(优选)经典液相色谱法
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无机类 氧化铝、硅胶、活性炭、碳酸钙、 硅藻土等
（1）硅胶（SiO2·xH2O）
结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心
H O Si
H
O
O
Si
Si
O
Si
Si
游离羟基(I)
键合羟基(Ⅱ)
硅醚结构(Ⅲ)
硅醚结构(Ⅲ)没有吸附活性。
由于硅胶具有弱酸性，能与碱起反应，只适用 于分离酸性和中性化合物。
A CS
Cm
B CS
Cm
C
L C
t tR
mg/g
C
L C
t tR
mg/g
C Cm
L t
mg/g
二、 吸附剂 1. 对吸附剂的要求： (1)表面积大，具有一定的吸附能力。 (2)不应与流动相发生化学反应。 (3)粒度要细，一般为150目左右。
2. 常用吸附剂
有机类 活性炭、淀粉、葡萄糖、聚酰胺、大孔 树脂等
（4）大孔吸附树脂 一种不含交换基团，具有大孔
网状结构的高分子吸附剂。理化 性质稳定，不溶于酸、碱及有机 溶剂。大孔树脂可分为非极性和 中等极性两类，在水溶液中吸附 力较强且有良好的吸附选择性， 而在有机溶剂中吸附能力较弱。
2. 吸附剂的吸附活性： 氧化铝、硅胶的吸附力的大小, 还与其含水量有
较大的关系：
表10-1 硅胶、氧化铝的含水量与活度级别的关系
硅胶含水量 （%）
0 5 15 25 38
氧化铝含水 量（%）
0 3 6 10 15
活度级别
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
活度级数 小 大
含水量 少 多
活性 大 小
吸附能力 强 弱
加热除水，活性提高，吸附力加强（活化） 吸水，活性下降，吸附力减弱。
三、色谱条件的选择
K Cs X s Vs Cm X m Vm
分配系数小的组分，移动速度快，先流出色谱 柱；分配系数大的组分，移动速度慢，后流出色谱 柱。
二、载体
载体（担体）起支撑与分散固定液的作用 要求：化学惰性，不吸附被分离组分，纯 净，颗粒大小均匀。
常用的载体有硅胶、纤维素、硅藻土等
三、 固定液与流动相的选择 固定液是机械吸附在惰性载体上的液体
选择色谱分离条件时，必须从吸附剂、被分离物 质、流动相(洗脱剂)三方面进行综合考虑。
1. 被分离物质的极性 被分离物质的极性越大,被吸附剂吸附得越牢! 常见的化合物极性大小顺序:
烷烃 < 烯烃 < 醚类 < 硝基化合物 < 二甲胺 < 脂 类 < 酮类< 醛类 < 硫醇 < 胺类 < 酰胺 < 醇类 < 酚类 < 羧酸类
在反相分配色谱中，常以硅油、液体石蜡等极 性较小的有机溶剂作为固定液，而以极性强的 水、水溶液或与水混溶的有机溶剂为流动相。
之间达到平衡时，以组分在固定相中的浓度Cs 为纵坐标，以组分在流动相中的浓度Cm为横坐
标得到的曲线。
等温线有三种类型：线性、凸形和凹形。通常在 低浓度时，每种等温线均呈线性，而高浓度时， 等温线则呈凸形（常见）或凹形。
CS
吸附等温
柱内溶质 浓度分布
柱内溶质 C 浓度的分 布曲线
C
流出曲线
保留时间 tR 与进样量 的关系
（2）氧化铝
碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质
(3) 聚酰胺 由酰胺聚合而成的高分子物质。
O
CH2
CH2
C
CH2
CH2
CH2
N
H
n
酰胺基中的羰基与酚类、黄酮类、酚类中 的羟基或羧基形成氢键；酰胺基中的氨基与醌 类、硝基类中的醌基、硝基形成氢键而产生吸 附作用。
因为流动相的量很大，Ym n Ya n 近似于常数，而
且吸附只发生于吸附剂表面，所以，吸附平衡常 数可写成
K
Xa X m
Xa / Sa X m /Vm
Cs Cm
[ X a ]为溶质分子在吸附剂表面的浓度 [ X m ]为溶质分子在流动相中的浓度
Sa为吸附剂表面面积 Vm为流动相的体积
CS为溶质在固定相表面的分析浓度， Cm为溶质在流动相中的分析浓度
吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强
物质的极性 吸附剂活性
大
小
防吸附太牢,难洗脱
小
大
防tR太小,不易分离
3. 流动相的极性 流动相极性大，对被测组分的洗脱能力强
常用流动相极性强弱顺序:
石油醚 < 环己烷 < 四氯化碳 < 苯 < 甲苯 < 乙醚 < 氯仿< 醋酸乙酯 < 正丁醇 < 丙醇 < 乙醇、甲醇 < 水
被分离物质的极性与结构的关系 (1) 基本母核相同 , 基团极性愈大 , 分子极性愈大。 基本母核相同 , 极性基团数目愈多 , 分子极性愈大。
(2) 分子双键多, 吸附力 ↑。 (3) 空间排列 , 影响极性。
例如羟基处于能形成分子内氢键的位置时
OH C
O H O
< HO
O C OH
2. 吸附剂的活性:
分配色谱根据固定液和流动相的相对极性， 可以分为两类：正相色谱和反相色谱
பைடு நூலகம்
正相色谱
反相色谱
固定液极性
大
小
流动相极性
小
大
适于分离的物质 极性物质
中等极性至非极性的物质
流出顺序 极性小的组分先流出柱 极性大的组分先流出
在正相色谱法中，固定液有水、各种缓冲溶 液、稀硫酸、甲醇、甲酰胺或丙二醇等强极 性溶剂，以及它们的混合液. 用极性较小的有 机溶剂为洗脱剂进行洗脱分离。
K与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的
性质及温度有关。
K值小，说明该物质的吸附能力弱，在固定相 中滞留时间短，移动速率快，先流出色谱柱；若 K值大，说明该物质的吸附能力强，在固定相中 滞留时间长，移动速率慢，后流出色谱柱。在一 定条件下，不同组分因吸附系数的差异得以分离。
2．吸附等温线
在一定温度下，某一组分在固定相和流动相
（优选）经典液相色 谱法
1
吸附过程是试样中组分分子与流动相分子 争夺吸附剂表面活性中心的过程。
图10-1 吸附色谱示意图 m.流动相 a.吸附剂 Xm.流动相中溶质分子 Ym.流动相分子 Xa.被吸附的溶质分子
这种吸附平衡过程可表示为
Xm + nYa
吸附 解吸附
Xa + nYm
吸附平衡常数:
K
X a Ym n X m Ya n
被分离物质的极性 大 小
吸附剂活性 小 大
流动相极性 大 小
流动相可用一元 , 两元或三元，也可采用 梯度洗脱等技术 。
第2节 液-液分配柱色谱法（LLC）
一、基本原理 将液体均匀地涂渍在惰性物质(载体)表
面上作为固定相，利用被分离组分在固定相 与流动相中的溶解度差别所造成的分配系数 差别而被分离。
（1）硅胶（SiO2·xH2O）
结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心
H O Si
H
O
O
Si
Si
O
Si
Si
游离羟基(I)
键合羟基(Ⅱ)
硅醚结构(Ⅲ)
硅醚结构(Ⅲ)没有吸附活性。
由于硅胶具有弱酸性，能与碱起反应，只适用 于分离酸性和中性化合物。
A CS
Cm
B CS
Cm
C
L C
t tR
mg/g
C
L C
t tR
mg/g
C Cm
L t
mg/g
二、 吸附剂 1. 对吸附剂的要求： (1)表面积大，具有一定的吸附能力。 (2)不应与流动相发生化学反应。 (3)粒度要细，一般为150目左右。
2. 常用吸附剂
有机类 活性炭、淀粉、葡萄糖、聚酰胺、大孔 树脂等
（4）大孔吸附树脂 一种不含交换基团，具有大孔
网状结构的高分子吸附剂。理化 性质稳定，不溶于酸、碱及有机 溶剂。大孔树脂可分为非极性和 中等极性两类，在水溶液中吸附 力较强且有良好的吸附选择性， 而在有机溶剂中吸附能力较弱。
2. 吸附剂的吸附活性： 氧化铝、硅胶的吸附力的大小, 还与其含水量有
较大的关系：
表10-1 硅胶、氧化铝的含水量与活度级别的关系
硅胶含水量 （%）
0 5 15 25 38
氧化铝含水 量（%）
0 3 6 10 15
活度级别
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
活度级数 小 大
含水量 少 多
活性 大 小
吸附能力 强 弱
加热除水，活性提高，吸附力加强（活化） 吸水，活性下降，吸附力减弱。
三、色谱条件的选择
K Cs X s Vs Cm X m Vm
分配系数小的组分，移动速度快，先流出色谱 柱；分配系数大的组分，移动速度慢，后流出色谱 柱。
二、载体
载体（担体）起支撑与分散固定液的作用 要求：化学惰性，不吸附被分离组分，纯 净，颗粒大小均匀。
常用的载体有硅胶、纤维素、硅藻土等
三、 固定液与流动相的选择 固定液是机械吸附在惰性载体上的液体
选择色谱分离条件时，必须从吸附剂、被分离物 质、流动相(洗脱剂)三方面进行综合考虑。
1. 被分离物质的极性 被分离物质的极性越大,被吸附剂吸附得越牢! 常见的化合物极性大小顺序:
烷烃 < 烯烃 < 醚类 < 硝基化合物 < 二甲胺 < 脂 类 < 酮类< 醛类 < 硫醇 < 胺类 < 酰胺 < 醇类 < 酚类 < 羧酸类
在反相分配色谱中，常以硅油、液体石蜡等极 性较小的有机溶剂作为固定液，而以极性强的 水、水溶液或与水混溶的有机溶剂为流动相。
之间达到平衡时，以组分在固定相中的浓度Cs 为纵坐标，以组分在流动相中的浓度Cm为横坐
标得到的曲线。
等温线有三种类型：线性、凸形和凹形。通常在 低浓度时，每种等温线均呈线性，而高浓度时， 等温线则呈凸形（常见）或凹形。
CS
吸附等温
柱内溶质 浓度分布
柱内溶质 C 浓度的分 布曲线
C
流出曲线
保留时间 tR 与进样量 的关系
（2）氧化铝
碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质
(3) 聚酰胺 由酰胺聚合而成的高分子物质。
O
CH2
CH2
C
CH2
CH2
CH2
N
H
n
酰胺基中的羰基与酚类、黄酮类、酚类中 的羟基或羧基形成氢键；酰胺基中的氨基与醌 类、硝基类中的醌基、硝基形成氢键而产生吸 附作用。
因为流动相的量很大，Ym n Ya n 近似于常数，而
且吸附只发生于吸附剂表面，所以，吸附平衡常 数可写成
K
Xa X m
Xa / Sa X m /Vm
Cs Cm
[ X a ]为溶质分子在吸附剂表面的浓度 [ X m ]为溶质分子在流动相中的浓度
Sa为吸附剂表面面积 Vm为流动相的体积
CS为溶质在固定相表面的分析浓度， Cm为溶质在流动相中的分析浓度
吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强
物质的极性 吸附剂活性
大
小
防吸附太牢,难洗脱
小
大
防tR太小,不易分离
3. 流动相的极性 流动相极性大，对被测组分的洗脱能力强
常用流动相极性强弱顺序:
石油醚 < 环己烷 < 四氯化碳 < 苯 < 甲苯 < 乙醚 < 氯仿< 醋酸乙酯 < 正丁醇 < 丙醇 < 乙醇、甲醇 < 水
被分离物质的极性与结构的关系 (1) 基本母核相同 , 基团极性愈大 , 分子极性愈大。 基本母核相同 , 极性基团数目愈多 , 分子极性愈大。
(2) 分子双键多, 吸附力 ↑。 (3) 空间排列 , 影响极性。
例如羟基处于能形成分子内氢键的位置时
OH C
O H O
< HO
O C OH
2. 吸附剂的活性:
分配色谱根据固定液和流动相的相对极性， 可以分为两类：正相色谱和反相色谱
பைடு நூலகம்
正相色谱
反相色谱
固定液极性
大
小
流动相极性
小
大
适于分离的物质 极性物质
中等极性至非极性的物质
流出顺序 极性小的组分先流出柱 极性大的组分先流出
在正相色谱法中，固定液有水、各种缓冲溶 液、稀硫酸、甲醇、甲酰胺或丙二醇等强极 性溶剂，以及它们的混合液. 用极性较小的有 机溶剂为洗脱剂进行洗脱分离。
K与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的
性质及温度有关。
K值小，说明该物质的吸附能力弱，在固定相 中滞留时间短，移动速率快，先流出色谱柱；若 K值大，说明该物质的吸附能力强，在固定相中 滞留时间长，移动速率慢，后流出色谱柱。在一 定条件下，不同组分因吸附系数的差异得以分离。
2．吸附等温线
在一定温度下，某一组分在固定相和流动相
（优选）经典液相色 谱法
1
吸附过程是试样中组分分子与流动相分子 争夺吸附剂表面活性中心的过程。
图10-1 吸附色谱示意图 m.流动相 a.吸附剂 Xm.流动相中溶质分子 Ym.流动相分子 Xa.被吸附的溶质分子
这种吸附平衡过程可表示为
Xm + nYa
吸附 解吸附
Xa + nYm
吸附平衡常数:
K
X a Ym n X m Ya n
被分离物质的极性 大 小
吸附剂活性 小 大
流动相极性 大 小
流动相可用一元 , 两元或三元，也可采用 梯度洗脱等技术 。
第2节 液-液分配柱色谱法（LLC）
一、基本原理 将液体均匀地涂渍在惰性物质(载体)表
面上作为固定相，利用被分离组分在固定相 与流动相中的溶解度差别所造成的分配系数 差别而被分离。