血清胆固醇的测定
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血清胆固醇的测定
余留海
2013.11.26
血清胆固醇的测定（氧化酶法）
Assays for Serum Cholesterol
一、原理 二、测定方法 三、参考值 四、临床意义 五、方法学评价 六、注意事项 七、小结
一、原理
血清中总胆固醇（TC）包括游离胆固 醇（FC）和胆固醇酯（CE）两部分。血清 中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆 固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固 醇氧化酶的氧化作用下生成胆甾烯酮和过 氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和酚 存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯 醌亚胺非那腙的红色醌类化合物。
血清总胆固醇水平分为三级：合适范围 5.72mmol/L(220mg/dl)。边缘升高5.235.69mmol/L(201-219mg/dl)；过高值 >5.72mmol/L(220mg/dl)。 血清总胆固醇水平增高是导致冠心病的独立 危险因素。血清总胆固醇越高，发生动脉粥样硬 化的风险越大，时间也越早。血清总胆固醇每降 低1%，发生冠心病的危险性可减少2%。但另一 方面，血清总胆固醇降到多低合适？目前认为， 将 血清总胆固醇保持在2.1-5.2mmol/L(90200mg/dl)范围内较为合适。对已有动脉粥样硬 化或冠心病者，应将胆固醇降至180mg/dl以下。
五、方法学评价
1. 线性范围： 0.05～12.9mmol/L，r≥0.990 2. 精密度：CV ≤3.0%，批间差≤5.0%， 3. 准确度：相对偏差 ±10% 4. 试剂空白吸光度≤0.150（波长505nm，光径 10mm） 5. 左旋多巴、尿酸、vitc、胆红素、谷胱甘肽等 达一定浓度时可竞争过氧化氢使结果偏低 6. 半胱氨酸（促G生成）使结果偏高。
各管充分混匀置37水浴10分钟后， 室温冷却测定
3. 分光光度计测定方法：波长505nm，
以空白管调零，测定标准管和样品管 吸光度值，按公式计算测定结果。
Au 计算公式：Glu含量（mmol/L）= ×Cs As
其中：Cs=5.22 mmol/L
三、参考值：
正常：﹤5.17mmol/L 轻度增高：5.17～6.47mmol/L
四、临床意义：
1. 血清胆固醇升高：动脉粥样硬化、肾病综合 征、肝细胞性黄疸、阻塞性黄疸及重症糖尿病等。 血清总胆固醇是是指血液中所有脂蛋白所含 胆固醇之总和。总胆固醇包括游离胆固醇和胆固 醇酯，肝脏是合成和贮存的主要器官。胆固醇是 合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素 D等生理活性物质的重要原料，也是构成细胞膜 的主要成分，其血清浓度可作为脂代谢的指标。 指临床上将血总胆固醇增高称为高胆固醇血症。
六、注意事项
1. 样品为空腹血清、血浆（肝素或EDTANa或K 抗凝）； 2. 制备血清时防止红细胞溶血； 3. 样品应在低温条件下运输保存。 4. 试剂使用后立即盖紧瓶盖，避免污染。 5. 避免误食和皮肤、粘膜接触。
小结
谢谢！
2.血清胆固醇降低：恶性贫血、溶血性贫血、 甲状腺机能亢进、急性感染，营养不良等。 甲亢患者在发病期间其血清胆固醇水平往往 明显低于正常值，或者属于临界值范围；当通过 一段时间的有效治疗后，血清胆固醇又会逐渐回 复至正常水平。其降低的机理是，甲亢导致甲状 腺激素大量分泌，而甲状腺激素对脂肪的合成与 分解有很强的促进作用，但是分解更明显。由此 可知，当机体发生甲亢时，体内的胆固醇合成与 分解排泄同时都有所增加，但分解排泄比合成更 明显，而同时，甲状腺激素还通过增强腺苷环化 酶－cAMP系统的影响和致敏组织对儿茶酚胺、 生长素等脂肪动员激素的作用而促进脂肪溶解。 所以导致血清中的胆固醇会有所降低。
二、测定方法
1、试剂 R1：胆固醇酯酶（CE） ≥0.4KU/L 胆固醇氧化酶（COD） ≥0.2KU/L 过氧化物酶（POD） ≥5.0KU/L 4-氨基安替比林（4-APP） 0.5mmol/L R2: 酚 20.0mmol/L 胆酸钠 2.0mmol/L
二、测定方法
2. 加样
试剂蒸 样品管(U) 血 清（ml） 0.02 标 准液（ml） — 蒸 馏水（ml） — 工作试剂（ml） 2.00 标准管(S) — 0.02 — 2.00 空白管 (B) — — 0.02 2.00
胆固醇酯+H2O
CE
胆固醇+脂肪酸
（CE胆固醇酯酶）
胆固醇+O2 COD 4-胆甾+3-烯酮+H2O2 （COD：胆固醇氧化酶）
H2O2+4-AAP+酚
Pห้องสมุดไป่ตู้D H2O+醌亚胺（红色醌类化合物 ）
（4-AAP： 4-氨基氨替比林） （POD：过氧化物酶）
红色醌类化合物生成量与样品中胆固醇含 量成正比，与经过同样处理的胆固醇校准液进行 比较，即可计算出样品中胆固醇的含量。
余留海
2013.11.26
血清胆固醇的测定（氧化酶法）
Assays for Serum Cholesterol
一、原理 二、测定方法 三、参考值 四、临床意义 五、方法学评价 六、注意事项 七、小结
一、原理
血清中总胆固醇（TC）包括游离胆固 醇（FC）和胆固醇酯（CE）两部分。血清 中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆 固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固 醇氧化酶的氧化作用下生成胆甾烯酮和过 氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和酚 存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯 醌亚胺非那腙的红色醌类化合物。
血清总胆固醇水平分为三级：合适范围 5.72mmol/L(220mg/dl)。边缘升高5.235.69mmol/L(201-219mg/dl)；过高值 >5.72mmol/L(220mg/dl)。 血清总胆固醇水平增高是导致冠心病的独立 危险因素。血清总胆固醇越高，发生动脉粥样硬 化的风险越大，时间也越早。血清总胆固醇每降 低1%，发生冠心病的危险性可减少2%。但另一 方面，血清总胆固醇降到多低合适？目前认为， 将 血清总胆固醇保持在2.1-5.2mmol/L(90200mg/dl)范围内较为合适。对已有动脉粥样硬 化或冠心病者，应将胆固醇降至180mg/dl以下。
五、方法学评价
1. 线性范围： 0.05～12.9mmol/L，r≥0.990 2. 精密度：CV ≤3.0%，批间差≤5.0%， 3. 准确度：相对偏差 ±10% 4. 试剂空白吸光度≤0.150（波长505nm，光径 10mm） 5. 左旋多巴、尿酸、vitc、胆红素、谷胱甘肽等 达一定浓度时可竞争过氧化氢使结果偏低 6. 半胱氨酸（促G生成）使结果偏高。
各管充分混匀置37水浴10分钟后， 室温冷却测定
3. 分光光度计测定方法：波长505nm，
以空白管调零，测定标准管和样品管 吸光度值，按公式计算测定结果。
Au 计算公式：Glu含量（mmol/L）= ×Cs As
其中：Cs=5.22 mmol/L
三、参考值：
正常：﹤5.17mmol/L 轻度增高：5.17～6.47mmol/L
四、临床意义：
1. 血清胆固醇升高：动脉粥样硬化、肾病综合 征、肝细胞性黄疸、阻塞性黄疸及重症糖尿病等。 血清总胆固醇是是指血液中所有脂蛋白所含 胆固醇之总和。总胆固醇包括游离胆固醇和胆固 醇酯，肝脏是合成和贮存的主要器官。胆固醇是 合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素 D等生理活性物质的重要原料，也是构成细胞膜 的主要成分，其血清浓度可作为脂代谢的指标。 指临床上将血总胆固醇增高称为高胆固醇血症。
六、注意事项
1. 样品为空腹血清、血浆（肝素或EDTANa或K 抗凝）； 2. 制备血清时防止红细胞溶血； 3. 样品应在低温条件下运输保存。 4. 试剂使用后立即盖紧瓶盖，避免污染。 5. 避免误食和皮肤、粘膜接触。
小结
谢谢！
2.血清胆固醇降低：恶性贫血、溶血性贫血、 甲状腺机能亢进、急性感染，营养不良等。 甲亢患者在发病期间其血清胆固醇水平往往 明显低于正常值，或者属于临界值范围；当通过 一段时间的有效治疗后，血清胆固醇又会逐渐回 复至正常水平。其降低的机理是，甲亢导致甲状 腺激素大量分泌，而甲状腺激素对脂肪的合成与 分解有很强的促进作用，但是分解更明显。由此 可知，当机体发生甲亢时，体内的胆固醇合成与 分解排泄同时都有所增加，但分解排泄比合成更 明显，而同时，甲状腺激素还通过增强腺苷环化 酶－cAMP系统的影响和致敏组织对儿茶酚胺、 生长素等脂肪动员激素的作用而促进脂肪溶解。 所以导致血清中的胆固醇会有所降低。
二、测定方法
1、试剂 R1：胆固醇酯酶（CE） ≥0.4KU/L 胆固醇氧化酶（COD） ≥0.2KU/L 过氧化物酶（POD） ≥5.0KU/L 4-氨基安替比林（4-APP） 0.5mmol/L R2: 酚 20.0mmol/L 胆酸钠 2.0mmol/L
二、测定方法
2. 加样
试剂蒸 样品管(U) 血 清（ml） 0.02 标 准液（ml） — 蒸 馏水（ml） — 工作试剂（ml） 2.00 标准管(S) — 0.02 — 2.00 空白管 (B) — — 0.02 2.00
胆固醇酯+H2O
CE
胆固醇+脂肪酸
（CE胆固醇酯酶）
胆固醇+O2 COD 4-胆甾+3-烯酮+H2O2 （COD：胆固醇氧化酶）
H2O2+4-AAP+酚
Pห้องสมุดไป่ตู้D H2O+醌亚胺（红色醌类化合物 ）
（4-AAP： 4-氨基氨替比林） （POD：过氧化物酶）
红色醌类化合物生成量与样品中胆固醇含 量成正比，与经过同样处理的胆固醇校准液进行 比较，即可计算出样品中胆固醇的含量。