室PCR检测技术
流感病毒实验室PCR检测技术
快诊的应用价值
➢ 感染病例的处理：辅助流感病例的临床治疗策略和医 院处理方案的制定。
➢ 爆发疫情的处理：有助于对爆发疫情的预防控制制度 的建立。
➢ 公共健康：在流感爆发期间，对于公共场所（如商业 区、旅游区）的人群健康，快速诊断将提供有效的信 息以供控制方案的制定，提供有效的公共健康建议。
流感病毒实验室PCR检测技术
实验室检测决策
➢ 流行早期阶段 重点在于控制和预防，此时高灵敏度的检测手段
（如流行株特异性核酸检测）实优先被选择的，目的 在于发现起始病例或病例群，以便能够及时地进行抗 病毒治疗和制定相应的预防策略。
流感病毒实验室PCR检测技术
实验室检测决策
流感已经广泛流行期间 此时的重点在于临床病例的确认，进而防止在医
流感病毒实验室PCR检测技术
临床标本运送、接收和保存
根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务 院424号令）的有关规定，人禽流感标本应当由不少 于两人的专人护送，并采取相应的防护措施，不得通 过公共电（汽）车和城市铁路运输。
标本接受不少于两人，做好记录，办理相关接受手续。 标本保存应设立专库或专柜单独保存