%9a%84人皮肤成纤维细胞表型转化中的作用

ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ激酶信号通路在ＴＧＦ－β１诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化中的作用

胡永亮

刘真

焦大凯

马恬

王常勇

贾赤宇

目的　观察ＴＧＦ－［１对人皮肤成纤维细胞表型转化的作用是否受到ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ激酶 信号通路的影响，以探究该通路是否参与了人皮肤成纤维细胞的表型转化。方法　原代培养人皮 肤成纤维细胞，将第４代细胞用ＴＧＦ－β１（　１０　ｎｇ／ｍｌ）刺激后，分不同作用时间（０、３、６、２４ｈ）提取细胞 内总蛋白。ＢＣＡ法测定总蛋白浓度，Ｗｅｓｔｅｒｎ　－ｂｌｏｔ检测α－ＳＭＡ的表达水平；并用相同的方法检测不 同浓度ＴＧＦ－β１（０、２、１０、５０　ｎｇ／ｍｌ）刺激人皮肤成纤维细胞后，α－平滑肌肌动蛋白（α－ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ，α－ＳＭＡ）的表达水平。用ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ激酶信号通路阻断剂Ｙ－２７６３２处理后，再用ＴＧＦ－β１刺激， 作为实验组，将未作处理的正常细胞作为空白对照组，Ｙ－２７６３２（１０　μｍｏｌ／Ｌ）组作为阴性对照组，只 用ＴＧＦ－β１（　１０　ｎｇ／ｍｌ）刺激组作为阳性对照组，分别检测α－ＳＭＡ的表达差异。使用ＡＮＯＶＡ对蛋白 表达量进行统计学分析，Ｐ　＜０．０５为差异有统计学意义。结果 １０　ｎｇ／ｍｌ　ＴＧＦ－β１按不同作用时间 刺激人皮肤成纤维细胞后，α－ＳＭＡ的表达量分别为：０ｈ为１．０，３ｈ为１．９＋０．２、６ｈ为２．１±０．１， ２４　ｈ为３．１±０．１。２４　ｈ较其他３个时间点α－ＳＭＡ表达量明显上升（ｎ＝４，Ｐ＜０．０５）。不同浓度 ＴＧＦ－β１刺激人皮肤成纤维细胞后，α－ＳＭＡ的表达量分别为：０　ｎｇ／ｍｌ为１．０，２　ｎｇ／ｍｌ为１．４±０．２， １０　ｎｇ／ｍｌ为３．２±０．１，５０　ｎｇ／ｍｌ为３．１±０．２。１０　ｎｇ／ｍｌ表达量明显高于０　ｎｇ／ｍｌ和２　ｎｇ／ｍｌ（ｎ　＝４， Ｐ　＜０．　０５），较５０　ｎｇ／ｍｌ差异无统计学意义（ｎ＝４，Ｐ＞０．０５）。用Ｙ－２７６３２（１０　μｍｏｌ／Ｌ）处理后，再用 ＴＧＦ－β１刺激，细胞的表型转化明显受到抑制，实验组α－ＳＭＡ的表达量（１．２±０．２）较阳性对照组 （２．９±０．１）明显降低（ｎ＝５，Ｐ　＜０．０５），与空白对照组（１．０）和阴性对照组（１．１±０．１）相比差异均 无统计学意义（ｎ＝５，Ｐ＞０．　０５）。结论　ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ激酶信号通路参与了　ＴＧＦ－β１诱导的人皮肤成纤 维细胞表型转化过程。

成纤维细胞； ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ激酶信号通路；转化生长因子β１； α－平滑肌肌动蛋

白

Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ　ｋｉｎａｓｅ　ｓｉｇｎａｌ　ｐａｔｈｗａｙ　ｏｎ　ＴＧＦ－β１－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　

ｈｕｍａｎ　ｄｅｒｍａｌ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ＨＵ　Ｙｏｎｇ－ｌｉａｎｇ

ＬＩＵ　ＺｈｅｎＪＩＡＯ　Ｄａ－ｋａｉＭＡ　ＴｉａｎＷＡＮＧ　Ｃｈａｎｇ－ｙｏｎｇ

ＪＩＡ　Ｃｈｉ－ｙｕ

Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｐｌａｓｔｉｃ　Ｓｕｒｇｅｒｙ　ａｎｄ　Ｂｕｒｎ　Ｒｅｐａｉｒ，　３０９　ｔｈ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　ＰＬＡ，　Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００９１，　Ｃｈｉｎａ　

１０．　３７６０／ｃｍａ．　ｊ．　ｉｓｓｎ．　１００９－４５９８．　２０１１．０５．　０１５

国家自然科学基金（３０７７２２５９）

作者单位：１０００９１　北京，解放军第３０９医院整形美容烧伤修复中心（胡永亮、刘真、马恬、贾赤宇）；军事医学科学院基础医学研究所组织

工程研究室（王常勇）；航空工业中心医院整形外科（焦大凯）

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ　ｅｘａｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ　ｋｉｎａｓｅ　ｓｉｇｎａｌ　ｐａｔｈｗａｙ　ｏｎ　ＴＧＦ－β１－

ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｄｅｒｍａｌ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ　４ｔｈ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｄｅｒｍａｌ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＴＧＦ－β１　（１０　ｎｇ／ｍｌ）．　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　α－ＳＭＡ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ＴＧＦ－β１　ｆｏｒ　０，　３，　６，　ａｎｄ　２４　ｈ．　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔ－ＳＭＡ　ｗａｓ　ａｌｓｏ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　

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Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ； ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ　ｋｉｎａｓｅ　ｓｉｇｎａｌ　ｐａｔｈｗａｙ； Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ－ｂｅｔａ１　；

α－ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ａｃｔｉｎ