比色法测定亚硝酸盐含量(精)
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比色法测定物质的含量
原理：在相同条件下，配制标 准溶液和待测样品溶液的有色 溶液，将两者的颜色进行比较， 用目测法求出待测样品溶液的 浓度。
案例1 食品中NO3-和NO2-含量的测定
原理：
对氨基苯磺酸 + 2H+ + NO2重氮化合物 + 2H2O
ａ-萘胺 + 重氮化合物 红色化合物）
对-苯磺酸-偶氮-ａ-萘胺（紫
7
8 9 10 11
6.0
5.8 5.6 5.4 5.2
1.0
1.2 1.4 1.6 1.8
2
2 2 2 2
1
1 .0 9.0
制备标准色阶时，各反应溶液的总量一定要 保持一致，反应各部分要准确加入。如果颜 色太深，各色阶间没有差别，无法比较，可 等反应稳定后，加水稀释后再进行比较。但 是一定要记录稀释的倍数，以便后面的计算。
2反应试剂的配制
（1）HCl：取20 mL浓盐酸用蒸馏水水稀释成100mL； （2）对氨基苯磺酸：4mg/mL，称取0.4g对氨基苯磺酸溶于（1）中。 （3）ａ-萘胺：2mg/mL，0.2g溶解于100mL（1）中。 注意：HCl在这个实验中的作用是制造一种酸性环境，上面的浓度 足够了。作为反应物质的对氨基苯磺酸和ａ-萘胺也是过量的。实 验过程中，只要每次重复时这些药品的浓度稳定，实验结果就会比 较一致。因此，如果要采用这个实验做一些探究性活动，需要大量 使用、实验需要重复多次的、在短时期就可以完成的，可将这几种 药品多配制一些，放入冰箱，以免多次配制导致结果不稳定。 磺胺有强烈的氧化作用，其溶液不要与铁制品接触，最好采用玻璃 制品；溶解时需加热。闭光保存。 ａ-萘胺有毒，溶解时需要加热。闭光保存。
反应条件： 酸性条件下，磺胺与NO2-作用形成重氮 化合物，酸度大，重氮化作用速度加快。 实验中所有的反应需要在相同的外界条 件下进行 反应特点：非常灵敏，可测定0.5 μg/mL浓度的NO2-
实验过程：
1标准浓度的NaNO2配制
（1）0.1 g溶解于蒸馏水中，定容至500mL， NaNO2浓度为200mg/L（NaNO2浓度=200μg/mL） （2）取（1）溶液5mL用水稀释，定容至 200mL（即稀释了40倍），此时NaNO2浓度为5 mg/L（NaNO2浓度=5 μg/mL）
3标准色阶的制备
表1 NaNO2含量测定的标准色阶的制备表
编 号 1 2 3 4 5 6 蒸馏水 NaNO2 对氨基苯 ａ-萘胺 NaNO2的最终 （mL） （mL） 磺酸（mL） （mL） 含量（μg） 7.0 6.9 6.8 6.6 6.4 6.2 0.0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 2 2 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1 0.0 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0
4材料中NaNO2的提取
提取剂：称取50 g氯化镉和50 g氯化钡溶于1 000 ml的蒸馏水中，用浓盐酸调节pH至1。提取剂的作 用为提取泡菜汁中的杂质，以利比色； 氢氧化铝乳液：进一步吸附泡菜汁中的杂质；方法： 称取125g硫酸铝钾[KAl(SO4)2.12H2O]或硫酸铝铵 [NH4Al(SO4)2.12H2O]溶于1000mL纯水中。加热 至60oc，缓缓加入55mL氨水(ρ20=0.88g/mL)。使 氢氧化铝沉淀完全。充分搅拌后静置，弃取上清液。 用纯水反复洗涤沉淀，至倾出上清液中不含氯离子 （用硝酸银溶液试验）。然后加入300mL纯水成悬 浮液，适应前振摇均匀。 2.5 mol/L的氢氧化钠溶液：使其与泡菜汁中的部分 物质形成沉淀。
原因分析：发酵初期，泡菜中的微生物生长很快， 微生物将蔬菜中的硝酸盐还原成亚硝酸盐，如此 同时，蔬菜中的酚类物质和维生素C等物质也会 将亚硝酸盐氧化，但总体来说，生成的亚硝酸盐 大于被氧化的亚硝酸盐，因此，随着发酵时间的 进行，亚硝酸盐的含量会逐步上升。随着微生物 代谢活动的持续，氧气被消耗殆尽，泡菜坛中的 环境不利于除乳酸菌以外的其他微生物的生长。 与此同时，蔬菜中的亚硝酸盐含量由于被氧化而 减少，因此，亚硝酸盐的含量会逐渐下降并趋于 一个相对稳定的数值。
材料粉碎 0.2 kg，注意要精确 过 滤 也可离心，收集全部滤液氯化镉、氯化钡提取 加入2倍的蒸馏水，1倍的提取液，振荡，提取1h。如果没有摇 床，可人工代替，经常用玻璃棒搅动。加碱沉淀氯化镉、氯化 钡 也需要搅动。定容到500mL 一定要精确取50mL滤液，加Al(OH)32mL除去有机杂质，定容到 100mL 需要搅动。 过滤 也可离心 过滤 离心也可
5材料中NaNO2含量的测定 取上面获得的无色透明液体5mL于试管，加水 2mL，加对氨基苯磺酸2mL，ａ-萘胺1mL，反 应15min后，与上面的标准色阶颜色进行对比， 从色阶表中找出相应的样品NaNO2的含量，根据 公式计算样品溶液中NaNO2的含量
6采用比色法测定物质含量的要注意的地方
（1）称取的物质量要准确， （2）研磨过程要充分，并充分溶解在水中 （3）每次定容要准确 （4）反应时，加入的溶液量要准确 （5）所有的反应过程要保持条件一致。 结果：泡菜中亚硝酸盐含量在发酵刚刚开始的 时候都处于上升趋势，在5 d或者7 d的时候会达 到一个最高值，之后就会慢慢下降，在发酵时间 达到13 d左右的时候下降到一个相对比较稳定的 数值，达到平稳状态。
原理：在相同条件下，配制标 准溶液和待测样品溶液的有色 溶液，将两者的颜色进行比较， 用目测法求出待测样品溶液的 浓度。
案例1 食品中NO3-和NO2-含量的测定
原理：
对氨基苯磺酸 + 2H+ + NO2重氮化合物 + 2H2O
ａ-萘胺 + 重氮化合物 红色化合物）
对-苯磺酸-偶氮-ａ-萘胺（紫
7
8 9 10 11
6.0
5.8 5.6 5.4 5.2
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1.2 1.4 1.6 1.8
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制备标准色阶时，各反应溶液的总量一定要 保持一致，反应各部分要准确加入。如果颜 色太深，各色阶间没有差别，无法比较，可 等反应稳定后，加水稀释后再进行比较。但 是一定要记录稀释的倍数，以便后面的计算。
2反应试剂的配制
（1）HCl：取20 mL浓盐酸用蒸馏水水稀释成100mL； （2）对氨基苯磺酸：4mg/mL，称取0.4g对氨基苯磺酸溶于（1）中。 （3）ａ-萘胺：2mg/mL，0.2g溶解于100mL（1）中。 注意：HCl在这个实验中的作用是制造一种酸性环境，上面的浓度 足够了。作为反应物质的对氨基苯磺酸和ａ-萘胺也是过量的。实 验过程中，只要每次重复时这些药品的浓度稳定，实验结果就会比 较一致。因此，如果要采用这个实验做一些探究性活动，需要大量 使用、实验需要重复多次的、在短时期就可以完成的，可将这几种 药品多配制一些，放入冰箱，以免多次配制导致结果不稳定。 磺胺有强烈的氧化作用，其溶液不要与铁制品接触，最好采用玻璃 制品；溶解时需加热。闭光保存。 ａ-萘胺有毒，溶解时需要加热。闭光保存。
反应条件： 酸性条件下，磺胺与NO2-作用形成重氮 化合物，酸度大，重氮化作用速度加快。 实验中所有的反应需要在相同的外界条 件下进行 反应特点：非常灵敏，可测定0.5 μg/mL浓度的NO2-
实验过程：
1标准浓度的NaNO2配制
（1）0.1 g溶解于蒸馏水中，定容至500mL， NaNO2浓度为200mg/L（NaNO2浓度=200μg/mL） （2）取（1）溶液5mL用水稀释，定容至 200mL（即稀释了40倍），此时NaNO2浓度为5 mg/L（NaNO2浓度=5 μg/mL）
3标准色阶的制备
表1 NaNO2含量测定的标准色阶的制备表
编 号 1 2 3 4 5 6 蒸馏水 NaNO2 对氨基苯 ａ-萘胺 NaNO2的最终 （mL） （mL） 磺酸（mL） （mL） 含量（μg） 7.0 6.9 6.8 6.6 6.4 6.2 0.0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 2 2 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1 0.0 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0
4材料中NaNO2的提取
提取剂：称取50 g氯化镉和50 g氯化钡溶于1 000 ml的蒸馏水中，用浓盐酸调节pH至1。提取剂的作 用为提取泡菜汁中的杂质，以利比色； 氢氧化铝乳液：进一步吸附泡菜汁中的杂质；方法： 称取125g硫酸铝钾[KAl(SO4)2.12H2O]或硫酸铝铵 [NH4Al(SO4)2.12H2O]溶于1000mL纯水中。加热 至60oc，缓缓加入55mL氨水(ρ20=0.88g/mL)。使 氢氧化铝沉淀完全。充分搅拌后静置，弃取上清液。 用纯水反复洗涤沉淀，至倾出上清液中不含氯离子 （用硝酸银溶液试验）。然后加入300mL纯水成悬 浮液，适应前振摇均匀。 2.5 mol/L的氢氧化钠溶液：使其与泡菜汁中的部分 物质形成沉淀。
原因分析：发酵初期，泡菜中的微生物生长很快， 微生物将蔬菜中的硝酸盐还原成亚硝酸盐，如此 同时，蔬菜中的酚类物质和维生素C等物质也会 将亚硝酸盐氧化，但总体来说，生成的亚硝酸盐 大于被氧化的亚硝酸盐，因此，随着发酵时间的 进行，亚硝酸盐的含量会逐步上升。随着微生物 代谢活动的持续，氧气被消耗殆尽，泡菜坛中的 环境不利于除乳酸菌以外的其他微生物的生长。 与此同时，蔬菜中的亚硝酸盐含量由于被氧化而 减少，因此，亚硝酸盐的含量会逐渐下降并趋于 一个相对稳定的数值。
材料粉碎 0.2 kg，注意要精确 过 滤 也可离心，收集全部滤液氯化镉、氯化钡提取 加入2倍的蒸馏水，1倍的提取液，振荡，提取1h。如果没有摇 床，可人工代替，经常用玻璃棒搅动。加碱沉淀氯化镉、氯化 钡 也需要搅动。定容到500mL 一定要精确取50mL滤液，加Al(OH)32mL除去有机杂质，定容到 100mL 需要搅动。 过滤 也可离心 过滤 离心也可
5材料中NaNO2含量的测定 取上面获得的无色透明液体5mL于试管，加水 2mL，加对氨基苯磺酸2mL，ａ-萘胺1mL，反 应15min后，与上面的标准色阶颜色进行对比， 从色阶表中找出相应的样品NaNO2的含量，根据 公式计算样品溶液中NaNO2的含量
6采用比色法测定物质含量的要注意的地方
（1）称取的物质量要准确， （2）研磨过程要充分，并充分溶解在水中 （3）每次定容要准确 （4）反应时，加入的溶液量要准确 （5）所有的反应过程要保持条件一致。 结果：泡菜中亚硝酸盐含量在发酵刚刚开始的 时候都处于上升趋势，在5 d或者7 d的时候会达 到一个最高值，之后就会慢慢下降，在发酵时间 达到13 d左右的时候下降到一个相对比较稳定的 数值，达到平稳状态。