安捷伦1260型HPLC使用操作

流动相过滤
为了除去流动相中的杂质,保护系统和色谱 柱，在流动相使用完后，装入新的溶剂前应使 用抽滤瓶对溶剂进行过滤。
滤膜：有机膜和水 系膜，二者不能混 用。一般HPLC流 动相过滤使用孔径 为0.45m的滤膜。 针对混合溶剂首选 有机滤膜过滤。
滤膜
流动相超声与脱气
为了除去溶解在流动相中得气泡,降低基线 噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中 超声30min左右。 对于溶解在流动 相中的极微气体，安 捷伦1260HPLC四元 泵中集合了脱气机， 可以进一步对混合后 的流动相进行脱气处 理。
四元泵 流动 相瓶 自动进样器 排气阀 指 示 灯 电 源 开 关
色谱柱
柱温箱
二极管阵列 检测器
流动相选择
流动相过滤 流动相超声与脱气
流动相冷却
流动相选择
分类：组成分-单组分和多组分 极性-极性、弱极性、非极性 常用溶剂：甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、 四氯化碳等 （溶剂最好为HPLC级，水为超纯水） 其中多采用二元或多元组合溶剂作为流动相， 通过调节各组分的比例改变流动相的极性，已 达到最佳的分离效果，对于部分情况还可以加 入缓冲盐，调节出峰时间和达到改善峰型的效 果。
色谱峰 数据
色谱峰手动积分
报告→打印报告
源自文库
主峰要求： 分离度﹥1.5 0.95≤对称因子≤ 1.05 塔板数8000以上 主峰数据
色谱峰实例
* D A D 1 A , S ig = 2 4 8 , 4 R e f = o f f ( V P A - T D M - 2 \ V P A - S C J 2 0 1 5 - 0 3 - 2 4 1 1 - 3 1 - 1 6 \ V P A - 2 0 1 5 0 3 2 4 0 0 1 . D )
流动相冷却
流动相在超声机中长时间超声后，由于水 分子振动摩擦，使水温上升，因此流动相瓶中 的溶剂也会被加热。加热后的流动相进入液相 系统和色谱柱后，会影响基线噪声的增加，使 平稳时间延长。
1260HPLC及化学工作站开机使用与关机
打开计算机
打开主机电源
点击仪器1联机进入工作站
关闭排气阀
调节流速与流动相比例
* D A D 1 A , S ig = 2 4 8 , 4 R e f= o ff (V P A -T D M -2 \V P A -S C J 2 0 1 5 -0 4 -0 1 1 1 -3 6 -4 9 \V P A -2 0 1 5 0 4 0 1 0 0 5 .D )
m AU 80
m A U 8 0
至少平稳30min
跑基线
单次样品：样品命名
序列样品：命名与序 列表设臵
进 样 检 测
样品色谱图
进入仪器1脱机
打开数据文件夹 打开样品色谱图
色谱峰编辑
色谱峰数据 打印报告 色谱峰实例
打开仪器1脱机
数据文件夹
样品数据
序列样品数据 单次样品数据 色谱图 色谱图编辑
滁州市一院临床药学室 沈陈军
仪器的组成
操作前准备 开机及关机 工作站使用 数据分析 注意事项
主体
安捷伦1260HPLC 流动相瓶、四元泵、自动进样器、柱温箱、 二极管阵列检测器
附件
电脑、显示器、打印机等
安捷伦1260HPLC 流动相瓶 四元泵 自动进样器 柱温箱 二极管阵列检测器
排气（A/B/C/D）
打开柱温箱
逐步增大流速检查压力
稳定后打开检测器
样品命名
进样检测
稳定后清洗针与管路
保存数据
跑基线
冲洗管路及关机
关机前，用90%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，
流量1.0mL/min，再用100%有机溶剂（甲醇） 冲0.5小时，然后保存方法和仪器设臵。 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。 关掉液相主机各模块电源开关，拔掉电源插头。 做好仪器使用登记。
变，时间久了柱子填料会坍陷或松动，最终柱 压下降，所以泵开始和结束前要注意缓慢改变 流速。
谢谢！
超过三天（易长菌），影响基线平衡； 仪器使用后，应用90%水冲洗柱子和系统0.5-1h， 流量1.0mL/min，再用100甲醇冲洗0.5h；
开机时，打开排气阀，设臵流动相为100%水，
泵流量5.0mL/min，若此时显示压力＞10bar， 则应更换排气阀里的过滤白头。
流速突然变大或突然变小会导致柱压的突然改
进入工作站
主界面 方法和各模块参数设臵
跑基线
样品命名与进样检测
进入工作站
主 界 面
在各模块中 空白处点击 右键，选择 “方法”编 辑参数。
方 法 和 各 模 块 参 数 设 臵
1bar≈14.5psi≈0.1MPa=100kPa 不同仪器单位不同
视图→在线信号→信号窗口1
7 0
6 0
5 0
空白
4 0
70
3 0
2 0
1 0
60
0 m in
5
1 0
1 5
2 0
* D A D 1 m A U 8 0
A , S ig = 2 4 8 , 4
R e f= o ff (V P A -T D M -2 \V P A -S C J
2 0 1 5 -0 4 -0 1
1 1 -3 6 -4 9 \V P A -2 0 1 5 0 4 0 1 0 0 8 .D )
7 0
50
6 0
5 0
标准品
1 2
4 0
40
3 0
2 0
1 0
30
0 0 5 1 0 1 5 2 0 m in
1 环己烷羧酸
20 10
2 丙戊酸钠
0 5 10 15 20 m in
患者丙戊酸钠血药浓度检测色谱图
氘灯是易耗品，分析前应最后开灯，不分析样
品应及时关闭氘灯；
流动相不要使用多日存放的蒸馏水，一般不易