动物的克隆
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能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来 产生单一类型的抗体呢？
单克隆 抗体
化学性质单一、特异性强的抗体。
设计方案：
一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 杂种细胞
小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。
单抗的制备过程
1.用外界抗原刺激动物（如小鼠，兔子 等），使其产生免疫反应，使B淋巴细
在胚胎和个体发育中，细胞质具有调控细 胞核（包括异源的细胞核）发育的作用。
（核质互作）
体细胞克隆成功的意义：
1、证明了高度分化的细胞也可以回复到类似受精卵时期的 功能。 2、证明了细胞质具有调控细胞核发育的作用。
克隆成功的条件（必备的基础）
1、具有包含物种完整基因组的细胞核的活细胞。(如乳腺上皮 细胞) 2、能有效调控细胞核发育的细胞质物质。（如去核的卵的细 胞质） 3、完成胚胎发育的必要的环境条件。（如诱导核-质重组细胞 生长、分化的实验条件和怀胎母体的子宫环境）
分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。
按照材料的类别分
动物的组织培养包括：
细胞培养、组织培养和器官培养
动物的胚胎、幼龄动物的组织或器官
细胞贴壁过程
接触抑制
细胞在贴壁生长过程中,随着 细胞分裂,数量不断增加,最后 形成一个单层,此时细胞间相 互接触,细胞分裂和生长停止。
分散生长
接触抑制
接触抑制消失
1、高等动物细胞
受精卵 > 胚胎干细胞 > 多能干细胞 > 单能干细胞 > 体细胞
2、低等动物细胞：全能性一般容易体现。
3、癌细胞：仍能逆转为正常细胞。
无论分化还是癌变，变化的都是表现型， 基因组成的完整性可以保留。 为什么动物细胞很难表现出全能性？
动物难以克隆的根本原因
在动物的个体发育过程中，分化的结果使得细胞在形态和功能 上高度特化，这是由于细胞在伴随着它们发育过程中在时间、 空间的变化，基因表达的调控使得细胞中合成了专一的蛋白质。
胞2.利产用生灭抗活体的；融要仙合筛台病具选毒有出或随杂聚机交乙性瘤二醇，细等需胞作
为介导，使经免疫的动物的脾细胞与
可以无限传代筛的选骨出髓能瘤够细胞产融生合特；异 性抗体的杂交瘤细胞
3 .经过筛选、克隆培养，获得来自单 一细胞的既能产生特异抗体、又能无 限增殖的杂交瘤细胞克隆
单抗的制备过程
1.体外培养：通过动物细 胞培养技术获得大量的杂 交瘤细胞，从细胞培养液 中获得的单克隆抗体；
克隆培养法（细胞克隆）
1、概念： 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，
使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。
异质性细胞系 克隆培养
纯系（克隆）
2、特点： 遗传性状均一、表现的性状相似，便于研究
3、最基本要求: 保证所建成的克隆来源于单个细胞
4、适合于克隆的细胞：
对环境有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞
动物细胞全能性的表现程度
受精卵
二分 裂球
四分 裂球
八分 裂球
桑椹胚
囊胚 原肠胚
组织、器官
幼体
1、动物的受精卵，卵裂球含有2-8个细胞时，每个 细胞具有全能性。 2、随着胚胎发育的继续，有的细胞只具有分化出各 种组织细胞的潜能，这样的细胞叫多能干细胞。
3、有的细胞只能分化为一种细胞，叫单能干细胞。
动物细胞全能性的表现程度
５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质 是什么成份？胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质
思考题
６、细胞膜的主要成份是什么？ 蛋白质和磷脂
７、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？
能
８、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散 成单个细胞要注意什么问题呢？ 注意时间的控制
９、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？
应用：
为遗传疾病的治疗、优良品种的培育等提供了重要途径； 对濒危动物的保存也有重要意义。
思考题
1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？ 没有
２、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？是
３、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖
４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理
不能，因为两的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环 境与胰蛋白酶的最适PH较接近 １０、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼 龄动物的组织或器官，请解释原因？ 胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛
思考题
11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？ 易于培养细胞贴壁，进行生长增殖
12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？
动物的基因组中，一类基因是维持生存的，在各种细胞中都处 于活动的状态。另一类基因随着组织器官和发育阶段不同而选 择性表达。
(三)细胞核移植实验和动物的克隆繁殖
1、过程：利用一个细胞的细胞和来取代另一细胞中的细胞核， 形成一个重建的“合子”
体细胞 核移植
胚胎细胞 核移植
胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞
3、重组卵细胞的供体核DNA丢失了来源于乳腺细 胞的阻止核基因表达的调节蛋白。
4、开始第三次分裂时，原乳腺细胞的调节蛋白全 部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，核DNA被重新 编排，胚细胞开始表达自己的基因。
体细胞克隆羊的培育成功，证明了什么？
高度分化细胞经一定技术处理，也可回复 到类似受精卵时期的功能。
组织取材 组织细胞的分离
原代培养
细胞系、细胞株
原代培养物
胰蛋白酶
细胞系：可连续传代的细胞
原代培养物在首次传代时就 成为细胞系。
能连续 培养的
不能连续 培养的
连续细胞系 有限细胞系 （异倍体核型细胞）（二倍体细胞）
（1）恶性细胞系，异体致瘤性， 没有接触抑制
（2）保留接触抑制，不致癌
（遗传物质改变，不死性）
病毒颗粒黏 附细胞表面
灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分 子和磷脂分子重新排布，细胞膜打开， 使细胞发生融合。若病毒不灭活则会 感染细胞，而不能诱导细胞融合。
细胞膜被 病毒颗粒穿通
化学法：聚乙二醇诱导融合 因为聚乙二醇易得、简便，且融合效 果稳定，是目前应用最广泛的方法。
• 物理法：电刺激诱导融合
细胞膜连接
动物细胞培养：体外培养分散后的单个细胞，
使其得以生存，并保持生命活动现象。像体内 一样呈现一定的组织特性。
组 织 培 养
动物组织培养：体外培养动物组织，使其维持
生活状态或生长特性。可以伴随组织分化，但最 终成为细胞培养。
动物器官培养：体外培养动物器官原基、部分
或整个器官，使之得以保存、生长。保持器官的
群体细胞> 单细胞
无限细胞系、转化或肿瘤细胞 >原代细胞、有限细胞系
5、提高细胞克隆形成率的措施：
•选择适宜的培养基 •添加血清 （胎牛血清） (能促进细胞的生长、增殖和贴附) •以滋养细胞支持生长（经射线照射的小鼠成纤维细胞） •激素刺激（胰岛素等） •使用CO2培养箱，调节PH
6、细胞克隆的主要用途：
细胞株：
通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或 细胞系中获得的具有特殊性质的细胞系。
如：单抗细胞株 细胞株一般具有恒定的染色体组型、同工酶类型、 病毒敏感性和生化特性等。
有限细胞株：传代次数有限的细胞株（遗传 物质未改变） 连续细胞株：可连续多次传代的细胞株。
细胞系：泛指可传代的细胞。 细胞株: 具有特殊性质的细胞系。
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂 就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。 13、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？ 将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。
这样的过程叫做传代培养
思考题
14、如何理解原代培养和传代培养？
上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养， 之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养
结构、功能及分化能力。
动物细胞体外培养的特点：
1、生长缓慢，培养时间长 2、更容易受微生物污染（包括细菌、真菌、病毒、 支原体），需要防治污染问题。 3、对培养环境的适应性差，对环境极其敏感（包括 温度、酸碱度等）。 4、对营养要求高，除了无机盐、葡萄糖、氨基酸、 微生物等还需要添加激素和血清。 5、细胞一般繁殖到50代左右就开始退化死亡。
细胞融合、形成杂种细胞
此技术有什么缺点和优点？
1.由于细胞杂交中染色体容易丢失，因此利用 杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产 物减少的对应关系，可以进行基因定位。 2.克服远缘杂交不亲和的障碍
读下面一段文字资料，思考以下问题：
长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反 复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗 体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而 且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发 现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可 以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细 胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想 获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁 殖，即克隆。
快速繁殖、培育 获得细胞 无病毒植株等 或细胞分泌蛋白
动物细胞融合
定义 指用自然或人工方法,使
两个或多个不同的细胞 融合成一个细胞的过程。
不同基因型的细胞之间 的融合就是细胞杂交。
受精作用
两个细胞正在融合
诱导融合的因素
• 生物法：灭活的仙台病毒诱导融合
利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所 特有的。
绵羊“多莉”克隆过程：
目的：为了使供体 细胞的细胞周期同 步化，进而提高克 隆成功率。 处理方法：血清饥 饿法
体细胞克隆羊成功的分子细胞生物学机理： 1、核移植前对乳腺细胞的营养限制性培养（调节 牛血清浓度）和电脉冲细胞融合技术，有利于核 的变化和细胞融合后基因表达分子开关启动。
2、重组卵细胞最初分裂时，转录并未开始。
成分： 无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清 （含动物激素和未知生长因子）等
动物细胞培养过程
（一）培养条件 1、含全部营养物质的培养液
成分：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等
2、适宜的环境条件
无菌、无毒环境：加抗生素，定期更换培养液 适宜的温度和pH值：温度：36.5±0.5 ℃
pH值：7.2-7.4 适宜的ຫໍສະໝຸດ Baidu体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2） 适宜的渗透压等
2.体内培养：将杂交瘤细 胞注射到小鼠的腹腔中增 殖，最后从小鼠的腹水中 提取、纯化单克隆抗体。
思 考：
（1）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？
细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。继承了双亲细胞的遗 传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可 以获得大量单克隆抗体。
免疫原理、细胞融合原理、动物细胞培养原理
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交 动物细胞融合
细胞融合原理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性
细胞融合的方法 去除细胞壁后诱导 使细胞分散后诱
原生质体融合
导细胞融合
诱导方法
电刺激
电融合、PEG、
化学（聚乙二醇） 灭活的仙台病毒
用途
获得杂种植株 制备单克隆抗体
选修三2.3
动物的克隆
1、离体的植物细胞和组织可以通过组织培养技术克隆 成完整的植株，那么动物细胞和组织能否也进行同 样的克隆？ 不能，动物细胞的全能性受到限制，到现在为止 将离体的动物细胞直接克隆成个体还很困难，所以 动物细胞和组织不能进行与植物一样的个体克隆。
2、动物细胞全能性的特点？ 随着细胞分化程度的提高而全能性逐渐受到限制，
（2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗？
有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力的肿瘤细胞，称 为癌细胞，所以瘤细胞不能等同于癌细胞。
（3）制备过程为何要经过两次筛选？
第一次筛选获得多种杂交瘤细胞 第二次筛选出特异抗体的杂交瘤细胞。
（4）制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？
细胞融合技术、细胞培养技术。
(5) 本过程利用了哪些原理？
动物细胞培养过程
（一）培养条件
1、含全部营养物质的培养液
天然培养基：来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基。 营养价值高，成分复杂，不可控。 人工培养基：化学成分明确，便于重复和人工标准化管理和控 制，但是由于人们对细胞生长所需的营养物质还没有完全搞清 楚，因此人工合成的培养基中往往要加入血清等天然成分。
从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系。
用于研究细胞的遗传规律和生理特性。
植物组织培养和动物细胞培养的比较
比较项目 植物组织培养 动物细胞培养
原理
细胞的全能性
细胞增殖
培养基性质
半固体、液体培养 液体培养基
基
培养基特有成分 蔗糖、植物激素 葡萄糖、动物血清
培养结果 培养目的
植物体
细胞株、细胞系
单克隆 抗体
化学性质单一、特异性强的抗体。
设计方案：
一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 杂种细胞
小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。
单抗的制备过程
1.用外界抗原刺激动物（如小鼠，兔子 等），使其产生免疫反应，使B淋巴细
在胚胎和个体发育中，细胞质具有调控细 胞核（包括异源的细胞核）发育的作用。
（核质互作）
体细胞克隆成功的意义：
1、证明了高度分化的细胞也可以回复到类似受精卵时期的 功能。 2、证明了细胞质具有调控细胞核发育的作用。
克隆成功的条件（必备的基础）
1、具有包含物种完整基因组的细胞核的活细胞。(如乳腺上皮 细胞) 2、能有效调控细胞核发育的细胞质物质。（如去核的卵的细 胞质） 3、完成胚胎发育的必要的环境条件。（如诱导核-质重组细胞 生长、分化的实验条件和怀胎母体的子宫环境）
分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。
按照材料的类别分
动物的组织培养包括：
细胞培养、组织培养和器官培养
动物的胚胎、幼龄动物的组织或器官
细胞贴壁过程
接触抑制
细胞在贴壁生长过程中,随着 细胞分裂,数量不断增加,最后 形成一个单层,此时细胞间相 互接触,细胞分裂和生长停止。
分散生长
接触抑制
接触抑制消失
1、高等动物细胞
受精卵 > 胚胎干细胞 > 多能干细胞 > 单能干细胞 > 体细胞
2、低等动物细胞：全能性一般容易体现。
3、癌细胞：仍能逆转为正常细胞。
无论分化还是癌变，变化的都是表现型， 基因组成的完整性可以保留。 为什么动物细胞很难表现出全能性？
动物难以克隆的根本原因
在动物的个体发育过程中，分化的结果使得细胞在形态和功能 上高度特化，这是由于细胞在伴随着它们发育过程中在时间、 空间的变化，基因表达的调控使得细胞中合成了专一的蛋白质。
胞2.利产用生灭抗活体的；融要仙合筛台病具选毒有出或随杂聚机交乙性瘤二醇，细等需胞作
为介导，使经免疫的动物的脾细胞与
可以无限传代筛的选骨出髓能瘤够细胞产融生合特；异 性抗体的杂交瘤细胞
3 .经过筛选、克隆培养，获得来自单 一细胞的既能产生特异抗体、又能无 限增殖的杂交瘤细胞克隆
单抗的制备过程
1.体外培养：通过动物细 胞培养技术获得大量的杂 交瘤细胞，从细胞培养液 中获得的单克隆抗体；
克隆培养法（细胞克隆）
1、概念： 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，
使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。
异质性细胞系 克隆培养
纯系（克隆）
2、特点： 遗传性状均一、表现的性状相似，便于研究
3、最基本要求: 保证所建成的克隆来源于单个细胞
4、适合于克隆的细胞：
对环境有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞
动物细胞全能性的表现程度
受精卵
二分 裂球
四分 裂球
八分 裂球
桑椹胚
囊胚 原肠胚
组织、器官
幼体
1、动物的受精卵，卵裂球含有2-8个细胞时，每个 细胞具有全能性。 2、随着胚胎发育的继续，有的细胞只具有分化出各 种组织细胞的潜能，这样的细胞叫多能干细胞。
3、有的细胞只能分化为一种细胞，叫单能干细胞。
动物细胞全能性的表现程度
５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质 是什么成份？胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质
思考题
６、细胞膜的主要成份是什么？ 蛋白质和磷脂
７、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？
能
８、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散 成单个细胞要注意什么问题呢？ 注意时间的控制
９、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？
应用：
为遗传疾病的治疗、优良品种的培育等提供了重要途径； 对濒危动物的保存也有重要意义。
思考题
1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？ 没有
２、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？是
３、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖
４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理
不能，因为两的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环 境与胰蛋白酶的最适PH较接近 １０、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼 龄动物的组织或器官，请解释原因？ 胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛
思考题
11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？ 易于培养细胞贴壁，进行生长增殖
12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？
动物的基因组中，一类基因是维持生存的，在各种细胞中都处 于活动的状态。另一类基因随着组织器官和发育阶段不同而选 择性表达。
(三)细胞核移植实验和动物的克隆繁殖
1、过程：利用一个细胞的细胞和来取代另一细胞中的细胞核， 形成一个重建的“合子”
体细胞 核移植
胚胎细胞 核移植
胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞
3、重组卵细胞的供体核DNA丢失了来源于乳腺细 胞的阻止核基因表达的调节蛋白。
4、开始第三次分裂时，原乳腺细胞的调节蛋白全 部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，核DNA被重新 编排，胚细胞开始表达自己的基因。
体细胞克隆羊的培育成功，证明了什么？
高度分化细胞经一定技术处理，也可回复 到类似受精卵时期的功能。
组织取材 组织细胞的分离
原代培养
细胞系、细胞株
原代培养物
胰蛋白酶
细胞系：可连续传代的细胞
原代培养物在首次传代时就 成为细胞系。
能连续 培养的
不能连续 培养的
连续细胞系 有限细胞系 （异倍体核型细胞）（二倍体细胞）
（1）恶性细胞系，异体致瘤性， 没有接触抑制
（2）保留接触抑制，不致癌
（遗传物质改变，不死性）
病毒颗粒黏 附细胞表面
灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分 子和磷脂分子重新排布，细胞膜打开， 使细胞发生融合。若病毒不灭活则会 感染细胞，而不能诱导细胞融合。
细胞膜被 病毒颗粒穿通
化学法：聚乙二醇诱导融合 因为聚乙二醇易得、简便，且融合效 果稳定，是目前应用最广泛的方法。
• 物理法：电刺激诱导融合
细胞膜连接
动物细胞培养：体外培养分散后的单个细胞，
使其得以生存，并保持生命活动现象。像体内 一样呈现一定的组织特性。
组 织 培 养
动物组织培养：体外培养动物组织，使其维持
生活状态或生长特性。可以伴随组织分化，但最 终成为细胞培养。
动物器官培养：体外培养动物器官原基、部分
或整个器官，使之得以保存、生长。保持器官的
群体细胞> 单细胞
无限细胞系、转化或肿瘤细胞 >原代细胞、有限细胞系
5、提高细胞克隆形成率的措施：
•选择适宜的培养基 •添加血清 （胎牛血清） (能促进细胞的生长、增殖和贴附) •以滋养细胞支持生长（经射线照射的小鼠成纤维细胞） •激素刺激（胰岛素等） •使用CO2培养箱，调节PH
6、细胞克隆的主要用途：
细胞株：
通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或 细胞系中获得的具有特殊性质的细胞系。
如：单抗细胞株 细胞株一般具有恒定的染色体组型、同工酶类型、 病毒敏感性和生化特性等。
有限细胞株：传代次数有限的细胞株（遗传 物质未改变） 连续细胞株：可连续多次传代的细胞株。
细胞系：泛指可传代的细胞。 细胞株: 具有特殊性质的细胞系。
当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂 就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。 13、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？ 将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。
这样的过程叫做传代培养
思考题
14、如何理解原代培养和传代培养？
上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养， 之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养
结构、功能及分化能力。
动物细胞体外培养的特点：
1、生长缓慢，培养时间长 2、更容易受微生物污染（包括细菌、真菌、病毒、 支原体），需要防治污染问题。 3、对培养环境的适应性差，对环境极其敏感（包括 温度、酸碱度等）。 4、对营养要求高，除了无机盐、葡萄糖、氨基酸、 微生物等还需要添加激素和血清。 5、细胞一般繁殖到50代左右就开始退化死亡。
细胞融合、形成杂种细胞
此技术有什么缺点和优点？
1.由于细胞杂交中染色体容易丢失，因此利用 杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产 物减少的对应关系，可以进行基因定位。 2.克服远缘杂交不亲和的障碍
读下面一段文字资料，思考以下问题：
长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反 复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗 体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而 且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发 现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可 以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细 胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想 获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁 殖，即克隆。
快速繁殖、培育 获得细胞 无病毒植株等 或细胞分泌蛋白
动物细胞融合
定义 指用自然或人工方法,使
两个或多个不同的细胞 融合成一个细胞的过程。
不同基因型的细胞之间 的融合就是细胞杂交。
受精作用
两个细胞正在融合
诱导融合的因素
• 生物法：灭活的仙台病毒诱导融合
利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所 特有的。
绵羊“多莉”克隆过程：
目的：为了使供体 细胞的细胞周期同 步化，进而提高克 隆成功率。 处理方法：血清饥 饿法
体细胞克隆羊成功的分子细胞生物学机理： 1、核移植前对乳腺细胞的营养限制性培养（调节 牛血清浓度）和电脉冲细胞融合技术，有利于核 的变化和细胞融合后基因表达分子开关启动。
2、重组卵细胞最初分裂时，转录并未开始。
成分： 无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清 （含动物激素和未知生长因子）等
动物细胞培养过程
（一）培养条件 1、含全部营养物质的培养液
成分：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等
2、适宜的环境条件
无菌、无毒环境：加抗生素，定期更换培养液 适宜的温度和pH值：温度：36.5±0.5 ℃
pH值：7.2-7.4 适宜的ຫໍສະໝຸດ Baidu体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2） 适宜的渗透压等
2.体内培养：将杂交瘤细 胞注射到小鼠的腹腔中增 殖，最后从小鼠的腹水中 提取、纯化单克隆抗体。
思 考：
（1）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？
细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。继承了双亲细胞的遗 传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可 以获得大量单克隆抗体。
免疫原理、细胞融合原理、动物细胞培养原理
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交 动物细胞融合
细胞融合原理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性
细胞融合的方法 去除细胞壁后诱导 使细胞分散后诱
原生质体融合
导细胞融合
诱导方法
电刺激
电融合、PEG、
化学（聚乙二醇） 灭活的仙台病毒
用途
获得杂种植株 制备单克隆抗体
选修三2.3
动物的克隆
1、离体的植物细胞和组织可以通过组织培养技术克隆 成完整的植株，那么动物细胞和组织能否也进行同 样的克隆？ 不能，动物细胞的全能性受到限制，到现在为止 将离体的动物细胞直接克隆成个体还很困难，所以 动物细胞和组织不能进行与植物一样的个体克隆。
2、动物细胞全能性的特点？ 随着细胞分化程度的提高而全能性逐渐受到限制，
（2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗？
有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力的肿瘤细胞，称 为癌细胞，所以瘤细胞不能等同于癌细胞。
（3）制备过程为何要经过两次筛选？
第一次筛选获得多种杂交瘤细胞 第二次筛选出特异抗体的杂交瘤细胞。
（4）制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？
细胞融合技术、细胞培养技术。
(5) 本过程利用了哪些原理？
动物细胞培养过程
（一）培养条件
1、含全部营养物质的培养液
天然培养基：来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基。 营养价值高，成分复杂，不可控。 人工培养基：化学成分明确，便于重复和人工标准化管理和控 制，但是由于人们对细胞生长所需的营养物质还没有完全搞清 楚，因此人工合成的培养基中往往要加入血清等天然成分。
从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系。
用于研究细胞的遗传规律和生理特性。
植物组织培养和动物细胞培养的比较
比较项目 植物组织培养 动物细胞培养
原理
细胞的全能性
细胞增殖
培养基性质
半固体、液体培养 液体培养基
基
培养基特有成分 蔗糖、植物激素 葡萄糖、动物血清
培养结果 培养目的
植物体
细胞株、细胞系