清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶及黏蛋白基因表达的影响

清金化痰汤对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织中性粒细胞弹性蛋

白酶及黏蛋白基因表达的影响

目的探讨清金化痰汤调节慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠气道黏液高分泌的作用机制。方法Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、清金化痰汤组与克拉霉素组，每组10只。除正常组外，其余3组均采用气管内注入脂多糖和烟熏复合法建立COPD模型，分别给予生理盐水、清金化痰汤、克拉霉素灌胃，连续30 d。实验第31日，处死大鼠提取肺组织，每组随机选取6只，采用实时荧光定量PCR检测肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）、表皮生长因子（EGFR）、黏蛋白5AC（MUC5AC）基因表达。结果模型组大鼠肺组织NE、MUC5AC mRNA 表达较正常组升高；与模型组比较，清金化痰汤组、克拉霉素组NE、MUC5AC mRNA表达均显著降低，清金化痰汤组NE、MUC5AC mRNA表达较克拉霉素组显著降低；清金化痰汤组EGFR mRNA表达较模型组显著降低。结论清金化痰汤通过调节NE/EGFR/MUC5AC信号转导通路，抑制气道黏液高分泌。

Abstract：Objective To investigate the action mechanism of Qingjin Huatan Decoction on regulating COPD rats with mucus hypersecretion in airway. Methods Fifty 6-8 week old Wistar male rats were randomly divided into healthy group，model group，Qingjin Huatan Decoction group，clarithromycin group，10 rats in each group. Except for healthy group，all the other groups were used the combination method of injecting LPS and smudging to establish COPD models. The last three groups were fed with normal saline，Qingjin Huatan Decoction，clarithromycin respectively for 30 days. On the 31st day of the experiment，the rats were put to death to take lung tissue. 6 rats from each group were chosen randomly，and the protein expressions of NE，EGFR and MUC5AC mRNA in lung tissue were detected by real-time fluorescent quantitative PCR. Results The expressions of NE，MUC5AC mRNA in lung tissue of COPD rats were higher than the healthy group. Compared with model group，the expressions of NE mRNA and MUC5AC mRNA in Qingjin Huatan Decoction group and clarithromycin group were markedly lower，while the expressions of NE，MUC5AC mRNA in Qingjin Huatan Decoction group were significantly lower than those in clarithromycin group. The expression of EGFR mRNA in Qingjin Huatan Decoction group was lower than that in model group. Conclusion Qingjin Huatan Decoction can inhibit mucus hypersecretion in airway through NE/EGFR/MUC5AC signal transduction pathway.

Key words：Qingjin Huatan Decoction；COPD；mucus hypersecretion；MUC5AC；neutrophil elastase；rats

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种严重危害人类健康的慢性呼吸系统疾病，据世界卫生组织估计该病是当前世界第4位疾病死亡病因。气道黏液高分泌是影响COPD病情和预后的独立危险因素。黏蛋白5AC（MUC5AC）是黏蛋白最重要的成分，COPD急性加重期（AECOPD）由杯状细胞分泌为主的MUC5AC过

度表达具有突出的病理意义。我们既往的研究表明，清金化痰汤可以显著缓解AECOP患者的临床症状，改善痰液性状，降低患者痰液中MUC5AC的表达[1]。本研究观察COPD模型大鼠肺组织表皮生长因子（EGFR）、MUC5AC、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）基因的表达，初步探讨清金化痰汤抗黏液高分泌的作用机制。

1 实验材料

1.1 动物

雄性清洁级Wistar大鼠50只，体质量（250±20）g，北京华阜康生物科技股份有限公司，动物许可证号SCXK（京）2009-0007。1.2 药物

清金化痰汤（瓜蒌皮、黄芩、连翘、漏芦、浙贝母、清半夏、前胡、桔梗）等，免煎颗粒剂由北京康仁堂药业有限公司提供；克拉霉素片，丽珠集团制药厂，批号120201，0.25 g/片。

1.3 主要试剂与仪器

脂多糖（LPS，美国Sigma公司）；大前门牌香烟（上海卷烟厂）；Trizol RNA 提取试剂，购自Invitrogen公司；M-MLV逆转录酶购自Promega公司；SYBR Green PCR Master Mix试剂盒购自BIO-RAD公司；引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。实时荧光定量PCR仪（BIO-RAD公司）。气管插管针（16号静脉套管针），自制烟熏箱。

2 实验方法

2.1 造模

采用烟熏加气道内滴注LPS的复合方法复制AECOPD气道黏液高分泌模型[2]。LPS气道内滴入：于实验第1、14日气道内滴注浓度为1 mg/mL的LPS溶液0.2 mL。3.5%水合氯醛腹腔麻醉大鼠，将大鼠仰卧位固定在鼠板上，头高尾低呈45°角放置，暴露声门，在光源下将套管针迅速插入大鼠气管内，拔出套管针钢芯，以棉丝放在塑料套管外口判断是否成功，插管成功后，先抽取空气0.3 mL 后抽取LPS溶液0.2 mL，通过套管针快速注入气管，然后将大鼠固定板直立旋转，左右摇晃30次，使LPS液能均匀分布于双肺。实验第2-13日、15-30日给予烟熏，每次10只大鼠，用8支香烟，熏30 min，气道内滴注日不烟熏。

2.2 分组及给药

Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、清金化痰汤组、克拉霉素组，每组10只，饲养于二级动物室，将烟熏装置置于通风橱进行熏烟。实验动物每日给药量2.16 g/kg，相当于人临床用量的7倍。正常组正常饲养，其余3组分别给予生理盐水、清金化痰汤14 g/kg、克拉霉素83.3 mg/kg灌胃。每日1次，连续30 d。