诊断临床病原体检查教学案例

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2020/8/10
• 多 瓶 接 种 ① 厌 氧 菌 菌 血 症 占 菌 血 症 515%, ②有10%菌血症不是单一微生物引起, ③长期使用抗生素患者可呈现L型菌. ④免 疫低下患者易发生真菌感染;根据情况做 二种血培养瓶的培养,需氧和厌氧或需氧和 L型培养。
• 标本采集操作 应注意严格无菌操作,避免 污染杂菌。
• 快速血浆反应素试验(Rapid Plasma reagin test,RPR):是VDRL抗原的改良,优点是肉 眼可读出结果。
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• 梅毒螺旋体抗原血清试验 用梅毒螺旋体或其 成分来作抗原,测定抗梅毒螺旋体IgG抗体。
• 梅毒螺旋体血凝试验(TPHA) 敏感性和特异 性均高,常作为梅毒感染的确证试验。
,12张 • 培养温度、时间:35℃,18-20小时 • 判断标准:NCCLS当年版
2020/8/10
• “敏感”即表示测试菌可被测定药物常规剂量 给药后在体内达到的血药浓度所抑制;
• “耐药”即表示测试菌不能被在体内感染部位 可能达到的抗菌药物浓度所抑制,临床治疗无 效。
• “中介”者提示该细菌对常规用量体液或组织 中的药物浓度的反应性低,使用高于正常给药 量有疗效。
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2.肥达反应(widal reaction WR)
• 伤寒沙门菌的菌体O抗原和鞭毛H抗原均可刺 激机体产生相应抗体,O抗原刺激机体产生的 是IgM,出现较早,H抗原产生的是IgG,出现 较晚,持续时间较长。
• WR利用伤寒和副伤寒沙门氏菌菌液为抗原,检 测病人血清有无相应抗体的一种凝集试验。
• 细菌感染 细菌培养是最重要的确诊方法 • 病毒感染 细胞培养是最常用的病毒分离方法
,抗原和血清学检测临床应用最广泛 • 真菌感染 真菌培养和形态学检测最常用 • 寄生虫感染 从病人血液、体液、排泄物中检
查出寄生虫的某一发育虫期,是目前最可靠的 诊断方法
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细菌感染免疫检测
1.血清链球菌溶血素“O”试验 • 溶血素“O”是一种A群链球菌的毒素,属于菌
5.血清学检测 检测病原体刺激机体产生的抗体 ,IgM型抗体检出为新近感染指标。
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细菌wenku.baidu.com药性检查
抗菌药物的作用机制 • 干扰细菌细胞壁的合成,使细菌不能生长繁殖
。 • 影响细菌细胞蛋白质的合成,使细菌丧失生长
繁殖的物质基础。 • 破坏核酸的代谢,阻碍遗传信息的复制。
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培养检查 • 培养法对症状很轻或无症状的男性、女性患者
或慢性患者都是较敏感的方法,培养后需进行 菌落形态,革兰染色,氧化酶试验和糖发酵试 验。 • 淋病的确诊试验。
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医院感染常见病原体检查
• 医院感染(nosocomial infection)是指患者 在入院时既不存在,亦不处于潜伏期,而在医 院内发生的感染,包括医院内获得而在出院后 发病的感染。
2020/8/10
2.青霉素耐药的肺炎链球菌(PRSP) • 青霉素是治疗肺炎链球菌的首选药物,耐
药菌株对青霉素治疗无效。 • 应用苯唑西林纸片检测。
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3. 超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的检测
• 主要由革兰阴性杆菌产生,质粒介导的对 青霉素和三代头孢菌素以下类抗生素广泛 耐药。
体蛋白,能溶解红细胞。溶血素“O”具有抗原 性,可使人产生相应抗体,称抗链球菌溶血素 “O”(anti-streptolysin “O”test,ASO)。 • A群链球菌感染2-3周后,血清中可出现抗溶血 素“O”的抗体。 • 滴度升高表明近期有A群链球菌感染,常见于 活动性风湿热、风湿关节炎、急性肾小球肾炎 等。
• 标本送检 接种血液样本的培养瓶应立即送 检,如因某种原因不能立即送检时,勿放 冰箱存放。
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• 脑脊液及其它体液 对于脑脊液常见病原菌如 脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌, 抵抗力弱,采集后应立即接种。对于胸、腹水 和心包积液由于含菌量少宜接种量大或按血培 养处理。
• 眼、耳标本 用无菌拭子采样,可用角膜刮屑 。
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2.病原体特异性抗原检测 主要用于不易培养的 微生物的快速诊断,用已知抗体,利用免疫荧 光、酶联免疫技术等检测标本中的抗原。
3.病原体核酸的检测 主要是PCR和DNA探针杂交 检测标本中的病原体。
4.病原体分离培养和鉴定 细菌培养,将标本接 种相应的培养基上,根据菌落形态、生化反应 鉴定细菌;不易培养的微生物进行细胞培养。
• 侵入性诊疗技术的广泛应用,人口的老龄化和 慢性病患者增多,细菌耐药情况的日趋严重使 医院感染日益受到重视。
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一. 流行病学
• 感染源 病原体来源于住院病人.医务人员、 探视者、医院环境及未彻底消毒的医疗器械、 血液制品等。
• 感染途径 内窥镜、插管、介入疗法使感染机 会增加。
• 易感人群 免疫力低下的住院患者是主要的高 危人群。
感染性疾病实验诊断程序
• 正确、规范采集和运送标本 • 通过直接显微镜查见病原体,或检出病原
体抗原成分,或通过分子生物学方法检测 到病原体核酸,结合病人病史、症状、体 征,可作出初步诊断 • 同时,进一步对病原体进行分离和鉴定, 确定感染病原体的类型 • 对细菌和真菌感染要进行抗生素敏感试验
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• 抗生素的广泛使用所造成的抗生素的 选择性压力使医院感染控制面临严峻 挑战,因此对细菌耐药性的发生机制 和耐药监测便成为临床微生物检测中 的一项重要工作。
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抗菌药物的选择性压力
耐药菌株极少
抗生素暴露
耐药菌株为 主
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细菌的耐药性及其发生机制
1.遗传学机制
• 染色体介导的耐药 为细菌本身所固有的耐药 ,一般具有种属特异性,如肠球菌耐头孢菌素 ,一些革兰阴性杆菌耐万古霉素等。
• 药敏结果 不同细菌对各抗生素敏感百分率
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• 医院环境中细菌污染的监测和消毒效果的 监测
• 环境的污染是引起医院内感染的危险因素 ,包括病区内空气、物体表面、医务人员 的手;
• 对于手术器械、高压消毒的灭菌情况都应 作监测。
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• 产酶株不能单独采用青霉素类和三代头孢 治疗。
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临床感染常见病原体的检查
1.流行病学特点 • 新现和再现传染病 • 多重耐药的细菌的出现 • 医院感染和条件致病菌的增加 2.临床类型 • 细菌感染是临床常见的感染类型 • 病毒感染发病率最高 • 真菌感染的发病率明显上升
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2.梅毒的检测
• 暗视野显微镜检查:在皮损处,用玻片刮取组 织渗出液或淋巴结穿刺液,见有活动的梅毒螺 旋体。
• 主要依靠血清学试验,根据所用抗原不同,梅 毒血清试验分为以下两大类:
• 非梅毒螺旋体抗原血清试验 用心磷脂作抗原 ,测定血清中抗心磷脂抗体,亦称反应素。本 试验敏感性高而特异性较低,目前一般作为梅 毒的筛选试验。
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• 性 病 研 究 实 验 室 试 验 ( Venereal Disease Research Laboratory test,VDRL)用心磷脂 、卵磷脂及胆固醇为抗原,需用显微镜读取结 果。
• 不 加 热 血 清 反 应 素 试 验 ( Unheated Serum Reagin USR)也是VDRL抗原的改良,敏感性及 特异性与VDRL相似。
标本的采集、运送和检查方法
一.标本的采集和运送 • 所有采集标本均置于无菌或清洁容器中,不能
接触消毒剂和抗菌药物。 血液:一般在发热初期和高峰期采集,如已用抗
生素,则在下次用药之前采集。成人采血量为 每次10-20毫升,儿童和婴儿为1.5-5毫升。专用 血培养瓶。 • 血标本采集次数 根据研究,仅采血一次分离率 约占80%,培养2次分离率约占90%,而培养三次 的分离率约占99%。
• O抗体>1:80,H抗体>1:160 A、B、C抗体>1:80
• O升高H不高 可能是感染早期或其他沙门菌 • H升高O不高 可能是既往感染或预防接种
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性传播性疾病的实验室检查
• 性 传 播 性 疾 病 ( sexual transmitted disease STD)是一组主要通过性行为为传播途径的侵 犯皮肤、性器官和全身多脏器损害的疾病。
病原学和临床类型 • 细菌-淋病奈瑟菌,杜克雷嗜血杆菌 • 螺旋体-梅毒螺旋体 • 病毒-HIV、HSV、HPV • 支原体、衣原体 • 真菌、原虫
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1.AIDS检测 • 分为HIV-1和HIV-2两型,主要通过检测血液中
相应抗体诊断,ELISA用于筛选,Western Blot 用于确诊。 • HIV感染后数日或数周内常不能检出抗体,称 窗口期,95%的受染者在3个月内可测出抗体 。
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104 cfu/ml
2.液体稀释法
mg/ml 4
2
1
0.5 0.25 0.125 0
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耐药菌监测试验
1.耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)检测 • 包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和
耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCoN) 。 • 不能使用青霉素和头孢菌素类抗生素治疗。
2020/8/10
3.淋病检测 涂片检查 • 取患者尿道分泌物或宫颈分泌物,革兰氏染色
,在多形核白细胞内找到革兰氏阴性双球菌。 • 涂片对男性急性淋病,阳性率在95%左右,可
初步诊断。女性宫颈分泌物中杂菌多,敏感性 和特异性较差,阳性率仅为50-60%,且有假阳 性,应以培养为主。
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• 主动外排机制 如铜绿假单胞菌对多种常用的 抗生素耐药,主要是由于其外膜存在着独特的 药物泵出系统。
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药物敏感试验
1.纸片扩散法(K-B法) • 菌液浓度:0.5麦氏浊度(1.5×108CFU/mL) • 琼脂平板厚度:4mm(9cm,25ml;15cm,
60ml) • 抗生素纸片:9cm,6-7张(4张左右);15cm
• 泌尿生殖道标本 可用尿道口分泌物、外阴糜 烂面分泌物、宫颈口分泌物和前列腺液等。
• 创伤、组织和脓肿标本 首先清创,用无菌拭 子取材。
2020/8/10
二.检查方法
1.显微镜检查 • 悬滴法用于病原体的动力观察,暗视野或
相差显微镜用于病原体的生长、形态、运 动方式。 • 染色检查:革兰氏染色用于细菌和真菌的 检查;抗酸染色用于结核菌及放线菌的检 查;墨汁染色用于新型隐球菌的检查。
• 质粒介导的耐药 耐药基因易于传播,目前该 类耐药在临床上占有重要地位。如由质粒介导 的产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的大肠埃希 菌和肺炎克雷伯菌。
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2.生物化学机制
• 产生灭活酶或钝化酶 这些酶可使抗生素失活 。如产生β-内酰胺酶、氨基糖苷类钝化酶、氯 霉素乙酰基转移酶等。
• 作用靶位的改变 作用靶位改变后使抗生素失 去作用位点。如甲氧西林耐药的葡萄球菌可以 产生一种新的青霉素结合蛋白,使细菌与β-内 酰胺类抗生素的亲和力降低而导致耐药。
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二.临床类型
• 下呼吸道感染 为我国最常见的医院感染类型 • 尿路感染 主要为侵入性操作所引起 • 手术切口感染 • 胃肠道感染 • 血液感染 • 皮肤和软组织感染
2020/8/10
• 病房送检—实验室检测统计--院内感染科汇总 发布
• 病原学诊断 病原学检查:标本涂片或培养分离 病房每月、季各菌种检出率 不同标本不同菌种发生率及倾向
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