从雨生红球藻提取虾青素四种不同方法比较

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相关介绍

•虾青素Astaxanthin，是类胡萝卜

•素的一种，在类胡萝卜素家族中有很多知

•名明星，如β胡萝卜素，叶黄素、蕃茄红

•素等，天然虾青素是这个家族中最具健康

•益处的一种。人体的衰老，主要是由于

•自由基所造成的氧化所至。而红球藻萃取物•特殊的分子构造，可以穿越人体细胞外壁，•直接清除细胞内的氧自由基，增强细胞再生能力•，维持人体机能平衡和减少衰老细胞的堆积，•由内而外保护细胞和DNA健康。

实验材料

Haematococcus pluvialis organisms were gifted by Yunnan Yunlin Biological Technology Co. Ltd.

(Kunming, Yunnan province, China).

Before extraction, the organism was dried and the moisture content was below 0.5 wt.%.

Soy oil was brought from Jinhai Food Industry Co. Ltd.

(Qinhuangdao, China).

Astaxanthin standard with purity of 99% was purchased from Sigma (St. Louis, MO).

All other chemicals were of analytic grade and bought from local market

A

HCL-ACE

B

HEX-IPA

C

MET-ACE

D

soy-oil extraction

A

盐酸-丙酮HCL-ACE

在70度10mg 干藻粉于离心管中加1ml 4M HCL 处理两分钟

样品冷却，以5000 rpm离心5分钟

样品蒸馏水洗两次后用1ml丙酮悬浮

在冰水浴中超声波提取20分钟，然后在4摄氏度以3500 rpm离心6min

取上清液用高效液相色谱法测提取率

所有步骤均在光保护和充氮环境下进行

B

己烷-异丙酮HEX-IPA

置10mg干藻粉于2ml HEX-IPA （6：4，v:v）混合溶液中,在冰水中超声波辅助提取20min

4摄氏度以3500 rpm离心5min，然后真空环境下浓

缩

提取率以干重百分比表示，高效液相色谱法分析虾

青素含量

所有步骤均在光保护和充氮环境下进行

C

甲醇-丙酮MET-ACE

称10mg干藻粉于15ml琥珀色螺口纹小瓶中加入1ml 甲醇，冰水中超声波提取4-5min

4摄氏度以3500 rpm离心5min，然后真空环境下浓

缩

D

大豆油萃取soy-oil extraction

取2.5g干藻粉用20ml植物大豆油置于250ml长颈瓶中，在热板上加热搅拌2h

油萃取物由0.22微米纤维素过滤

高效液相色谱法分析虾青素含量和萃取率

高效液相色谱法测定虾青素和提取物的质量评价

• 1 提取率

• 2 扫描电镜观察细胞形态

• 3 高效液相色谱法测定虾青素含量

• 4 脂肪酸核磁共振

• 5 DPPH自由基清除

• 6 还原力测定

2 扫描电镜技术

3 高效液相色谱法

4 H1脂肪酸核磁共振技术

5 DPPH自由基清除

6 还原力测定

2 扫描电镜技术

样品用50mmol/l磷酸盐溶液（ph7.2）轻洗，固定100 ml戊二醛（2.5%）和100 ml锇酸溶液（1%）固定，试样使用连续的乙醇和叔丁醇脱水。脱水后，将试样用二氧化碳干燥和在离子镀膜机中用金镀膜2分钟。在扫描电子显微镜下观察并记录细胞形态

3高效液相色谱法

•洗涤剂是A丙酮和B甲醇：水（9：1 Ｖ／Ｖ）流速

0.8ml/min 温度40度。梯度浓度如下：B80-20%

25min,20% 20min,20-80% 5min.检测波长460nm

4 H1脂肪酸核磁共振技术

10mg 样品溶解在0.6mlCDCL3中，光谱在25度记录

，600MHz 分光仪亚麻酸亚麻油酸

油酸饱和脂肪酸

5 DPPH自由基清除

•每个样品取1.5ml加入

1.5ml 0.1mol/l DPPH 在乙醇中，轻摇混合溶液，室温暗处放置

30min

•分光光度计517nm测定吸光度

6 还原力测定

•每个样品取1ml加入2.5ml 0.2mol/l 磷酸溶液（ph 6.6）和1ml 1%（W / V）铁氰化钾中

•混合溶液50度放置20min，迅速降温。然后2.5ml 10%（W / V）三氯乙酸加入混合液，并以3500 rpm离心10分钟

• 2.5ml上清液和2.5ml 蒸馏水和0.5ml 0.1%（W / V）三氯化铁在试管中，10min后分光光度计700nm测定吸光度

谢谢

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@稻壳儿Docer 出品