实验1细菌的培养方法剖析
实验一大肠杆菌的培养和分离
答：皿盖与皿底之间的培养基易滋生杂菌，因 此不宜用此皿继续培养。
连续划线法
2.为什么要研究微生物？
90%以上对人类有利的，少数能引起传染病。 1.利用微生物生产食品、药品，如酒类、抗生素等； 2.微生物治理环境污染； 3.利用微生物生产新能源。 4.用于基因工程
一、实验目的（教学要求）
1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌 培养的操作； 2.进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的 划线培养。 3.说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
稀释→涂布→培养
玻璃 三角 刮刀
划线分离法：简单。涂布分离法：单菌落更易 分开，但操作复杂些。
4.扩大培养过程和分离过程
（1）制备５０ml的LB（液体和固体）培养基
①配制：： 蛋白胨：０.５g 酵母提取物：０.２５g 氯化钠：０.５g 溶于热水并加水至５０ml，并调pH（７.６）
固体培养基： 上述物质中再加１g琼脂。
答：利用标记基因所对应的性状（如抗青霉素） 保留转基因大肠杆菌，杀死普通大肠杆菌。
６.本实验的目的是什么？
答：尝试培养微生物的基本技术；学习培养、 分离提纯大肠杆菌的方法。
７.本实验的实验原理是什么？
答：微生物能够利用培养基中的各种营养物质 进行生长和繁殖。划线或涂布可以使单个细菌 繁殖成单个菌落，从而分离。
②灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，
塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭
菌锅，在压力为1kg/cm2、温度为121℃，灭菌
15min。 ③倒平板:
待培养基冷却到６0 ℃左右时，在酒精灯附 近倒平板。（倒平板操作见课本）(试管斜面的 制作方法类似)
培养细菌的方法
培养细菌的方法
培养细菌是微生物学实验中的重要步骤，也是许多生物学研究的基础工作。
正确的培养方法能够保证细菌的生长和繁殖，为后续实验提供可靠的数据。
下面将介绍一些常用的培养细菌的方法。
首先，准备培养基。
培养基是细菌生长所需的营养物质和生长条件的组合。
常见的培养基有营养琼脂培养基、LB培养基、大肠杆菌选择性培养基等。
根据需要选择合适的培养基，并按照配方将其溶解于适量的蒸馏水中，再进行高温高压灭菌处理，确保培养基的无菌。
其次，接种细菌。
在进行培养前，需要将所需的细菌接种到培养基中。
通常的方法是取一小部分细菌悬液，用无菌吸管或移液器滴加到培养基表面，然后用无菌的平板扩散器均匀涂抹，使细菌均匀分布在培养基表面。
然后，进行培养。
将接种好的培养基放入培养皿或培养瓶中，然后放入恒温培养箱或恒温培养箱中，根据细菌的生长条件进行相应的温度和湿度控制。
一般来说，大多数细菌在37摄氏度下生长较好，但也有一些特殊的细菌需要在其他温度下培养。
最后，观察和记录。
在培养一定时间后，需要观察培养基上的细菌生长情况，包括菌落的形态、颜色、大小等特征。
同时，要记录培养的时间、温度、湿度等条件，以及观察到的细菌生长情况，这些数据将有助于后续的实验分析和结果验证。
总之，培养细菌是微生物学实验中的重要环节，正确的培养方法能够保证细菌的生长和繁殖，为后续实验提供可靠的数据。
通过正确准备培养基、接种细菌、进行培养和观察记录等步骤，可以有效地进行细菌培养工作。
希望以上方法能够对您在实验中的细菌培养工作有所帮助。
实验一大肠杆菌的分离和培养
细菌
2.微生物涉及五类 放线菌
真菌
原生动物
(二)培养基
• 1.分类(按物理形态分) • (1)液体培养基 • (2)固体培养基
①常用旳固体培养基: 琼脂固体培养基.
②微生物在固体培养基 表面生长,能够形成 肉眼可见旳菌落.
2.培养基内所含旳基本物质
• (1)水 • (2)碳源 • (3)氮源 • (4)无机盐
a.灼烧灭菌
注意合用范围
微生物旳接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰旳充分燃烧层灼烧
b. 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h
能耐高温旳需要保持干 燥旳物品( 玻璃器皿)
c.高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min
一般用于培养基旳灭菌
二、试验操作 • （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
• 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板
• （二）分离纯化大肠杆菌
• 接种措施有：
• 划种未接 种旳培养基放入37℃恒温箱中培养12h 和24h后，观察并统计
三、课题延伸：菌种旳保藏
• 1、斜面保藏 • （临时保存） • 2、甘油保藏
（长久保 存）
试验1：大肠杆菌旳培养和分离
角烧瓶旳液体培养基中，三角烧瓶在37℃摇床振荡培养 12h。 • (4) 划线分离：将摇床上培养12h旳菌液在固体培养基旳 平板上连续划线，然后将盖好旳培养皿倒置，放在37℃ 恒温培养箱中进行培养。 • (5)单菌落接种培养：在无菌操作下将单菌落用接种环取 出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培养24h, 4℃冰箱保存。
设备及用具：
灭菌锅或高压锅、250ml旳三角瓶、封口膜和橡皮圈、 直径90mm旳培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培 养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有 酒精棉球旳广口瓶、镊子、有棉塞旳试管 （15mm×120mm）5支
咽炎细菌培养实验报告
咽炎细菌培养实验报告1. 引言咽炎是指咽黏膜发炎的疾病，常见的症状包括咽部疼痛、咳嗽、咯痰等。
咽炎的病因复杂，细菌感染是其中的一种常见原因。
为了研究咽炎的病原细菌，本实验使用了咽炎患者的样本，并进行了细菌培养实验。
2. 实验目的研究咽炎的病原细菌，并对其进行鉴定和分析。
3. 实验方法3.1 实验材料和设备- 咽炎患者的咽拭子样本- 营养琼脂培养基- 细菌培养培养皿- 灭菌针头和铲子- 无菌移液管和移液器3.2 实验步骤1. 用无菌的物理方法采集咽拭子样本，并将样本涂抹在营养琼脂培养基上。
2. 用无菌的铲子在琼脂培养基表面划开几条线，以分离不同的细菌。
3. 将培养皿倒置放入恒温培养箱，温度设定在37摄氏度，并保持湿润的环境，利于细菌的生长。
4. 培养箱中保持24小时。
5. 观察培养皿中是否有细菌生长，记录各个菌落的数量和形态。
6. 选取单一的菌落，用无菌的灭菌针头进行刺取，进行纯培养。
7. 对纯培养的细菌进行形态观察、生理和生化鉴定，包括形状、色素特征、氧需求、相对营养分解能力等。
4. 实验结果观察到在培养皿上有细菌生长。
通过形态观察，发现有三种不同的菌落形态，分别是圆形、不规则形和线形。
每种形态的菌落数量分别是10个、8个和5个。
经过纯培养后，我们观察到圆形菌落的细菌具有梭形状、黄色素特征、需氧生长和相对葡萄糖分解能力，初步鉴定为链球菌；不规则形菌落的细菌呈现圆形、白色素特征、厌氧生长和相对淀粉分解能力，初步鉴定为葡萄球菌；线形菌落的细菌形状为长条形、无色素特征、需氧生长和相对蛋白质分解能力，初步鉴定为肠杆菌。
5. 结论通过本实验的细菌培养和鉴定，初步发现了链球菌、葡萄球菌和肠杆菌三种细菌，这些细菌存在于咽炎患者的样本中。
链球菌和葡萄球菌是两种常见的致病菌，其存在可能是导致咽炎的主要原因之一。
进一步的研究可以对不同细菌的抗生素耐药性以及它们在咽炎发展中的作用进行探索，并为咽炎的治疗和预防提供理论依据。
实验一细菌的形态结构观察
实验一细菌的形态结构观察引言：细菌属于原核生物，是一类非常小的微生物，其形态结构一直是微生物学领域的重要研究内容。
通过观察细菌的形态结构，可以了解其生物学特性，甚至为细菌的分类和鉴定提供辅助依据。
本实验旨在通过显微镜观察、绘制不同种类细菌的形态特征，并对其进行描述和分析。
材料和方法：1.细菌样本：从环境中采集的细菌样本，使用无菌技术制备细菌涂片；2.显微镜：高性能光学显微镜；3.其他实验工具：无菌培养皿、无菌移液器、无菌盖玻片、无菌镊子等。
实验步骤：1.细菌准备：在无菌实验台上，取一块无菌盖玻片，用无菌镊子取一小滴待观察的细菌悬浮液在盖玻片上；2.细菌涂片制备：将另一块无菌盖玻片，倾斜放在含细菌悬浮液的盖玻片上，使两个盖玻片接触并自然扩散，制备细菌涂片；3.固定细菌：将细菌涂片在微火上加热，使细菌固定在玻片上；4.染色：将固定的细菌涂片浸入甲醇中进行固定，并在甲醇中静置3-5分钟；5.除染：将固定染色的细菌涂片置于水龙头下轻轻冲洗，冲洗到水清澈；6.贴片：将染好的细菌涂片倒置在无菌盖玻片上，用手指轻轻压实；7.观察：将贴好的细菌涂片放在显微镜下，逐个观察细菌的形态结构；8.绘制：选取有代表性的细菌形态，在实验记录本中进行绘制和注释。
结果和讨论：通过以上实验步骤，我们观察到了不同细菌的形态结构，如以下几个典型细菌的形态特征描述。
1. 球菌（cocci）：球形或近球形的单细胞菌，如葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。
形态特征：球形，直径约0.5-1微米，聚集在一起呈葡萄状、串珠状。
2. 杆菌（bacilli）：长形的单细胞菌，如大肠杆菌（Escherichia coli）。
形态特征：长棍状，直径约0.5-1微米，长度约2-6微米。
3. 弯曲菌（spirilla）：弯曲或螺旋形的细胞，如鲍曼不动杆菌（Vibrio cholerae）。
形态特征：螺旋形，直径约0.5-1微米，长度约2-6微米。
实验1 大肠杆菌的培养和分离
（2）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行 诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。 步骤2:制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意＿和 ＿，加琼脂后灭菌，制成
本图来自十一学校
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
细菌的分离方法
1.种类: 划线分离法和涂布分离法。 划线分离法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操 作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面. 划线时不能划破培养基
2.作用: 是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表 达量菌株的最简便方法之一。
实验一
大肠杆菌的培养和分离
微生物
定义:结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有 细胞结构的低等生物，包括病毒、原核生物、原生 生物和某些真菌。
曲霉
酵
母
菌
草履虫
细菌：是单细胞的原核生物。 结构组成：细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，拟核 分裂方式：二分裂
菌落：由单个细菌（或其他微生物）在适宜固体培养 基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有 一定形态结构等特征的子细胞的群落。
为什么要倒置培养？
培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，正放培养 皿会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的表面并 且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落间相互 影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。
1.下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接 种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。
实验1,大肠杆菌的培养和分离
实验1,大肠杆菌的培养和分离篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。
3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。
实验材料1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。
2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。
实验步骤1. 培养基灭菌。
在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB 固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。
既可以通气，又不使细菌进入。
)。
将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。
同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。
2. 倒平板，倒斜面。
灭菌后。
待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。
超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。
将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。
待固体培养基冷却到60℃时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10～20mL倒入1 个培养皿中。
倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面。
倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL。
细菌培养技术及培养性状观察实验报告
细菌培养技术及培养性状观察实验报告一、实验背景咱在微生物学的学习过程中呀，细菌培养技术那可太重要啦。
就像你要了解一个小生物的习性，就得把它养起来观察一样。
细菌虽然小得看不见摸不着，但是它们无处不在，对我们的生活影响可大了呢。
所以呢，做这个细菌培养技术及培养性状观察的实验，就像是去探索一个神秘的小世界。
二、实验目的咱为啥要做这个实验呢？其实就是想学会怎么把细菌养得白白胖胖的，哦，不对，是健康地培养起来啦。
然后呢，通过观察它们的培养性状，像是菌落的形状呀、颜色呀、质地啥的，来更好地认识不同的细菌。
这就好比你认识不同的小伙伴，看他们的长相、性格来区分他们一样。
三、实验材料1. 细菌样本：这个可是主角呢，就像演员一样，没有它咱这戏可没法演。
我们用的是从实验室保存的一些标准菌株，像大肠杆菌之类的。
2. 培养基：这就像是细菌的食物和住所啦。
我们用的有营养琼脂培养基，它富含各种营养成分，能让细菌茁壮成长。
3. 接种工具：像接种环、接种针这些小玩意儿，它们就像是小勺子，把细菌从一个地方“舀”到培养基上。
4. 培养箱：这是细菌的小温室，能提供合适的温度、湿度和气体环境，让细菌们舒舒服服地生活。
四、实验步骤1. 培养基的制备先称取适量的营养琼脂粉末，按照说明书上的比例，加入一定量的蒸馏水。
这个比例可不能乱，就像做饭的时候盐放多放少味道可就不一样了。
然后在加热搅拌器上加热，不停地搅拌，直到琼脂完全溶解。
这个过程可要有耐心，就像熬粥一样，不能心急，不然琼脂可能会糊底呢。
等琼脂溶液冷却到合适的温度，大概50 - 60摄氏度的时候，就可以倒入培养皿中了。
要小心地倒，不能让溶液溅出来，不然培养皿里的培养基就不平整啦。
2. 细菌接种首先把接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌，这一步可不能马虎，就像进家门要先洗手一样，要把接种环上的杂菌都消灭掉。
然后蘸取少量的细菌样本，在琼脂培养基表面轻轻地划线接种。
这个动作要轻，就像给小宝宝擦脸一样，不能把培养基弄破了。
细菌的培养实验
细菌的培养实验细菌的培养实验是微生物学中的重要实验之一，它帮助我们了解细菌生长的条件以及它们对环境的适应能力。
在本实验中，我们将展示一种常用的培养细菌的方法——琼脂培养法。
实验材料和设备：1. 琼脂培养基2. 细菌液体培养物3. 灭菌的平板、试管、培养皿等4. 灭菌环、移液管、移液枪5. 实验室安全设备，如手套、防护眼镜实验步骤：1. 准备琼脂培养基：将适量的琼脂粉溶解在适量的蒸馏水中，加热煮沸使之完全溶解。
2. 蒸馏水的消毒处理：将蒸馏水倒入试管中，用自动高温高压灭菌器进行高温高压灭菌处理，使其达到无菌状态。
3. 准备试管：取3支无菌试管，用高温高压灭菌器进行高温高压灭菌处理，使其达到无菌状态。
4. 准备移液枪和平板：将移液枪头部进行高温高压灭菌处理，将平板放入高温高压灭菌器中进行无菌处理。
5. 接种细菌：将适量的细菌液体培养物取出并将其移液到无菌试管中，然后将试管倾斜，用灭菌环将液体均匀涂抹在平板上。
6. 培养细菌：将已涂抹细菌的平板放入恒温培养箱中，设定适合细菌生长的温度和时间，让细菌进行培养。
7. 观察结果：在培养时间结束后，取出培养好的平板，观察是否有细菌生长，并记录下细菌的数量和形态特征。
讨论和分析：在实验过程中，我们利用琼脂培养基提供了细菌生长所需的营养物质和适宜的环境条件。
而细菌的液体培养物则作为实验前期的来源，通过适量的接种和平板涂抹，将细菌均匀分布在平板上。
培养箱提供了适宜的温度和湿度条件，促使细菌的生长和繁殖。
实验结果的观察和记录是实验的重要一环，在观察时需要注意细菌的数量、颜色、形状和其他特征。
通过这些观察，我们可以了解到不同细菌对于不同培养条件的反应情况，比如某些细菌在一定条件下会形成菌落，而在其他条件下则可能无法生长。
通过这个实验，我们可以探索细菌生长的规律和影响因素。
并且，细菌的培养实验在医学、食品工业等领域具有广泛应用，它为我们研究和应对细菌感染提供了重要的手段。
实验1 大肠杆菌的培养和分离
()
A．属于单细胞的原核生物 B．在固体培养基表面可见其细胞
C．细胞壁成分与植物不同 D．细胞中含有DNA和RNA
2．微生物实验中分别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几种不同的灭菌处理，这些方法依次
可以用于杀灭什么部位的杂菌
()
A．接种针、手、培养基 B．高压锅、手、接种环
C．培养基、手、接种环 D．接种针、手、高压锅
平均菌落数÷涂布的稀释液体积×稀释倍数 （3）利用鉴别培养基确定细菌种类： 在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了 氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高 。因此，我们可以通过检测培 养基pH变化来判断该化学反应是否发生。在以尿素为唯一氮源的培养基 中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，说 明该细菌能够分解尿素。 3．思考题： （1）农作物不能直接吸收利用尿素，但尿素却是农业生产上的重 要氮肥。农作物如何利用尿素中的氮？
环温度较高，为避免烫死菌种，可将其接触
冷却后再取样和接种。
4．接种划线：在固体培养基的表面连续划线
条，将培养皿转动一定角度后，用接种
环通过第1次划线的
做第2次连续平行划线，然后再以同样方法依次操作。
划线时要轻，不可
，也不要使接种环碰到培养皿边缘。
划线后盖好培养皿，将培养皿
，将培养皿放入恒温培养箱中在
面。 待酒精挥发之后，再点燃酒精灯。 2．接种 （1）接种时的要求 接种过程要在酒精灯火焰附近完成，这是因为在火焰附近形成的上
升气流能避免空气中的微生物落入培养基中。 接种环灭菌：将接种环在酒精灯火焰的外焰灼烧灭菌。对金属丝与
柄部连接部位也要在火焰上穿梭1－2次。灼烧后的接种环温度较高，为 避免烫死菌种，可将其接触培养基或培养容器的内壁冷却后再取菌种。
试验1大肠杆菌的培养与分离
.实验1：大肠杆菌的培养和分离一、教学要求二、基本内容1．培养基的种类和化学成份培养基的种类有很多划分标准，按物理性质分：固体培养基和液体培养基（加入琼脂多少）。
液体培养基用于扩大培养和工业生产，固体培养基用于菌种分离，鉴定，计数（菌落数量）。
培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
按照微生物的同化作用类型是自养还是异养，碳源不同，自养微生物为无机碳源，如硝化细菌是二氧化碳或碳酸盐，异养微生物为有机碳源，如大肠杆菌是葡萄糖等有机物。
2．常见微生物类群原核生物（如细菌大肠杆菌――二分裂、革兰氏阴性、异养兼性厌氧性肠道杆菌、蓝藻、支原体、衣原体、放线菌等）、原生生物（草履虫、变形虫等）、真菌（酵母菌――出芽生殖.异养兼性厌氧性微生物、霉菌、食用菌）、病毒等。
细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核，只有一环状DNA分子（拟核）。
以分裂（二分裂）的方式繁殖，分裂速度很快。
用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌（革兰氏染液染色后，再脱色处理，细菌仍保留染色液的颜色）和革兰氏阴性菌两大类，区别在细胞壁的成分不同。
大肠杆菌是革兰氏阴性（细胞壁薄，有荚膜）、兼性厌氧的肠道杆菌。
3．无菌技术对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。
灭菌方法：。
灼烧灭菌法①接种环、接种针、试管口等使用..②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱。
③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。
④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。
4．培养基的配制原则目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。
营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。
pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。
微生物分析培养介绍(2024)
引言概述微生物分析培养是一种重要的实验技术，用于分离和培养微生物。
通过对微生物的分析和培养，我们可以了解微生物的类型、特性和生态功能，也可以研究微生物与人类健康、环境功能以及工业和农业生产等方面的关系。
本文将详细介绍微生物分析培养的步骤、方法和应用。
正文内容一、微生物分析培养的步骤1.样品采集：首先需要选择适当的样品，例如土壤、水体、食品、体液等。
然后使用无菌工具采集样品，并将样品尽快送至实验室进行分析。
2.样品处理：对于含有大量杂菌的样品，需要进行处理，以减少杂菌对目标微生物的干扰。
处理方法包括稀释、过滤、离心等。
3.分离：将处理后的样品在无菌条件下分离到含有营养成分的培养基上。
通常采用平板、液体或半固体培养基。
4.培养：将分离后的微生物在恰当的温度、湿度和氧气条件下进行培养。
培养的时间因微生物种类不同而异，一般需要数天至数周。
5.鉴定：根据微生物的形态特征、生理生化特性和遗传特性等进行微生物鉴定。
常用的鉴定方法包括形态学观察、生化试验、分子生物学方法等。
二、微生物分析培养的方法1.纯培养法：通过单个菌落的选取和传代，获得纯种菌株。
这种方法可以用于对纯种微生物的性状、生长特性以及代谢功能等进行研究。
2.表型微生物分析方法：根据微生物在培养基上的营养需求、形态特征、生长速度和产物等，通过观察和测量这些表型特征来分析和鉴定微生物。
3.基因分析方法：通过分析微生物的基因组DNA或RNA，利用PCR、测序等技术进行基因分型、基因表达和基因功能等方面的研究。
4.免疫学分析方法：通过检测微生物特异性抗原或抗体来鉴定和分析微生物。
常用的方法包括免疫荧光、酶联免疫吸附测定等。
5.分子生物学方法：利用PCR、基因克隆、DNA测序等技术，对微生物的基因表达、基因功能以及微生物与宿主相互作用等进行分析和研究。
三、微生物分析培养的应用1.医学领域：微生物分析培养在临床诊断和治疗方面起着重要的作用。
通过培养和鉴定微生物，可以确定感染病原菌，选择合适的抗生素进行治疗。
实验1-大肠杆菌的培养和分离
Step5：菌种的斜面保存
斜面培养基
⑤将接种环将单菌落取出，用划线法接种在斜面培养 基上，37℃培养24 h后，置于4℃冰箱中保存。
试管斜面培养基的制作
方法：将未凝固的含有琼脂的培养基加入试管中，灭菌 后将试管斜放，令其冷却，固体培养基即成为斜面。
平板划线分离法
①灼烧接种环
外焰
先灼烧后冷却：以免接种环温度太高，杀死菌种。
（2）获得纯净微生物培养物的关键是 防止被杂菌污染 ，为 此，必须对培养器皿、接种用具和培养基进行严格灭菌。培 养器皿和培养基一般采用高压蒸汽灭菌 法灭菌，接种环采用 灼烧法灭菌。同时在接种或倒平板操作时，除了在超净台上 进行操作并对实验者的衣着、手和实验空间进行严格清洁和 消毒外，还必须 保证操作过程在酒精 以防止空气中的杂 灯火焰旁进行 菌污染。 （3）大肠杆菌菌种的扩大培养一般采用液体培养基，接种 后将培养基置于37℃摇床振荡条件下培养12 h。菌种的分离 一般在固体培养基上采用划线分离 法，并将培养皿以 倒置 状 态放置于适宜温度的恒温箱中，培养12～24 h 后， 将单菌落用接 ，接种于固体斜面培养基上，37℃培养 种环取出 24 h后，得到的纯化菌种在 4℃ 条件下保存。
枪头
棉花塞、封口膜、牛皮纸或旧报纸、橡皮筋
不能用脱脂棉：易吸水，容易引起污染。
酒精灯和酒精棉球
灭菌：杀死所有微生物。 消毒：杀死部分微生物（不包括芽孢和孢子）。
超净工作台
防止杂菌污染
酒精灯火焰附近旁进行
灼烧灭菌 ①打开紫外灯和过滤风，灭菌30 min。 ②点燃酒精灯→酒精棉擦拭桌面→酒精棉球擦手。
超净台
②在酒精灯火焰旁将三角瓶中的固体培养基（冷却到60℃） 倒入灭菌的培养皿中，置于水平放置上，并轻轻晃动，待 凝固后形成平面。
实验一的实验报告
实验一细菌的革兰染色、培养与分布
实验报告
一、细菌的革兰染色：
1、革兰染色的操作步骤：
1）初染:加染色，染色时间为，水
洗
2）媒染:加染色.染色时间为，水
洗
3）脱色:加脱色,时间为，水
洗
4）复染:加染色.染色时间为，水
洗
5）干燥，油镜镜检。
2、金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌的革兰染色结果
1）根据油镜所观察的结果绘图，绘图要求用红蓝铅笔，着重绘制出细菌的染色、排列与大小特点，请勿只绘制单个细菌。
金黄色葡萄球菌
(X 1 000 倍)
2）描述革兰染色的结果：
镜下的金黄色葡萄球菌为______ 色,为革兰—性菌,呈__________ 状排列；
镜下的大肠埃希菌为_____色,为革兰—性菌，呈_________ 状排列；
二、简述学习细菌分布的意义
大肠埃希菌
(X 1 000 倍)
三、细菌特殊结构染色的示教
根据油镜所观察的结果绘图，绘图要求用红蓝铅笔，着重绘制出细菌特殊结构的染色特点，请勿只绘制单个细菌。
产气荚膜梭菌的荚膜
(X 1 000 倍)
肉毒梭菌的芽胞(X 1 000 倍)。
实验1：大肠杆菌的培养和分离
04 实验结果与分析
大肠杆菌的培养结果
培养基上生长情况
大肠杆菌在培养基上生长良好，菌落 形态呈圆形、湿润、表面光滑，颜色 为乳白色。
生化反应
大肠杆菌能够发酵乳糖产酸，在生化 反应中表现出特定的特征性变化。
菌落计数
通过菌落计数，我们得到了大肠杆菌 的菌落数量，菌落数量在适宜的条件 下随着培养时间的延长而增加。
详细描述
将接种后的培养皿放置在恒温培养箱中，保持适宜的温度和湿度。在培养过程中，要定期观察大肠杆 菌的生长情况，记录生长曲线，以便后续分析。培养过程中要保持培养皿的清洁，防止杂菌污染。
大肠杆菌的分离
总结词
分离是通过一定的技术手段将目标微生物从混合菌群中单独 获取的过程。
详细描述
在大肠杆菌培养完成后，采用涂布法或划线法将菌落分离， 获得单菌落。分离过程中要保证无菌操作，避免交叉污染。 分离得到的单菌落可用于后续的鉴定和实验研究。
了解大肠杆菌的生物学特性
了解大肠杆菌的形态、染色、生化反 应等生物学特性，能够通过实验结果 判断所分离的菌株是否为大肠杆菌。
了解大肠杆菌的致病性，包括其产生 的毒素、侵袭力、抵抗力等方面的特 性，为后续实验和研究提供基础。
掌握微生物实验的基本操作
掌握微生物实验的基本操作，包括无菌操作、显微镜使用、细菌计数、菌种保存 等，能够独立完成微生物实验。
条件致病菌
在特定条件下，大肠杆菌可引 起肠道外感染，如败血症、新
生儿脑膜炎等。
抗原结构
大肠杆菌具有O抗原、H抗原 和K抗原，可用于血清学分型
。
大肠杆菌的培养基
01
02
03
基础培养基
如肉汤培养基、营养琼脂 培养基等，提供大肠杆菌 生长所需的基本营养成分。
高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》课件13 浙科版选修1
①常用的固体培养基:
琼脂固体培养基. ②微生物在固体培养基
表面生长,可以形成
肉眼可见的菌落.
第七页，共38页。
2.培养基内所含的基本物质
• (1)水 • (2)碳源
• (3)氮源
• (4)无机盐
第八页，共38页。
3.培养基内所需的其他条件 • (1)pH值 • 如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱
α-固定化酶的使用 α-固定化酶 条件和效果
枯草杆菌
果酒和果醋的制作 果酒:酵母菌+天然 干酵母 果醋:醋化醋杆菌 菌种或醋曲
泡菜的腌制和亚硝 假丝酵母、乳酸菌 天然微生物 酸的测定
植物组织培养
菊花
第二页，共38页。
实验1 大肠杆菌的培养和分离
• 实验目的： • 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进
的铅笔上，冷却后使培养基形成斜面。
第二十页，共38页。
步骤:
１、配制培养基; 培养基灭菌、器具灭菌
2、冷却，倒平板 (编号,无菌环境操无菌环境操作)
４、划线分离、恒温培养箱培养12~24h
(无菌环境操作)
５、接种斜面,4℃冰箱保存(目的:为了保存菌种)
6、实验完成后，接触过细菌的器皿均应灭菌处理后丢失。
4℃冰箱保存。
视频
6.实验完成后，接触过细菌的器皿均应灭菌处 理后丢弃。 目的：为了防止实验菌残留于接种环而污染环境 和感染实验人员。
第三十一页，共38页。
1为了获得纯净的培养物，其关键是防止外来杂菌的入侵 污染： 1）培养皿； 2）培养基； 3）接种过程是无菌的 2请思考：培养基、培养皿、手、接种环分别如何消毒或 灭菌？
实验1_细菌的培养方法
实验1_细菌的培养方法实验原理：细菌的培养是微生物实验室中最基本的实验之一。
细菌的培养一般用于检测食品、水、空气等样品中的微生物污染，同时也可以用于研究细菌的形态、生长、代谢以及对不同环境因素的响应等。
在进行细菌培养的过程中，需要注意无菌操作，以免造成交叉污染。
细菌培养的基本条件包括生长温度、生长时间、培养基成分、pH值等。
光照条件和氧气浓度也会影响不同细菌的生长。
一般情况下，常用的细菌培养基包括富养基和贫养基，分别用于不同种类的细菌的培养。
实验材料：1. 常见的两种培养基：营养琼脂液和LB培养基2. 培养皿：琼脂培养皿、LB平板（含琼脂）、枯草芽孢液培养皿3. 细菌菌株：彩虹菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌实验步骤：1. 实验前洗手，穿好实验服，进行无菌操作前进行消毒处理。
2. 取一根消毒好的骨针，在火炉上消过毒后，捅入细菌液中，将细菌涂在琼脂平板上，压平，记住顶的顺序和位置，避免重叠。
3. 将琼脂平板放入恒温箱中，通常37℃下培养。
4. 24小时后，观察菌落生长情况。
5. 对得到的细菌菌落进行形态学观察。
6. 将枯草芽孢杆菌转种到含有枯草芽孢液的培养皿中，培养在恒温箱中24小时。
7. 对得到的芽孢杆菌孢子进行形态学观察。
实验结果：1. 彩虹菌、大肠杆菌在琼脂平板上生长并形成菌落。
2. 根据不同细菌的形态和特点进行观察和鉴定，验证其真实性。
3. 枯草芽孢杆菌在含有枯草芽孢液的培养皿中孢子形成并呈现草堆状。
实验小结：1. 细菌培养是微生物实验室中非常基本的实验，对于细菌的形态、生长、代谢等都有很大的意义。
2. 细菌的培养必须要做好无菌操作，以免发生交叉污染。
3. 常用的培养基有富养基和贫养基，通常在37℃下培养24小时。
4. 在观察细菌的生长情况时，需要仔细观察菌落的生长状态和形状，结合细菌的形态学和生理生化特征进行判断和鉴定。
实验一 大肠杆菌的培养和分离
细菌培养基需求中性偏碱，霉菌培养基需求中性偏酸。
LB液体培养基：
细菌在液体培养基中 扩大培养
LB固体培养基
倒入平板，用 于分离细菌
制成斜面，用于保存 细菌
（三)细菌的分离
划线分离
操作简单
涂布分离
单菌落更易分开
操作复杂
（三）无菌技术
泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 1、消毒： 是指杀灭大部分病原微生物的方法。 常用消毒方法： （1）100℃煮沸5-6min （2）巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min （3）用75%酒精等进行皮肤消毒 （4）紫外线消毒
进行操作时，注意瓶口、壁上等不能沾有培养基，否则易发生污染。
大肠杆菌的培养和分离实验操作步骤
• 实验器材
培养基（微生物生存的环境和营养物质）
LB液体培养基 大肠杆菌菌种斜面 空白斜面
（一）培养基的制备与灭菌
取两个250ml的三角瓶，分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，用牛皮 纸包装后放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。
（2） 划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端 开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个 细菌繁殖而来的菌落。
（3）为什么每次划线之前都要灼烧接种环？
每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留 的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的 末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减 少，以便得到单菌落。
即时反馈
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细菌的培养方法
（综合性实验）
实验内容
1. 实验室规则 2．录相：细菌标本的采集和细菌的接种方法
3．操作： ⑴ 细菌的接种法 （液体、半固体、固体 1套/3人） ⑵ 空气中细菌的检查 （沉降法 血平板 1块/6人） ⑶ 呼吸道细菌的检查 （咳碟培养 血平板 1块/3人） ⑷ 随身物品的细菌检查 （普通平板 1块/3人）
示教
2、细菌的二氧化碳培养法
某些细菌（脑膜炎双球菌、淋球双球菌、布氏杆 菌等少数细菌）的生长，需在孵育时加入5-10% CO2
烛缸法 二氧化碳孵箱
操作内容
1. 细菌的接种法：液体、半固体、固体培养基
2. 空气中细菌的检查（沉降法，血平板）
3. 呼吸道细菌的检查（咳碟培养，血平板）
4. 随身物品细菌检查（普通平板）
5、盖好平板，送37℃孵箱培育24小时后观察结果。
思考题
1.细菌接种的方法有哪些？各有什么用途？
2.厌氧菌为什么在有氧环境中不能生长？
谢谢！
5. 实验室不得高声喧哗，保持安静，守秩序，不要随便走
动，以免影响他人实验和安全。 6. 如果发生实验室不慎，吸入菌液、划破手指、培养物破 损传染物外溢，应及时报告，及时处理。 7. 实验过程中应注意节约实验材料、爱护仪器，损坏器材
要及时报告、登记、并作相应的赔偿。实验室内物品，
未经老师许可，严禁带出室外。
等生命活动。
人为地提供细菌生长繁殖所需的营养物质（适
宜的培养基）和创造适合细菌生长繁殖的有利条件
如温度、湿度、气体等，能使细菌在体外迅速生长 繁殖。
细菌生长繁殖的条件：
1．充足的营养物质 2．适宜的温度 3．合适的酸碱度（pH） 4．必要的气体环境
一、细菌生长繁殖所需营养
1．水 营养的吸收与代谢均需有水才能进行。 2．碳源 病原菌主要从糖类获得碳及能量。 3．氮源 其主要功能是作为菌体成分的原料。 4．无机盐 常用元素如磷、硫、钾、钠、镁、钙、铁等 5．生长因子 某些细菌生长所必需而又不能自身合成的有 机化合物。
操作一
细菌的接种法
细菌的分离接种是人工分离培养细菌的重要步 骤，是微生物学的基本技术之一，其目的是从含多 种细菌的患者标本中分离出单一病原菌，从而可以 进行感染性疾病的病原学诊断。 同时，在细菌学的研究，生物制品如疫苗、类 毒素、抗毒素和免疫血清等的制备，基因工程及工 农业生产等方面，人工培养分离细菌，都有着极为 重要的意义。
液体培养基
固体培养基半Βιβλιοθήκη 体培养基二、适宜的温度
嗜冷菌（10-20℃）
嗜温菌（20-40℃）：绝大多数病原菌
嗜热菌（50-60℃）
三、适宜的酸碱度（pH）
• 嗜中性菌（pH 6.0-8.0）
• 嗜酸性菌（pH < 5.5）
• 嗜碱性菌（pH > 8.5） 多数病原菌最适酸碱度为pH 7.2-7.6 –霍乱弧菌耐碱(pH 8.4-9.2)
4. 材料： ⑴ 大肠杆菌斜面培养物 （1支/6人） ⑵ 碘酒、75%酒精、棉签等 （1套/6人）
教学目标
了解：
培养基的类型与制备方法；细菌菌落的观察
常用的细菌接种方法和各种细菌的培养方法
掌握： 1. 细菌的液体、半固体、固体接种 2. 空气中细菌的检查方法——沉降法
3. 呼吸道细菌的检查法——咳碟法
操作方法：
打开血平板，将平板置于口腔前约15cm处， 对准培养基表面用力咳嗽3～4次，然后盖好平板 盖，放置于37℃孵箱内培养24小时后观察结果。
结果判断： 平板上可有不同的菌落长出，观察菌落的形 态、大小及溶血现象。
操作四
正常人体皮肤及随身物品的细菌检查
人体的皮肤表面有多种细菌存在，用水洗手或 用肥皂洗手，可以除去皮肤上的污垢和灰尘，从而
空气中细菌的数量和种类随地区、季节和人口 密度的不同而不同。通常，可测定单位体积空气中 所含细菌的数量来评价空气的污染程度。
沉降法是利用含有细菌的尘粒或气溶胶粒因重 力作用自然下降到培养基表面，通过细菌培养，计 数菌落数，粗略评估空气中细菌含量。 沉降法简单易行，缺点是不够准确。但它客观 地反映了空气污染的程度和卫生通风状况，对手术 室、食品业等有重要的参考意义，是判断空气污染 的指标之一。
注意：计数菌落时，两个或几个菌落边缘有重叠者，均 分别计算为两个或几个。
操作三 呼吸道细菌的检查—咳碟试验
人体呼吸道与外界相通，常常有不同种类的细 菌存在。其中，1/4为需氧菌，3/4为厌氧菌。这些 细菌常是条件致病菌，在一般情况下并不致病。有 时，正常人的呼吸道中也有致病菌的存在，如肺炎 球菌、脑膜炎球菌、乙型链球菌、流感杆菌等，是 引起疾病传播的一个重要因素。 由于寄居人体的关系，这些细菌对营养的要求 较高，常需要用含血液成分的培养基进行分离。
在基础培养基中加入葡萄糖、血液、酵母浸膏等。
3）鉴别培养基
在培养基中加入一定底物和指示剂，而不同种类的细
菌由于分解代谢及合成代谢能力的不同，会产生不同的特
征性培养结果，从而将不同细菌区分开来的培养基。
4）选择培养基
在培养基中加入某些特殊的营养物质或化学物质，使 之能抑制一些细菌生长，而有利于另一些细菌生长，从而 将后者从混杂的细菌群体中分离出来的培养基。
操作：将血平板打开盖，放到教室的四个角上， 静止15分钟后，合上盖送37℃孵箱培养。 据推算，每100cm² 培养基在空气中暴露5min， 其表面接受自然沉降的细菌数约相当于 10升空气中 所含的细菌量。那么，暴露于空气中15min应相当 于30升，所以，每m³ 空气中活菌数=（100 cm² 培养 基上菌落平均数/30）x1000
8. 每次实验之后，所用物品放回原处。需要培养或消毒处 理的物品及时送到指定地点，用过的涂菌载玻片放入小
桶内，不得乱丢乱放。
9. 实验完毕，整理桌面，肥皂洗手，值日生打扫实验室卫 生，关好水电门窗，待老师检查后方可离开。
细菌的人工培养
细菌和其它生物一样，大多数属异养菌，必须 从周围环境中摄取营养，进行新陈代谢及生长繁殖
减少手上细菌数量，但并不能有效的杀死细菌。日
常医疗、试验工作中常用的化学消毒剂如碘酒、酒 精等有很好的杀菌作用，在临床医疗中广泛应用。
操作方法
1、在平板底部用笔划分8个区，分别标记为①②③④⑤⑥⑦⑧。
2、用右手食指在①区上轻轻按一下，然后用肥皂洗手后，用无
菌棉签拭干手指皮肤，再轻轻在②区培养基上按一下。 3、用左手食指轻轻在③区按一下，然后用棉签蘸碘酒、酒精消 毒左手食指皮肤，待干后轻轻在④区按一下。 4、任取随身物品在⑤⑥⑦⑧区各按一下。
SS琼脂培养基（Salmonella-Shigella agar）
大肠埃希菌
沙门菌
志贺菌
5）厌氧培养基
用于培养厌氧性细菌的培养基，此时需要在培 养基中加入还原剂降低培养基的氧化还原电势，厌 氧菌才能生长发育。
疱肉培养基 ——不饱和脂肪酸和谷胱甘肽
（2）根据物理状态分
液体培养基：增菌 固体培养基（琼脂浓度为1.5％）：分离培养 半固体培养基（琼脂浓度为0.5%）：动力检查
培养基的制备
（一）培养基（culture medium）
由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖
使用的混合营养物制品。
1、培养基的类型及应用
（1）按用途划分 1）基础培养基
含多数细菌生长所需要的最基本营养，能满足一般 细菌生长繁殖的营养需要，如肉汤（含有水、牛肉 膏、蛋白胨、氯化钠等原料）。
2）营养培养基
4. 随身物品的细菌检查方法
实验室规则
微生物学实验的对象多为病原微生物，如有不慎 就会发生实验室感染。
1. 穿白大褂，尽量少带物件进实验室。
2. 严格按老师及教材要求进行实验，以获得正确结果。
3. 书、笔记本、笔等文具放入实验台抽屉里。 4. 严禁在实验室喝水，吃东西，用嘴咬笔或标签，不 要用手抚摸头、脸等部位，以免发生感染。
–结核分枝杆菌耐酸(pH 6.5-6.8)
四、适宜的气体环境
氧和二氧化碳
1、按细菌对氧的需求可分为四种类型：
专性需氧菌（obligate aerobe）
微需氧菌（microaerophilic bacterium） 兼性厌氧菌（facultative anaerobe）
专性厌氧菌（obligate anaerobe）
细菌的分离接种方法
1. 琼脂平板划线分离接种法（固体培养基）
划线法
2. 斜面培养基接种法（蛇形划线法） 3. 半固体培养基接种法（穿刺法） 4. 液体培养基接种法（乳磨法）
接种时要注意无菌操作，避免污染，也要防止细菌 外溢污染环境。
固体平板培养基的划线接种
三线法
划线接种手法
平板划线接种的结果——菌落观察
液体培养结果观察
沉 淀 生 长
混 浊 生 长
表 面 生 长
操作二
空气中细菌的检查
空气中没有营养物质，且受日光中紫外线的作 用，细菌一般不能繁殖。然而，土壤中有大量的细 菌存在，可随尘埃散布到空气中；寄生在人和动物 呼吸道及消化道中的细菌也能通过各种途径散布到 空气中，使得空气中也有一定量的细菌存在。
1．固体平板培养结果观察
单个微生物在适宜的固体培养基表面生长、
繁殖到一定程度，可以形成肉眼可见的有一定
形态结构的细菌集团，称为菌落（colony）。
菌落特征是鉴别细菌的重要依据之一。
菌落形态
肺炎克雷伯菌
奇异变形杆菌
链球菌
斜面培养基接种——蛇形划线
半固体培养基的穿刺接种及结果观察
液体培养基的乳磨接种手法