微生物知识及无菌操作注意事项
无菌操作定义和注意事项
无菌操作定义和注意事项无菌操作是指在无菌条件下进行的操作，旨在防止微生物的污染和传播。
以下是关于无菌操作的10条定义和注意事项：1. 无菌操作是在完全无微生物存在的环境中进行的操作，以确保被操作物品的无菌性。
2. 无菌操作需要在无菌流罩或其他类似设备下进行，以提供干净的工作环境。
3. 在进行无菌操作前，操作员需要戴上无菌手套、口罩和实验服，以减少微生物的传播。
4. 所有使用的器械、培养基和试剂必须经过灭菌处理，以杀灭存在的微生物。
5. 在进行无菌操作前，操作台面、仪器和设备都应该进行彻底清洁和消毒。
6. 操作员在进行无菌操作时应注意避免接触其他物品，以防止微生物的传播。
7. 无菌操作的时间应尽量缩短，以减少环境中微生物污染的可能性。
8. 所有操作需要轻柔进行，避免产生气流和颗粒物，以减少微生物的传播。
9. 在无菌操作期间，操作员应经常检查和评估操作区域的无菌状态，以及自身的操作行为是否符合规范。
10. 无菌操作结束后，所有从无菌区域移出的物品都必须进行灭菌处理，以防止微生物的传播。
对于无菌操作的详细描述如下：无菌操作通常在专门的无菌实验室或无菌流罩内进行。
在进行无菌操作之前，操作员需要进行适当的准备工作。
操作员应该穿上无菌手套、口罩和实验服，以减少本人对无菌环境的微生物污染。
所有用于实验的器械、培养基和试剂都需要经过灭菌处理，以确保其无菌性。
在无菌操作过程中，操作员需谨慎操作，以减少微生物的传播。
操作员应将器械和试剂轻柔地放置在无菌工作台上，并将其移动范围限制在操作区域内。
操作员不应过度移动自身，以减少微生物的挥发。
操作员应注意不要触碰操作区域以外的物品，并避免使用手机和其他个人物品，以减少微生物的传播。
在无菌操作结束后，所有从无菌区域移出的物品都需要进行灭菌处理。
这可以通过高温灭菌、化学消毒或紫外线照射等方式进行。
灭菌处理应遵循相应的操作规范，以保证灭菌的有效性。
在进行无菌操作过程中，操作员应经常检查和评估无菌区域的无菌状态，以及自身的操作行为是否符合规范。
微生物实验室无菌操作技术规范
1.目的规范无菌操作流程，减少及避免发生染菌现象出现。
2.使用范围无菌室及洁净区的操作。
3.无菌操作技术原则3.1环境要清洁，在每次无菌操作结束后都需要对环境进行清理、清洗；且避免操作前进行清扫。
3.2做好个人卫生，进入无菌室前需修剪指甲、洗手，穿好无菌服，帽子需遮住所有头发，口罩遮住口鼻。
3.3在无菌操作时，不可讲话，打喷嚏，对怀疑染菌的无菌物品，不可使用。
4.内容4.1.1 准备：工作人员着装整洁，洗手、戴口罩、修剪指甲；备齐用物（如：接种针、接种环、酒精灯、斜面、平皿、摇瓶、75%酒精棉、无菌水等）；核对无菌用品，接种菌种的种类、型号。
4.1.2 所有实验使用的物品都需要进行消毒、灭杀；进入洁净区前需要经传递窗进行紫外表面消毒30min以上；4.1.3 开始实验前需要打开超净台的紫外灯，消毒半个小时以上；超净台避免放入过多的物品（一般只放入当次的实验所有的物品），所使用的试剂和耗材都需事先进行灭菌（灭菌日期超过4天的需重新消毒）。
4.1.4 进入洁净区前关闭紫外灯，并打开风机，等待半个小时以上，使臭氧尽量排放干净。
4.1.5 除去手腕等部位的饰品，穿好无菌服，戴好头套、口罩，做到“三不漏”：不暴漏头发，不暴漏口鼻，不暴漏躯干皮肤和衣物。
4.1.6 双手要进行清洗、消毒。
4.1.7 要经风淋室风淋30秒后再进入洁净室。
4.1.8 在局部百级区域操作要戴一次性无菌手套。
4.1.9 实验操作过程中应尽量减少进入洁净区的人员（不超过4人/间）并尽量减少人员走动。
4.1.10 所有要放入超净工作台的物品都需进过消毒液喷洒擦拭消毒。
4.1.11 无菌物品若取离超净台则视为已污染，不得放回再用；无菌液体在取离超净台前必须密封其开口；密封的无菌液体容器在放入超净台后，对其开口前须对开口在酒精灯火焰上烧烤。
4.1.12 在拆开任何一次性无菌使用耗材的包装时都要在超净台内完成，并须同时保证与细菌直接接触的使用端/面不得与超净台内的任何物品发生触碰。
微生物实验室无菌操作技术手册
微生物实验室无菌操作技术手册1. 引言本手册旨在介绍一种常见的微生物实验室中使用的无菌操作技术，以确保实验结果的可靠性和正确性。
正确的无菌操作可以防止微生物污染，保护实验人员的安全，并促进实验的顺利进行。
2. 无菌操作基础无菌操作是指在无菌条件下进行实验操作，避免微生物的污染和传播。
下面是一些无菌操作的基本原则：- 实验器材和培养基应经过严格的消毒和灭菌处理。
- 实验操作需要在洁净的操作台上进行，操作台上的工具和材料要经过消毒处理。
- 实验人员需要穿戴合适的个人防护装备，如实验服、手套、面罩等。
3. 无菌操作步骤3.1 准备工作- 检查实验室中的消毒设备是否正常运作。
- 检查实验器材和培养基的灭菌情况。
- 穿戴个人防护装备。
3.2 操作台准备- 在操作台上放置消毒过的工具和材料。
- 操作台表面用消毒液擦拭，保持干燥。
3.3 实验器材处理- 使用灭菌钳夹取所需的实验器材，在火焰中烧毁细菌和病毒。
- 使用经过灭菌处理的培养基。
3.4 实验操作- 取出所需的实验器材，避免直接接触无菌物品的非无菌表面。
- 操作时尽量避免产生细菌和病毒的飞溅和浮尘。
- 操作完成后，将实验器材进行消毒处理。
4. 操作注意事项- 所有实验操作都需在无菌条件下进行，尽量避免外界微生物的污染。
- 实验人员要对无菌操作的原则和步骤有清楚的了解，并遵循相应的规定和程序。
- 实验室要定期进行环境监测，确保无菌操作条件的可靠性。
5. 总结无菌操作技术是微生物实验室中非常重要的技术之一。
通过正确的无菌操作，可以保证实验结果的准确性和可重复性，并提高实验的成功率。
实验人员需要掌握无菌操作的基本原则和步骤，并严格遵守相关的操作规范和要求。
微生物知识与无菌操作注意事项
GMP规定 进入洁净生产区的人员不得化妆和佩带饰
穿平常衣服时发菌量为3300～62000个(min·人)； 有口罩发菌量：无口罩发菌量为(1:7)～(1:14)；
咳嗽一次的发菌量为70～700个，喷嚏一次的发菌量 为4000～60000个。
操作人员在洁净区动作尽量要缓慢， 避免剧烈运动，以减少人的发尘量；
洁净区的门应关紧，避免不必要的移 动，以保持洁净区的风速、风量、风型 和风压；
②进行微生物监测：
在药品生产过程中，应按GMP要求不 断进行各项微生物卫生学监测。例如： 对洁净室空气中的浮游菌、沉降菌的 监测；对无菌设备清洁灭菌的验证； 对非无菌药品进行细菌和活菌数测定 和病原菌的限制性检查等。
法规规定：
企业应当对人员健康进行管理，并建立健 康档案。 直接接触药品的生产人员上岗前应当接受健 康检查，以后每年至少进行一次健康检查。
无处不在；
大多数微生物对人类有益；
有些微生物对人类有害；
八大类
真菌：酵母菌、霉菌、大型真菌 细菌：肺炎球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌 放线菌：抗生素如链霉素、土霉素等都是链霉菌
的次生 代谢产物 支原体：肺炎支原体 衣原体：沙眼 立克次体：斑疹伤寒 螺旋体：梅毒
病毒：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，狂犬病毒，流 感病毒。
3、微生物的特点:
基础特性
分布广，种类多。 体积小，面积大； 吸收多，转化快； 生长旺，繁殖快； 适应强，易变异；
1、种类多、分布广
微生物在地球上几乎无处不有，无孔不入，人 的皮肤上，口腔，肠道里都有许多微生物。微 生物聚集最多的地方是土壤。哪里尘埃多，哪 里的微生物就多。
微生物在土壤中的数量最多. 据统计，一克土壤中含有几千万到几百亿的微
无菌操作原则及注意事项
无菌操作原则及注意事项无菌操作是一项非常重要的实验室技术，它能够有效地防止实验中的细菌、病毒、真菌等污染因子的存在，从而保证实验结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍无菌操作的原则和注意事项。
一、无菌操作的原则：1.空气无菌：在无菌操作的环境中，空气中的微生物应控制在最低限度。
实验室应采用特殊的手术间或实验室通风设备，以保证空气的无菌。
2.操作器材无菌：操作器材及实验用品应用无菌盖或经高温高压灭菌后使用，以保证操作器材的无菌。
二、无菌操作的注意事项：1.消毒准备：进入实验室进行无菌操作前，应对实验员和器材进行适当的消毒处理。
实验员需进行手部消毒，并穿戴实验服、手套和面具等防护设备。
2.操作台面无菌：操作台面应先用酒精或其他适当消毒剂进行彻底清洁，并用紫外线灯照射消毒20-30分钟，保证操作台面的无菌性。
3.灭菌器材准备：无菌操作中的各种器材应事先经过高压蒸汽灭菌或紫外线照射消毒。
灭菌后的器材应放在无菌条件下保存，以免再次被污染。
4.医用手套的使用：在无菌操作中，医用手套是必不可少的防护装备。
在每次操作前，应先检查手套有无损坏，确保手套完好无破损。
同时，更换手套时应注意避免手套与无菌区域以外的物体接触，以防止交叉污染。
5.减少空气污染：在无菌操作过程中，应尽量减少普通空气接触无菌物质的机会。
操作时应避免突然移动，以防止引起气流对无菌物体的污染。
同时，在操作过程中，尽量减少口述和呼吸，以减少口腔和鼻腔中的微生物进入实验区。
6.混合液体无菌操作：在制备无菌培养基或混合液体时，应在无菌台下进行操作，操作手法应快速而准确。
同时，在混合液体时，要注意不要让混合液体溅出，以免污染周围环境。
7.管子和培养器皿的打开和关闭：在打开和关闭管子和培养器皿时，应尽量轻柔，不要产生气流和震动，以防止微生物扩散。
8.反应体系封闭：在无菌操作中，要尽可能将反应体系封闭，避免静置时的气泡运动带来的气流污染。
使用无菌操作时，尽量选择常规实验室使用的无菌试剂。
无菌操作的注意事项
无菌操作的注意事项
无菌操作是在无菌环境下进行的，目的是为了防止微生物的污染和感染。
以下是无菌操作的注意事项：
1.准备工作：在进行无菌操作之前，首先需要准备好无菌器具
和无菌溶液。
无菌器具应保持干燥和密封，无菌溶液应严格按照说明书或药典的要求配制并且在使用前进行热灭菌。
2.个人卫生：在进行无菌操作时，操作人员必须穿着干净的无
菌衣物（如无菌手套、无菌帽、无菌口罩等），并应进行手部消毒。
不得搔抓、咳嗽、打喷嚏等。
3.操作环境：无菌操作室中应保持干净并且有良好的通风系统。
禁止吸烟、喷洒空气杀菌剂等破坏无菌环境的行为。
4.器具准备：无菌器具应在无菌操作室内进行包装，并且应使
用双层包装（如双层塑料袋或锡箔袋）。
在使用前应先检查包装是否有破损或被污染。
5.操作过程：无菌操作时，应避免用手直接接触无菌器具和媒介，选择合适的工具进行操作。
尽量避免产生气溶胶和液滴，并且操作尽量缓慢、轻柔，避免剧烈摇晃或震荡。
6.维持无菌状态：在无菌操作过程中，应经常检查操作区域是
否有污染。
如果发现污染，应立即停止操作并重新准备无菌器具和无菌溶液。
同时，在操作过程中应尽可能保持操作区域的清洁和干燥。
7.操作结束：无菌操作结束后，应将使用过的无菌器具和媒介全部彻底清理和灭菌处理。
污染的物品应放入指定的废物容器中，并进行适当的处置。
总的来说，无菌操作需要严格控制操作环境、个人卫生和器具准备等方面，以确保操作过程中不引入外来微生物的污染。
这样能够保证实验结果的准确性和可靠性，并降低对人体和设备的潜在感染风险。
微生物的无菌操作及接种技术
实验用品
实验用品如培养基、试剂 、玻璃器皿等应经过严格 灭菌处理，确保无菌状态 。
无菌操作原则与规范
操作前准备
实验人员应穿戴整洁的工作服，戴好口罩和帽子，修剪指 甲并洗净双手。同时，检查实验用品是否齐全、无菌状态 是否良好。
操作后处理
实验结束后，及时清理实验台面，将废弃物放入指定容器 内。对实验用品进行清洗和灭菌处理，确保下次实验的无 菌环境。
生长曲线测定
通过测定微生物的生长曲线， 了解其生长速度、延滞期、对 数生长期、稳定期等生长特点 。
代谢产物检测
检测微生物代谢产生的特定物 质，如酶、酸、气体等，以判
断其生长情况和代谢活性。
05
无菌操作在科研实验 中应用举例
遗传学实验：基因转化和表达分析
基因转化
在遗传学研究中，无菌操作是基因转化的关键步骤之一。通过无菌操作，可以将 外源基因导入到受体细胞中，实现基因的转移和整合。
环境微生物学研究
无菌操作在环境微生物学研究中也非常重要。通过无菌操作，可以研究环境微生物的生长、代谢和相互作用等方 面，揭示微生物在环境中的生态功能和水平，确保实验准确性
严格遵守无菌操作规范
在进行微生物实验时，必须严格遵守无菌操作规范，包括 穿戴实验服、戴口罩和手套、使用无菌器材等，以避免实 验过程中的污染。
注意事项
接种针需灼烧灭菌，避免污染；划线时力度要均匀，避免划 破培养基。
液体培养基接种法
操作步骤
在无菌条件下，用接种环沾取少量菌 液，在液体培养基中轻轻搅动，使菌 液均匀分布在培养基中。
注意事项
接种环需灼烧灭菌，避免污染；搅动 时要轻柔，避免产生气泡。
其他特殊无菌操作方法
穿刺接种法
用接种针沾取少量菌液，穿刺到半固体培养基内部，适用于厌氧菌 等需要特殊环境的微生物培养。
无 菌 操 作
适应症
1、诊断性穿刺，确定积液性质 2、治疗性穿刺 ：大量胸腔积液（或积血） 影响呼吸、循环功能，且尚不具备条件施 行胸腔引流术时，或气胸影响呼吸功能者。 脓胸或恶性胸液需胸腔内注入药物者。
目的
①明确胸腔内有无气体、血液或其他积液，并明确气胸 的压力、积液的性状等。 ②大量胸腔积液、积气所致呼吸困难及循环障碍时，抽 吸之可减轻对肺脏的压迫，促使肺膨胀。 ③向胸腔内注射药物进行治疗。 胸腔穿刺术为胸外伤、胸腔积液等常用的诊断和 治疗手段之一，方法简单可靠。
注意事项：
4．不合作或有精神病患者不宜作胸腔穿刺。 5．穿刺针应沿肋骨上缘垂直进针，不可斜向上方， 以免损伤肋骨下缘处的神经和血管。 6.局部麻醉应充分，固定好穿刺针，避免刺破肺组织。 夹紧乳胶管避免气体进入胸腔。
注意事项
7.穿刺抽液量 抽液不可过多过快，严防负压性肺水肿 发生。以诊断为目的者，一般为50～100ml；以减压 为目的时，第一次不宜超过600ml，以后每次不要超 过1000ml。创伤性血胸穿刺时，宜间断放出积血，随 时注意血压，并加快输血输液速度，以防抽液过程中 突然发生呼吸循环功能紊乱或休克。
无菌操作原则：
1、在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区 和非无菌区。 2、执行无菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手， 并将手擦干，注意空气和环境清洁。 3、夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。 4、进行无菌操作时，凡未经消毒的手、臂、均 不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。
无菌操作原则：
5、无菌物品必须保存在无菌包或灭菌容器内，不可暴露 在空气中过久。无菌物与非无菌物应分别放置。无菌 包一经打开即不能视为绝对无菌，应尽早使用。凡已 取出的无菌物品虽未使用也不可再放回无菌容器内。 6、无菌包应按消毒日期顺序放置在固定的柜橱内，并保 持清洁干燥，与非灭菌包分开放置，并经常检查无菌 包或容器是否过期，其中用物是否适量。 7、无菌盐水及酒精、新洁尔灭棉球罐每周消毒一次，容 器内敷料如干棉球、纱布块等，不可装得过满，以免 取用时碰在容器外面被污染。
微生物培养操作及注意事项
引言：微生物培养是微生物学研究中的基础实验技术，通过培养和繁殖微生物可以方便地获取大量的微生物细胞，为微生物学研究、工业生产以及医学诊断提供了重要的手段和依据。
本文将介绍微生物培养的操作步骤和注意事项，帮助读者掌握正确的培养技巧并避免常见的操作错误。
概述：微生物培养操作的目的是为了利用适当的营养条件提供给微生物生长所需的营养物质、温度和pH条件，并且维持适当的氧含量和无菌状态。
在进行微生物培养实验前，需要准备培养基、无菌工具和培养设备，并熟悉培养操作的基本原理和注意事项。
正文：一、选择合适的培养基1.了解微生物的营养需求：不同的微生物对营养物质的需求不同，如碳源、氮源、微量元素等。
了解微生物的营养需求是选择合适的培养基的前提。
2.选择适当的培养基类型：常见的培养基类型包括富养基、平衡盐基和选择性培养基等。
根据实验目的和微生物特性选择合适的培养基类型。
3.调整培养基的pH值：对于不同的微生物，其最适生长的pH 值有所差异。
在制备培养基时，需调整pH值到适宜范围。
4.添加适量的固化剂：常用的固化剂有琼脂、洋菜粉等，添加适量的固化剂有助于培养基的凝胶化。
5.培养基的无菌处理：制备好的培养基需要高温高压灭菌，以确保培养基的无菌状态。
二、准备培养设备和无菌工具1.烧杀法灭菌无菌器具：包括试管、烧杀针、培养皿等容器，在进行培养前，需要将这些容器进行高温高压灭菌处理，以确保其无菌。
2.使用无菌技术：在进行微生物培养操作时，需要掌握无菌技术，如洗手消毒、穿戴无菌手套、操作台面无菌处理等，以避免污染。
三、培养操作步骤1.取出无菌培养基：在无菌条件下，将培养基倒入无菌容器中，如试管、培养皿等。
2.加入适量的微生物菌液：从已经纯化和鉴定的微生物菌液中取出适量的菌液，通过吸管、针头等无菌工具加入到培养基中。
3.均匀混合微生物菌液和培养基：使用无菌技术将微生物菌液和培养基充分均匀混合，以保证微生物的均匀分布。
4.完成培养器具的封闭：将加入微生物菌液的培养器具盖好，并用无菌膜或橡皮塞封口，防止外界细菌的侵入。
食品微生物检测基础知识汇总
食品微生物检测基础知识汇总一、微生物基础知识1、微生物的概念：微生物是一群体形细小，构造简单的微小生物的总称。
即凡是肉眼看不见的生物通称为微生物。
2、微生物的特点：个体小、结构简单、分布广、繁殖快、容易发生变异。
3、细菌生长的四个时期：平缓期、对数期、延滞期、衰老期。
4、微生物繁殖需要的条件：(1).充足的营养(2).合适的酸碱度(3).适宜的温度(4).必要的气候环境。
5、常用检验方法镜检接种培养二、无菌操作1、微生物操作要求迅速，结果正确且不污染周围环境。
因此，操作必须在无菌室内进行，使用的培养基及各种器材需经灭菌处理，整个过程还要符合无菌要求。
2、无菌室的要求工作室应矮小、平整，面积4平方米，采光面积宜大，周围需设缓冲走廊，无菌室缓冲间应有供消毒空气用的紫外灯。
3、无菌室的使用与管理（1）无菌室应保持清洁整齐，室内仅放最必须的检验用具。
每2-3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门及地面，然后用3%石碳酸水溶液消毒空气，最后紫外灯杀菌半小时。
（2）无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作台，然后打开紫外灯杀菌30min。
进入无菌室前，必须清洁双手，在缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽、工作鞋。
（3）操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话，以保持环境的无菌状态。
4、器材及场所的灭菌消毒高压蒸汽灭菌工作服、口罩、培养基稀、释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121℃灭菌半小时，不同的培养基有不同的要求，应分别处理。
不能随便改变杀菌温度，温度过低，达不到杀菌效果，灭菌效果以芽孢是否杀死为判断标准。
温度过低，芽孢未被杀死，温度过高，则营养成分损失，状态也较差。
高温能杀死细菌的原因：细菌细胞基本是蛋白质，蛋白质不耐高温，生物催化剂-酶也是蛋白质，蛋白质受高温结构严重破坏，发生凝固便会死亡。
湿热比干热更容易杀菌的原因是：蛋白质含水越多，加热时越容易凝固，湿热作用的水蒸气传导力和穿透力都较强，更容易破坏蛋白质，从而更容易杀死细菌。
微生物检查中无菌操作注意事项
微生物检查中无菌操作注意事项无菌操作是在微生物实验室中进行微生物检查的关键步骤，目的是避免实验样本被外界的微生物污染，确保实验结果的准确性和可靠性。
下面是无菌操作时需要注意的事项：1.消毒和准备工作：（1）实验室的台面、仪器、试剂瓶等必须经过充分的消毒，可以使用酒精或消毒液进行彻底擦拭。
（2）培养器具，如试管、移液器、培养皿等要经过高温高压灭菌或使用紫外线灭菌箱进行灭菌处理。
（3）实验人员需要穿戴好无菌实验服、手套，并使用无菌技术进行消毒。
2.操作环境：（1）无菌操作应在高洁净实验室中进行，可以利用洁净工作台或操作隔离器进行操作。
（2）在操作过程中，应保持操作区域内无风或微风，以避免空气中的微生物进入实验物品。
3.无菌技术：（1）经验培养物的传代应在无菌条件下进行，以避免可能存在的细菌、真菌或病毒的污染。
（2）操作时，要将试管或培养皿口向火焰吹热，以杀灭外界的微生物。
（3）要合理选择各种工具并进行正确使用，如使用无菌注射器取样、移液器吸取培养基等。
（4）在操作中尽量避免开盖时间过长，以防止空气中的微生物进入操作区域。
（5）使用完后，必须将工具进行高温高压灭菌处理，以杀灭残留的微生物。
4.操作技巧：（1）在进行移液操作时，务必注意吸液的速度，避免引起气泡，从而使空气中的微生物进入试验物品。
（2）在移液过程中，避免吸液器底部接触到实验物品，以防细菌污染。
（3）在进行接种操作时，应将培养皿或试管倾斜45度角，以避免细菌通过空气附着到试验物品上。
（4）接种时尽量避免接触到培养基表面，避免污染培养基。
5.废弃物处理：（1）实验过程中产生的废弃物，如培养皿、试管、移液器等，都需要进行合理处理。
（2）废弃物应放入无菌塑料袋中，并用高温高压灭菌处理，防止废弃物中的微生物扩散到其他地方。
总之，无菌操作是微生物检查中至关重要的环节，需要实验人员具备严谨的实验态度和操作技巧。
通过严格遵守无菌操作的注意事项，可以有效地保证微生物检查的准确性和可靠性。
微生物无菌操作的原则和注意事项
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微生物检查中无菌操作注意事项
微生物检查中无菌操作注意事项一、关于采用酒精棉球消毒的注意事项1.用酒精棉球擦拭双手，包括手掌、手背，尤其是手指，更换一个酒精棉球擦拭酒精灯附近（约10cm）桌面。
2.点燃酒精灯，在酒精灯附近拆器皿包装，并对器皿做相应标记。
3.用酒精棉球再次擦拭双手，开始实验操作。
4.消毒用酒精棉球湿度以不挤压出酒精为宜。
二、关于酒精灯正确使用的注意事项1.酒精量以大于1/3，小于2/3为正确量。
2.防风罩应小口朝上放置于酒精灯上，反过来放置会导致氧气没有充分燃烧。
3.使用酒精灯前要检查灯芯帽是否盖得太紧，以防酒精不能上升，影响酒精灯燃烧。
点燃酒精灯时严禁两个酒精灯对点。
4.熄灭酒精灯方法：先用灯芯帽扣压并熄灭火焰，再揭帽重新扣压一次。
这样可防止蒸汽倒吸灯帽，再次使用酒精灯时难以揭开灯帽。
5.做样品稀释及从试管取样实验时，酒精灯应放在操作人员和试管架之间，便于无菌操作。
三、关于吸量管使用的注意事项1.左手拿洗耳球，右手持吸量管，用右手食指平按住吸量管的顶部。
2.吸取样品后进行定量时，吸量管吸液口应贴附于试管内壁；放样时，吸量管吸液口也应贴附于试管约1/2内壁，不应贴附在管口处放液。
吸量管应尽可能垂直放液。
3.用吸量管往空平皿加入1ml溶液时，吸量管应贴附于平皿底部中央位置放液；用吸量管在平板上加入0.1ml溶液做涂布接种时，吸量管应垂直、悬空放液于平板中央。
4.因吸量管拆封包装后应马上使用，故无须对吸量管吸液口过火焰消毒。
5.整个取样放样的过程应尽可能保证试管口或锥瓶口靠近酒精灯火焰附近。
四、关于样品梯度稀释的注意事项1.从试管架上取出所需试管于酒精灯火焰附近拔出试管塞，并在火焰外焰处对试管口过火焰进行消毒。
2.将试管放回试管架后用吸量管进行取样，然后取出该试管于火焰附近调节吸量管内溶液体积。
3.取样完成后对试管口再次消毒并塞上试管塞，将试管放回试管架原处。
4.从试管架上取出所需加样的试管于火焰附近进行加样放液操作。
微生物知识与无菌操作注意事项
微生物知识与无菌操作注意事项微生物是一类非常小型的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
微生物学是研究微生物的学科，其研究内容包括微生物的分类、形态结构、生理生化特性、生长繁殖规律以及微生物在生态系统中的作用等。
微生物的研究对于人类的生活和健康具有重要意义。
微生物可以用于食品发酵、制药、环境污染处理等方面。
然而，微生物也可能成为疾病的病原体，对人类和动植物的健康造成威胁。
为了正确理解和应对微生物，我们需要了解一些微生物学的基本知识，并且在进行相关实验时要注意无菌操作。
首先，了解微生物的分类和特征对于正确理解微生物学至关重要。
微生物可以分为细菌、真菌和病毒三大类。
细菌是最简单的微生物，是由单细胞组成的。
真菌包括酵母菌和霉菌等，其细胞结构较为复杂。
病毒则是非细胞的微生物，必须寄生在寄主细胞内才能生存和复制。
微生物的生长繁殖受到环境因素的影响，包括温度、pH值、营养物质和气氛等。
细菌和真菌通常可以在适当的环境条件下迅速繁殖，形成大量的菌落。
病毒则需要寄主细胞提供生存条件。
在进行微生物实验时，无菌操作是非常重要的。
无菌操作是指将外界的微生物污染排除掉，使实验样品保持无菌状态的一系列操作方法。
无菌操作的注意事项如下：首先，工作场所要保持清洁整齐。
实验室应该定期清洁消毒，并保持整洁有序。
操作台面、试验设备、试管和培养基等物品应该保持干净。
其次，实验人员要穿戴合适的防护用品。
实验人员应该穿戴实验服、手套、口罩和安全镜等，以减少对试验样品的污染。
再次，使用无菌器具和培养基。
实验器具应该经过高温高压灭菌，并保存在无菌条件下。
培养基是一种供微生物生长繁殖的营养物质，应该固定在无菌瓶中，并使用无菌技术取样。
此外，要注意消毒操作。
在进行细菌或真菌的培养实验时，需要经常进行消毒操作，以避免交叉污染。
消毒液应该选择常用的消毒剂，如酒精、次氯酸钠等，并按照指定的方法进行操作。
总之，微生物学是一个非常重要的学科，其研究内容广泛而深入。
无菌知识与无菌操作注意事项
无菌知识与无菌操作注意事项目录：1、微生物基本知识2、无菌的基本知识3、GMP中关于洁净区管理的基本要求4、洁净区人员卫生规范5、洁净区人员行为规范6、具体工作中的注意事项具体内容：1、微生物基本知识1.1微生物包括：细菌、真菌、放线菌、蓝线菌、立克次氏体、支原体、衣原体、病毒。
1.2细菌的特点：体积小、面积大；吸收多、转化快；生产旺、繁殖快；适应性强；分布广、种类多1.3细菌的形态：○1球菌○2杆菌○3螺旋菌1.4细菌的结构：○1基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞核、核质体○2特殊构造：鞭毛、菌毛、芽孢、美膜、气泡1.5芽孢：某些细菌在其生产的一定阶段，于营养细胞内形成一个圆形或卵圆形的内生孢子，是细菌的休眼体。
特点：含水量低、壁原而致密，对热、化学剂、辐射、压力、抵抗力强。
1.6常见污染药物的菌体都是一些生命力强的菌体，如葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌以及一些霉菌等。
2、无菌的基本知识按照无菌的最严格的定义，只有完全没有活微生物的样品才认为是无菌的。
但由于检查有一定的限度，它属于小概率事件，不可能破坏所有的药品，所以对于整批药品而言，实际上不能证明绝对无菌。
因此，声称无菌的一批产品的无菌情况是按照概率来定义的。
所以不能仅靠无菌检查来保证产品的无菌，而应通过全过程的无菌管理来保证产品的无菌。
我公司生产的产品主要用于注射剂的原料，因此要严格控制其无菌和澄明度。
如果使用了染菌的针剂，若是非致病菌，可能回引起局部的炎症，而若是致病菌，就可能会引起相应的疾病，染菌严重的药品若用于输液，会引起脓毒症、败血症甚至死亡。
较大的微粒可造成局部循环障碍，引起血管栓塞；微粒过多，造成局部堵塞和供血不足，组织缺氧而产生水肿和静脉炎；异物侵入组织，由于巨噬细胞的包围和增殖引起的肉芽肿。
此外，威力还可引起过敏反应、热原样反应。
灭菌与消毒灭菌方法：物理灭菌法（干热灭菌、湿热灭菌、辐射灭菌、过滤除菌）；化学灭菌法（化学药剂杀菌法、气体灭菌法）2.1化学消毒：2.2物理灭菌紫外线是一种比可见的紫外光波长还要短的不可见电磁波，它的波长范围是100~380nm，微生物体内都含有核酸，而核酸吸收紫外线照射的辐射能后可引起光化破坏作用，从而杀死微生物。
微生物实验室消毒灭菌要求和流程及注意事项
微生物实验室消毒灭菌要求和流程及注意事项微生物实验室是一个高度敏感且容易受到污染的环境，因此进行消毒和灭菌是非常重要的。
当人们进行微生物实验时，可能会接触到各种微生物，包括病原菌和致病菌。
这些微生物可能会在实验室内传播，并对工作人员和实验结果造成严重的危害。
因此，营造一个干净，无菌的实验室环境非常重要。
以下是微生物实验室消毒灭菌的要求、流程和注意事项。
1.消毒灭菌的要求：1.1无菌状态的要求：实验室内表面、设备和试剂应保持无菌状态，以防止交叉污染和实验结果的偏差。
1.2安全操作：实验人员在进行消毒灭菌时，必须采取相关的安全措施，包括佩戴实验室服装、手套和面罩。
1.3有效性：选择合适的消毒剂和灭菌方法，确保能有效地杀死各种细菌和病毒。
2.消毒灭菌的流程：2.1分析和评估：首先，对实验室内的表面、设备和试剂进行分析和评估，确定哪些区域和物品可能受到细菌和病毒的污染。
2.2清洁：在进行消毒灭菌之前，确保将实验室的表面、设备和试剂进行彻底的清洁。
使用清洁剂和适当的工具将表面上的灰尘和污垢清除干净。
2.3选择合适的消毒剂：根据实验室的需求和要求，选择合适的消毒剂。
常见的消毒剂包括酒精，氧化剂（如过氧乙酸）和氯化物（如次氯酸钠）等。
确保选用的消毒剂能有效地杀灭细菌和病毒。
2.4消毒程序：根据所选的消毒剂，按照相关的程序和指南进行消毒。
这可能包括将消毒剂直接喷洒或涂抹到表面上，或将消毒剂与适当的浓度稀释后浸泡或浇洗物品。
2.5灭菌程序：对于一些高度敏感和重要的物品，如培养基，需要进行灭菌处理。
常见的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌（Autoclave）和热气灭菌。
根据物品的大小和材质，选择合适的灭菌设备和程序。
2.6消毒时间和周期：根据消毒剂的要求和指南，确保将消毒剂留在表面上足够的时间，以确保细菌和病毒被彻底杀灭。
此外，定期定时进行消毒灭菌是非常重要的，以保持实验室的无菌状态。
3.消毒灭菌的注意事项：3.1遵循安全操作规程：进行消毒灭菌时，务必遵守实验室的安全操作规程和指南，佩戴适当的个人防护装备，避免直接接触消毒剂和灭菌设备。
微生物的无菌操作及接种技术
目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得 纯菌、活菌计数。 方法： ★ 分区划线法：适用于含菌量较多的标本
★ 连续划线法：适用于含菌量较少的标本
2、常用的接种方法
※划线接种
2、常用的接种方法
第一区划线
※划线接种
灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
分区划线法
请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物；
使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯； 使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照
射15min.
定期做无菌试验，以测定净化台是否符合无菌要求。
无菌环境的要求与保持 3、无菌器材准备
灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等. 消毒器材：接种试管、无菌室内的凳子、试管架、天平、 工作台等
无菌环境的要求与保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。
杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本
•操作需在无菌室或超净工作台内进行 •无菌室、超净工作台使用前后需进行 消毒。 •实验使用的物品使用前后需严格灭菌
灭菌接种环
杀灭接种环沾染的微生物，以免污染环境
（二）接种的操作方法
2、常用的接种方法
斜面接种 划线接种
液体接种
穿刺接种
2、常用的接种方法
※ 斜面接种：
斜面接种示意图
2、常用的接种方法
微生物知识及无菌操作注意事项
微生物知识及无菌操作注意事项微生物是一类微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
微生物在自然界中广泛存在，有些微生物对人类有益，如帮助消化食物、制造药物等；但同时也有些微生物对人类有害，会引发各种感染性疾病。
因此，了解微生物知识以及掌握无菌操作技巧对于保护人类健康具有十分重要的意义。
首先，我们来了解一些微生物的基本知识。
细菌是一类无色、无气味的单细胞生物，可以根据形态分为球菌、杆菌、螺旋菌等不同类型。
细菌可以生存在各种环境中，有些细菌对人体有益，如有助于消化食物，有些细菌对人体有害，如引起呼吸道、泌尿道、肠道等感染。
真菌是一类多细胞或单细胞的生物，可以根据形态分为酵母菌、霉菌等。
真菌在自然界中广泛分布，有些真菌可以制造食物，如面包、啤酒等，有些真菌可以产生毒素，如霉变食物中的黄曲霉素。
病毒是一种非细胞的微小生物，只能在寄主细胞内复制。
病毒可以感染人类、动物和植物等生物体，引起各种疾病，如感冒、流感、艾滋病等。
了解了微生物的基本知识后，接下来我们要掌握无菌操作的注意事项。
无菌操作是指在没有任何微生物污染的条件下进行实验或操作。
无菌操作的目的是防止微生物污染，保证实验结果的准确性和可靠性。
首先，无菌操作必须在严格的洁净环境下进行。
实验室内的工作台面、仪器、容器等都必须经过消毒处理，以避免细菌、真菌和病毒的污染。
其次，操作人员必须戴上洁净无菌手套，并采取正确的操作方法。
戴手套时要注意选择正确尺寸的手套，将手套通过洗手消毒剂洗净并彻底干燥后再戴上，避免手套内的细菌、真菌或病毒污染。
再次，无菌操作要注意防止空气中的微生物进入操作区域。
在操作过程中要小心避免操作物品与空气直接接触，尽量减少操作物品的暴露时间，及时封闭容器等。
此外，滤过技术可以用于无菌操作。
滤过技术可以去除液体中的微生物，常用的滤过方法有微孔滤膜过滤、膜过滤、空气过滤等。
最后，在进行无菌操作时，要注意实验室内的卫生与清洁。
定期对实验室进行消毒处理，及时清理工作台、仪器和容器，避免细菌、真菌和病毒的滋生。
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口腔菌丛
• 口腔中有适宜的温度，并含有食物残渣、脱落上皮和粘液等，是微生物 生长繁殖的良好场所。
• 口腔中的细菌种类很多，且数量变化也大。 • 常见的为革兰阳性球菌、奈氏球菌、乳酸杆菌、梭状芽胞杆菌、螺旋体、
白色念珠菌、类白喉杆菌。 • 正常谈话时，常见喷出的细菌是腐生的绿色链球菌类。
微生物知识及无菌操作 注意事项
2016/05/28
欣弗事件
ห้องสมุดไป่ตู้
刺五加事件
内容：
微生物基础知识 操作中无菌意识 人员卫生
第目
一
微生物基础知识
部录
分
1、微生物是什么？
是存在于自然界的一大群形态小、结构简单、肉眼看不见，需要借 助光学显微镜或者电子显微镜放大数百倍、数千倍甚至数万倍才能观 察到的微小生物。
特点： 对营养的要求非常低；
无处不在；
大多数微生物对人类有益；
有些微生物对人类有害；
八大类
• 真菌：酵母菌、霉菌、大型真菌 • 细菌：肺炎球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌 • 放线菌：抗生素如链霉素、土霉素等都是链霉菌
的次生 代谢产物 • 支原体：肺炎支原体 • 衣原体：沙眼 • 立克次体：斑疹伤寒 • 螺旋体：梅毒 • 病毒：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，狂犬病毒，流
物异位侵入某些组织时，都可以引起人体疾病，这些细菌通常称条件致病菌。
人体不同部位所带细菌数量
部位
手部 前额 头皮 腋窝 鼻腔分泌物 唾液 粪便
细菌数量
100～1000/ cm2 1000～100000/ cm2
约100万/ cm2 约1000万/ g 约1000万/ g
约10亿/ g 710亿/ g
感病毒。
3、微生物的特点:
基础特性
• 分布广，种类多。 • 体积小，面积大； • 吸收多，转化快； • 生长旺，繁殖快； • 适应强，易变异；
1、种类多、分布广
• 微生物在地球上几乎无处不有，无孔不入，人 的皮肤上，口腔，肠道里都有许多微生物。微 生物聚集最多的地方是土壤。哪里尘埃多，哪 里的微生物就多。
皮肤菌丛
人皮肤上的细菌体。与个人卫 生及环境情况有关。虽然人们 经常清洁皮肤，但由于人类不 断参加生产活动，频繁接触周 围被污染的环境和物体，存在 于皮肤深层(如毛囊、汗腺、皮 脂腺)的微生物又不易除去，因 而在人体排汗降温时，会不断 向外排放细菌污染环境。
皮肤上微生物寄生示意图
因此：对于从事药品生产的人员来讲，特别是直接接触药品的部分，必须 经常定时清除皮肤表面的微生物。
• 乳酸菌每小时可产生为其体重1000~10000倍的 乳酸；
4、适应强、易变异：
• 多数细菌能耐0～－196℃的低温；在海洋深处 的某些硫细菌可在250～300℃的高温条件下 正常生长；产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件 下能保藏几十年、几百年。
• 由于微生物繁殖快，也可在短时间内产生大量 变异的后代。正是由于这个特性，微生物的发 酵，可以酿造酒，制造酸奶，等。。。。
• 水中存在的微生物90%为革兰氏阴性菌，主要 有弧菌、假单胞菌、黄杆菌等。
• 通过水体传播的病原微生物主要有沙门氏菌属、 志贺氏菌属、霍乱弧菌等。
制药用水微生物监测手段：
微生物限度检查： 控制菌检查 细菌内毒素检查
3、微生物在空气中的分布：
• 空气不是微生物生活的良好环境； • 空气携带细菌主要有2种方式；
1、微生物在土壤中中主要有以下几类：
细菌：占土壤微生物总数的70-90%； 放线菌：占土壤中微生物含量的5-30%； 霉菌：主要生活在靠近地面的土壤中；在通 气良 好的土壤中，霉菌数量很
多； 酵母菌：普通作土中酵母菌含量很少；
2、微生物在水中的分布：
• 水具有微生物生命活动适宜的温度、PH、氧 气等。因此，水中生长着众多的微生物类群， 它们主要来源土壤、空气、动植物尸体、人和 动物的排泻物、工业及生活污水。
一般皮肤常见菌丛有金黄色和白色葡萄球菌、大肠杆菌、类白喉杆菌、八 叠球菌、变形杆菌及真菌等。
环境监测中 经常发现球 菌，原因？
呼吸道菌丛
• 正常人的气管、支气管和肺部基本上是无菌的； • 鼻腔常见的细菌为金黄色和白色葡萄球菌，类白
喉杆菌。 • 一些病原微生物如肺炎双球菌、脑膜受双球菌、
溶血性链球菌、流感杆菌也常存在于恢复期患者 或健康带菌者鼻咽部。
• 空气中因缺乏营养物，微生物在其中不能繁殖与久留，只有抵抗力较强的微 生物如芽胞杆菌、八叠球菌、葡萄球菌以及真菌(如青霉菌、曲霉菌、毛霉菌 等)存活时间较长；
• 空气中微生物是药品生产中引起污染的重要来源之一。
4、微生物在人体中的分布：
正常菌群： 在正常情况下，正常菌群的存在对人体是有益的，人体抗力下降，或当一 些微生
4、微生物的生长:
细菌生长的典型曲线 (Ⅰ.延迟期， Ⅱ.对数期， Ⅲ.稳定期， Ⅳ.衰亡期)
5、微生物的分布：
➢ 土壤中 ➢ 水中 ➢ 空气中 ➢ 人体中
不同环境中微生物量
环境
土壤 水 空气 人体皮 地板 肤
微生物量 104-1010 10-104 10-105 1-104 10-103
单位：个/g
一，是细菌可附着在尘土上(细微颗粒)； 其二，来源于人和动物： 它们大多数是通过呼吸道排出的细菌在人咳嗽、喷嚏、唱歌、讲话、呼吸时通过口
腔、鼻腔部喷出的飞沫。
尘埃粒子、 人员菌、 浮游菌等监测
• 空气中微生物的数目决定于尘埃的总量。空气中的微生物的数量随人的密度、 活动程度以及温度、湿度、风力等因素而异；
• 微生物在土壤中的数量最多. • 据统计，一克土壤中含有几千万到几百亿的微
生物。
2、个体小、面积大：
• 积极活动的大肠杆菌，每小时能消耗它体重 2000倍的乳糖；
• 微生物的食谱非常广泛，凡是动植物能利用的 营养，微生物都能利用，大量的动植物不能利 用的物质，甚至剧毒的物质，微生物照样可以 利用。
• 如大肠杆菌在合适条件下，每小时可以消耗相 当于自身重量2000倍的糖，而人体则需要40 年之久。
3、吸收多、转化快：
• 微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十分 钟内就可以繁殖一代，如细菌一般每20~30分钟 既可分裂一次；
• 生产味精的谷氨酸短杆菌，从摇瓶培养扩大到50 吨发酵罐的过程中，在52小时内细胞数目增加了 32亿倍；