实验三 苦参生物碱的提取与鉴识
苦参生物碱的提取与分离
苦参生物碱的提取与分离张婷婷制药2班101310402290引言苦参又名苦骨、川参、凤凰爪、牛参、地槐、野槐等，为豆科多年生落叶亚灌木植物舌参根，采挖后去芦头及须根晒干切片入药，全国各地均产，功能主要为清热、燥湿、杀虫等，主治热毒血痢、肠风下血、黄疸、赤白带下、小儿肺炎、急性扁桃体炎等多种炎症和痔漏、疥癞恶疮、皮肤瘙痒、阴疮湿痒等疾病研究得知，苦参的根含有多种生物碱，如氧化苦参碱、羟基苦参碱、甲基野靛碱、臭豆碱、赝靛叶碱、脱氢苦参碱（槐果碱）等多种生物碱及黄酮类化合物因为苦参碱具有多方面的药理作用，如抗肿瘤作用、抗癌作用、抗病毒作用，所以对苦参总碱的提取与分离具有重要的意义苦参总碱的提取方法相对较多，本文中主要侧重论述苦参提取水煎法。
1 苦参碱以及其化学结构1.1苦参碱的基本性质苦参碱系指从豆科植物苦参、苦豆子、山豆根中分离出来的生物碱，是上述3种传统中草的主要活性成分之一，是苦参类生物碱的代表.《中国药典》2010年版一部中，是以苦参碱的含量作为苦参药材的质量控制指标［1］；2005年版一部中，苦参碱的含量也是苦参药材的质量控制指标之一.1.2 苦参碱的化学结构苦参碱是白金雀儿碱的异构体，属于喹喏里西啶类衍生物，由2个喹喏里西啶环骈合而成，有2个氮原子，一个是叔胺氮，一个是酰胺氮，其分子式为C15H24N2O,分子量为245.37.苦参碱有4种形态：α-苦参碱为针状或柱状结晶，熔点为760C;β-苦参碱为斜方晶状，熔点为870 C;γ-苦参碱为液体，沸点为2230Cδ- 苦参碱是柱状结晶，熔点为840 常用的是α- 苦参碱,其结构见图1.苦参碱能溶于水、苯、氯仿、甲醇、乙醇，微溶于石油醚。
图一α-苦参生物碱的结构图[2]2.苦参类生物碱的药理作用近年来发现苦参碱类生物碱在保护中枢神经系统和心血统、抗病毒、抗炎、免疫抑制及抗肿瘤等方面有重要的药理活性和应用前途［4］.2.1 苦参碱的抗肿瘤作用苦参碱类药物对于多种实验性肿瘤均有抑制作用，且多为移植性实体瘤.苦参碱和氧化苦参碱同是苦参中抗癌有效成分，对癌细胞有直接杀伤作用.电镜观察可见肿瘤细胞分裂呈中等抑制，瘤细胞膜和细胞质有明显改变.此外，苦参碱类药物具有毒性低、无抑制骨髓和机体免疫功能的优点.动物实验表明，氧化苦参碱对S -180有显著抑制作用.日本报道它对S -180的治疗指数比丝霉素的治疗指数大7至8倍，临床效果类似于苦参碱.另有发现：苦参碱对P815肿瘤细胞亦有直接毒性作用，能降低P815细胞的3H-TdR掺入值，这从机制上可能说明苦参碱是一种直接细胞代谢抑制剂.2.1.1 对肝癌细胞的作用一定浓度的苦参碱对HepG2细胞的增生有抑制作用[5]，主要为直接杀伤作用，从而影响了HepG2细胞的代谢，使AFP和PCN分裂指数降低，恶性表型消失，肿瘤细胞恶性程度和侵袭力减弱，这说明苦参碱可能成为很好的抗癌药物2.1.2 对胃癌细胞的作用苦参碱在体外对胃癌细胞具有杀伤作用，且在一定剂量和时间范围内呈明显的量效和时效关系,低分化的胃癌细胞AGT对苦参碱更为敏感,苦参碱对胃癌细胞株的外杀伤作用与其诱导胃癌细胞凋亡有关,将苦参碱作用于胃腺癌细胞SGC-7901 48h后，胃癌细胞Bcl-2表达量显著下降,可以推断出苦参碱对胃癌细胞凋亡的诱导作用可能与其影响Bcl-2的表达有关.2.1.3对肺癌细胞的作用实验表明，三参冲剂（主要成分为苦参碱和川芎嗪）对肿瘤细胞与内皮细胞的粘附因子有明显抑制作用，并可明显抑制CD44和CD49粘附因子的表达，从而抑制肿瘤细胞与内皮细胞的粘附，还可减轻内皮细胞的通透性，保护内皮细胞的完整性，阻断了肿瘤细胞与基质的粘附，从而减少了肿瘤转移的形成. 这主要是因为三参冲剂对Tiam-l基因具有一定调控作用.2.2 对中枢神经系统的作用研究发现氧化苦参碱、苦参碱等具有解热镇痛等中枢抑制性作用. 氧化苦参碱能明显抑制小鼠的自主活动，与水合氯醛等中枢抑制剂有协同作用，而对苯丙胺等中枢兴奋剂则有拮抗作用.苦参碱、氧化苦参碱对化学刺激和热刺激所致小鼠的疼痛反应均有明显抑制作用.苦参碱腹腔注射或口服均能抑制酵母菌致小鼠直肠升温作用，而此作用不能被阿托品和羟甲丙基麦角酰胺所拮抗，但可被多巴胺受体拮抗剂氟哌啶醇完全拮抗. 观察并推测苦参碱的解热功能除了对产热过程的直接作用外，还具有多巴胺能样活性.2.3 对心血管系统的作用大量研究表明，苦参碱在强心和抗心率失常方面有显著的作用. 苦参碱和氧化苦参碱均能对抗乌头碱、哇巴因、氯仿- 肾上腺素、氯化钡及冠脉结扎等诱发的动物实验性心率失常，且多为室性心率失常，并且均呈剂量依赖性的正性肌力作用. 实验证明，这几种生物碱都可显著增强离体豚鼠右心室乳头状肌收缩力.苦参碱作为潜在的强心药，一般同时具有增强心肌收缩力、减慢心率和拮抗心率失常的有益作用. 目前临床试用苦参碱和氧化苦参碱，发现对室性期前收缩、频发性期前收缩及阵发性心动过速效果较佳，这说明苦参碱类生物碱在强心和抗心率失常方面有着广阔的前景.2.4 抗病毒、抗炎作用2.4.1 在治疗乙型肝炎中的应用中药苦参碱治疗肝炎在《本草纲目》中已有记载. 中医认为，苦参碱性寒味苦，具有清热利湿、退黄利尿、消炎解毒等作用，可治疗多种疾病. 基础实验和临床研究表明，苦参碱具有多方面的药理作用及临床功能：①抑制胶原纤维增生而具有抗纤维化作用，这可能与其阻断PDGF（血小板源生长因子）和TGF-β1（转化生长因子β1）的作用，抑制储脂细胞增生和胶原合成有关［6］，苦参碱能够保护肝细胞，尤其是膜性结构，降低丙氨酸氨基转移酶、透明质酸、层黏蛋白水平，还可增加胆汁回流，消退黄疸；②抑制网状内皮系统吞噬功能，具有免疫调控作用. 苦参碱有免疫抑制活性，可抑制巨噬细胞胞浆、胞膜的PKC（蛋白激酶c）的活性，有可能成为一种有效的PKC 抑制剂. 实验证明苦参碱体内外均可抑制TNF 和IL-6的分泌，这可能与其抑制PKC 活性有关. 由于TNF 是肝脏炎症损伤中的重要介质，而对于LPS （细菌脂多糖）诱导的小鼠血清及培养的大鼠库普弗细胞的TNF 和IL-6升高，苦参碱都有抑制作用，这有可能是其消除肝脏炎症的机制之一. 苦参碱不仅有抗炎、抗肝损伤、改善肝脏微循环、促进肝细胞再生的作用，还有助于胆红素的摄取结合与排泄，起到降酶、退黄作用，并有抑制乙肝病毒复制和免疫抑制作用20世纪80年代以来干扰素被公认为有效的抗病毒药物，但其病毒学指标中HbeAG率约40％, 且停药后易复发. 干扰素主要通过与靶细胞膜上特异受体结合诱导靶细胞产生抗病毒蛋白，从而破坏病毒的mRNA ，抑制病毒复制，但其免疫调节作用弱. 而慢性乙型肝炎患者普遍存在免疫紊乱的情况，不利于乙型肝炎病毒的最终清除. 苦参碱注射液能提高机体免疫力，有清热利湿、利尿退黄、解毒功能，能改善病理性肝炎症状与体征. 干扰素加苦参碱注射液治疗慢性乙型肝炎能起到互补协同作用，能明显提高干扰素的治疗效果，临床无不良反应，值得推广应用.2.4.2 在治疗病毒型心肌炎中的应用陈曙霞等发现苦参碱具有独特的抗柯萨基B组病毒（CVB）的显著作用，体内外实验均证实病毒性心肌炎模型小鼠经苦参碱治疗后存活期明显延长，有的完全治愈，心、肝组织无病变发生，脾脏T 淋巴细胞亚群及NK 细胞活性亦改变.提示苦参碱能抑制LWB 繁殖，而且尚有免疫调节功能［8］. 实验和临床证明苦参碱类生物碱还有多种抗炎作用，其机制不详. 已有临床应用苦参碱静脉滴注治疗病毒性心肌炎的报道.3 苦参碱的提取与分离3.1 传统煎煮法对苦参的提取在苦参中苦参总碱或苦参碱及氧化苦参碱的提取方法中较为常用的有溶剂提取法和离子交换法. 笔者在实验中首先采用了传统的煎煮法：将中药苦参粗粉置适宜煎煮器中，加适量水浸没原料，充分浸泡后加热至沸，保持微沸浸出一定时间. 此法较简便，而且经煎煮后，药中的大部分成分可被不同程度地提出，因此是提取有效成分特别是药物制剂的基本方法.3.1.1 实验仪器包括电子天平、旋转蒸发器、电炉、磁力搅拌器、超声波振荡器等.3.1.2 材料苦参（购于中药市场，批号：20050715）、乙醇（AR）、乙酸乙酯（AR）、HCL（AR）、氯仿（AR）、NaOH、大孔吸附树脂、硅胶G 、纤维素钠、氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0402-200506）3.1.3 苦参提取水煎法首先用植物粉碎机粉碎苦参，并称取苦参粉100g加水1000ml 用电炉煮沸，煎煮1.5h，过滤收集药液. 再加水800ml电炉煮沸煎煮1h，过滤收集药液. 第3次加水600ml电炉煮沸，煎煮30min,过滤收集药液. 弃药渣合并三次药液，用纱布过滤冷却，并于3 000r/ min 离心5min，得上清液，于40C 冰箱冷藏备用. 旋转蒸发仪浓缩药液至50ml左右, 并过大孔吸附树脂（5ml/min）洗脱分离，得流出液，用80%的乙醇对大孔吸附树脂进行洗（2ml/min）再将流出液与洗脱液分别用氯仿、乙酸乙酯溶液萃取3次（8h次），用硅胶薄层层析，经显色鉴定表明流出液含有黄酮、洗脱液含有生物碱. 然后再用荧光显色鉴定，并与标准品对照，发现洗脱液中得到的生物碱至少含有3种.3.1.4 苦参碱的分离方法(1)准备吸附柱. ①取20AB-8树脂用清水浸泡15min;②取中小型柱子，洗净干燥，填入玻璃纤维；③将浸泡好的树脂与水一起转入柱子内，打开阀门排出多余水分；④用80%乙醇、5%盐酸溶液浸泡树脂过夜，再排出. 再第二次将上诉溶液加入柱子，浸泡4h.⑤用清水洗净，直到洗后溶液PH值为5为止；⑥用蒸馏水浸泡待用.2）薄层层析. ①将5g羧甲基纤维素钠加入100ml水溶解煮沸. ②将上诉溶液与硅胶G 以3：1的体积比调匀，并于1050C 下干燥40min. ③取一个载玻片，将干燥后的稠状液体均匀涂抹于上面, 干燥待用. ④在制备好的薄层上画一条基线，于中心点样药品原液数次. ⑤生物碱的展开剂为三氯甲烷、甲醇、氨水混合液，其中三氯甲烷：甲醇：氨水=5滴：0.6滴：6滴；对黄酮的展开剂为三氯甲烷和甲醇混合液，三氯甲烷：甲醇=8.5滴：1.5滴. ⑥用碘化铋钾对生物碱显色，发现有3个有色斑点. ⑦用5%三氯化铁对黄酮显色，发现没有有色斑点.3）让原药液流过吸附柱（速度为5ml/min），再用80%乙醇洗脱（速度为5ml/min），得到2部分溶液（流出液、洗脱液）. 分别对这2部分进行薄层层析，发现都有生物碱的存在. 说明生物碱在树脂上的吸附效果不好，准备调整PH 值及树脂进行再次吸附.4）用旋转蒸发仪对洗脱液进行浓缩，再用氯仿、乙酸乙酯分别进行萃取，得2部分溶液. 再对2部分溶液进行薄层层析，发现氯仿萃取的部分有生物碱的存在，而乙酸乙酯萃取的部分其中虽然有物质的存在，但是既不是黄酮也不是生物碱，需要进一步鉴定分析.3.2 酸水回流法提取苦参碱酸水回流法也是常用于苦参中苦参碱的提取方法，本次实验中采用了HCL 无机酸作为提取剂，用于对比传统煎煮法实验.3.2.1 仪器包括METTL ERAE 240电子天平、RICA 旋转蒸发器、EYELA COOLACE CCA-1100冷凝水循环装置、Waters 2695高效液相色谱仪3.2.2 材料苦参（购于重庆中药饮片厂）、乙醇（AR）、甲醇（HPLC）、乙腈（HPLC）、氯仿（AR）、HCL（AR）、NaOH、苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0413-200506）、氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0402-200506）3.2.3 标准曲线的制作精密称取苦参碱对照品，以无水乙醇溶解，配制成含苦参碱0.492mg/ml 的溶液作为对照品溶液%分别取1，5，9，13，15u以HPLC 测定峰面积［9］，每样进2针取平均值，色谱条件为：Xterra RP185um4.6x150mm柱，柱温200C ，0.8ml/min,220nm,甲醇:水:三乙胺=480:520:0.4以峰面积为纵坐标，苦参碱量（)=）为横坐标，得回归方程：y=-34970.14999+1277796.646x；r=0.9999即苦参碱量在0.492到7.380ug范围内呈现良好的线性关系.3.2.4 酸水回流法提取苦参总碱选用L934,设计实验. 取苦参粉10g,按表1正交试验安排进行提取，以苦参碱得率为指标衡量提取效果. 试验流程如下：工艺液回流提取→HCL 水溶合并回流溶液→过滤→滤液用10%NaOH调节，使PH值为10到11 →过滤→滤液浓缩至小体积→以氯仿进行4段萃取（氯仿用量分别为用量体积的1倍、1/2倍、1/2倍、1/2倍）→合并氯仿层→蒸干→无水乙醇定容至25ml→测定苦参碱得率.4 未来展望近年来有关苦参类生物碱的药理研究工作已取得了很大进展，而临床上主要用于治疗肝炎的居多，对其他方面疾病的应用基本上还处于试验阶段. 在药物来源方面，我国以提取或提取后还原转化制备的工艺最为成熟，而合成方面虽然也有研究，但合成成本较高. 出于资源保护和经济效益考虑，由于中草药提取液苦参碱含量低，分离提纯麻烦，通过人工化学合成这类生物碱及其衍生物是非常必要的.参考文献：[1] 中华人民共和国国家药典委员会. 中国药典（Ι部）[M]北京：化学工业出版社，2000.[2] 刘文雅，刘汉清. 苦参碱的药理研究进展［J］. 中华实用中医杂志，2006（4）：473-475.[3] 刘北忠，蒋纪恺. 苦参碱与人类红血病细胞株K 562的结构特征研究［C］// 第五届西南三省一市生化学术会论文文集. 成都：［出版社不详］，1997.[4] 李弟，潘显道. 苦参碱类生物碱研究进展［J］. 医学研究通讯，2000(1)65-66.[5]司维柯，肖元. 苦参碱对人肝癌细胞HepG2的形态影响和相关增殖因素的变化［J］. 第三军医大学学报，2000，22（6），[6]张俊平，张珉. 苦参碱体内外抗大鼠肝纤维化的作用［J］.中国药理学报，2001,22(2),186.[7] 林文，张俊平. 苦参碱对细菌脂多糖诱导大鼠枯否细胞释放肿瘤坏死因子及白细胞介素-6的影响［J］. 药学报,1997,32(2):186.[8] 陈曙霞. 苦参抗柯萨基B 组病毒的初步研究［J］. 上海第二医科大学学报，1991,11(2):140-142.。
实验三 苦参生物碱的提取与鉴识
实验三苦参生物碱的提取与鉴识背景1.1苦参的化学成分苦参,又名苦骨(见《本草纲目》川)、川参(见《贵州民间方药集》、凤凰爪(见翌广西中兽医药植))、牛参(见《湖南药物志》),陶宏景谓:“叶极似槐叶,花黄色,子作荚,根味至苦恶。
”李时珍谓:“苦以味名,参以功名。
”lz]始载于((神农本草经》,列为中品。
为豆科(Leg姗z'n 口sae)植物苦参(￡叩加rafla。
escensAz't.)的干燥根。
分布于我国南北各地Is],春秋两季采挖,除去根头及小支根,洗净,干燥、或趁鲜切片,干燥。
苦参性味苦寒,归心、肝、胃、大肠、膀肤经。
功能清热燥湿、祛风杀虫、利尿通淋。
用于热痢、便血、黄疽尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、湿疮、皮肤癌痒、疥癣麻风等诸多病症。
苦参中含有多种有效成分,目前已知的主要有生物碱类、黄酮类、挥发油类化合物,还含有少量醒类、皂试类及氨基酸等其它化合物。
下面分别介绍各类化合物的主要成分。
1.LI生物碱国内外学者从苦参根、苦参茎和叶及其花【4一l0]中共分离出26种生物碱。
苦参生物碱大多数是哇诺里西咤类(quinolizidine一type),极少数为双呱陡类(dipiperidine--tyPe)。
喳诺里西陡生物碱多数为苦参碱型生物碱,另有两种金雀花碱型(eytisine一type)生物碱,两种无叶豆碱型(Sparteine一type)生物碱,一种羽扇豆碱型(lupinine一type)生物碱。
包括苦参碱(matrine),氧化苦参碱(oxymatrine),槐果碱(sophoearpine)、氧化槐果碱(N一oxysophoearpine)、异槐果碱(isosoph。
Carpine)、异苦参碱(isomatrine)、7,11一去氢苦参碱(7,11一dehydromatrine)、槐胺碱(Sophoramine)、异槐胺碱(isosophoramine)、新槐胺碱(neosophoramine)、■'3一去氢槐胺碱(■`3一dehydrosophoramine)、■`一去氢槐胺碱(■7-dehydrosophoramine)、槐醇(sophoranol),9。
苦参碱的提取研究
苦参碱的提取研究苦参碱是一种草本植物苦参中的主要生物碱成分，广泛应用于医药领域。
苦参碱具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种药理作用，因此成为现代医药研究的热门对象之一、以下是针对苦参碱的提取研究的一些内容，总字数超过1200字。
一、苦参碱的提取方法1.传统提取方法：一般采用传统的溶剂提取方法，包括水提、醇提和碱提等。
具体操作步骤为：将细粉状的苦参材料与适量的溶剂混合，置于提取设备中进行反应。
反应时间根据不同的提取溶剂和设备而异，通常为数小时至数十小时。
提取液经过过滤、浓缩、蒸馏等操作后，获得苦参碱的提取物。
2.超声波辅助提取：超声波具有高能量、高频率、高效率的特点，对于草本植物的提取具有较高的效果。
超声波提取方法主要是利用超声波的振荡作用使植物细胞壁破裂，增强苦参碱的释放。
超声波辅助提取的操作过程与传统提取方法相似，仅在提取过程中加入超声波器，并调节合适的超声波频率和功率。
3.超临界流体萃取法：超临界流体（常用的是二氧化碳）具有较好的渗透能力和溶解能力，与固体物质接触后能迅速渗透到物质内部，从而加快有效成分的释放。
超临界流体萃取法主要通过改变温度和压力等条件，使二氧化碳表现出超临界态，并对苦参材料进行提取。
该方法能够高效且选择性地提取苦参碱，并且操作过程中无需使用有机溶剂，对环境友好。
二、苦参碱提取研究的影响因素2.提取溶剂的选择和用量：提取溶剂的选择和用量直接影响到苦参碱的提取效果。
一般来说，具有较好极性的溶剂，如水、乙醇等，对苦参中的苦参碱具有较好的提取效果。
但是，有机溶剂的使用也会带来环境问题，因此需要在提取效果和环境友好之间进行权衡。
3.提取时间和温度：提取时间和温度是苦参碱提取研究中重要的操作参数。
通常情况下，提取时间和温度越长、越高，提取速度越快，但也可能加速苦参碱的降解。
因此，需要根据不同的实验要求和苦参材料的特性进行合理的调节。
三、苦参碱提取研究的现状和展望苦参碱的提取研究已经取得了一定的进展，但仍存在一些问题和挑战。
苦参生物碱的提取分离流程
苦参生物碱的提取分离流程苦参生物碱的提取分离可有意思啦！咱先来说说苦参生物碱为啥要提取分离呢。
苦参啊，它里面含有的生物碱有好多厉害的作用。
这些生物碱可能在医药呀，或者其他一些科研领域有着特殊的价值。
比如说可能对某些疾病有治疗的潜力之类的。
那怎么把这些生物碱从苦参里弄出来呢？这就涉及到提取的过程啦。
有一种方法呢，是溶剂提取法。
就像是把苦参当成一个宝藏盒子，我们要用合适的溶剂这个钥匙去打开它，把生物碱取出来。
一般会选择乙醇这类溶剂，把苦参放进去浸泡一段时间。
这个浸泡就像是给苦参泡个舒服的澡，让生物碱慢慢地从苦参里跑到溶剂里面。
浸泡的时间得合适，太短了生物碱还没来得及出来，太长了可能又会有其他杂质跟着跑出来了。
还有就是超声提取法。
这个就更酷啦！超声就像是给苦参做了个按摩，在超声的震动下，苦参生物碱就会比较快地从苦参里被“震”到溶剂里。
这种方法速度比较快，而且相对来说提取的效率还挺高的呢。
提取出来之后，可不能就这么直接用呀，因为里面还有好多其他的东西混着呢，这就需要分离了。
分离的时候呢，可以用色谱法。
想象一下色谱法就像是一场比赛，不同的生物碱就像是不同的选手，它们在这个特殊的赛道（色谱柱）上奔跑，因为它们各自的性质不同，所以跑的速度就不一样，这样就可以把它们一个一个地分开啦。
比如说有的生物碱极性大，有的极性小，根据这个极性的差别，就能把它们很好地分开。
还有一种是利用生物碱的酸碱性来分离。
有的生物碱是碱性的，我们就可以用酸把它变成盐，然后再利用盐的性质把它和其他物质分开。
这就像是给生物碱穿上了一件特殊的衣服（变成盐），让它变得和其他东西不一样，这样就容易分开了。
在整个提取分离的过程中啊，有好多小细节得注意。
比如说温度呀，温度不合适的话，可能会影响生物碱的稳定性，它要是不稳定了，就可能在提取分离的过程中被破坏掉了。
还有就是提取和分离过程中的设备要干净卫生，要是有其他的脏东西混进去，那可就前功尽弃了。
苦参生物碱的提取分离虽然有点复杂，但就像探索一个神秘的小世界一样，每一步都充满了惊喜和挑战呢。
苦参中生物碱的提取及纯化工艺研究进展
苦参中生物碱的提取及纯化工艺研究进展苦参（Sophora flavescens Aiton）是一种常见的中药材，广泛应用于传统药物和中成药中。
苦参中的生物碱是其主要活性成分，具有抗菌、抗炎、抗肿瘤等药理作用。
因此，提取和纯化苦参中的生物碱具有重要的研究价值和应用前景。
本文将综述苦参中生物碱的提取和纯化工艺研究进展。
苦参中主要含有多种生物碱，如苦参碱、苦参素、大黄素等。
目前，常用的提取方法主要包括水煎膏剂提取法、溶剂提取法和微波辅助提取法等。
水煎膏剂提取法是一种常见的传统提取方法，主要通过将苦参粉末与水煎煮，然后浓缩、过滤和析出等步骤获得苦参提取物。
水煎膏剂提取法操作简单、成本低廉，但其提取效果有限，且存在易受环境条件影响、提取物稳定性差等缺点。
溶剂提取法是一种常规的苦参提取方法，常用的溶剂包括乙醇、甲醇、乙酸乙酯等。
该方法可以显著提高提取效果，但同时也会带来一些问题，如溶剂残留、环境污染等。
因此，需要对溶剂提取法进行优化和改进，减少对环境的影响。
微波辅助提取法是近年来发展起来的一种新型提取方法，其主要原理是利用微波的加热作用加速提取过程。
微波辅助提取法具有提取速度快、提取效果好的优点，已经在苦参提取中得到了广泛应用。
然而，目前关于苦参微波辅助提取法的研究仍较少，有待进一步深入研究。
苦参中生物碱的纯化工艺主要包括溶剂分配法、硅胶柱层析法、高效液相色谱法等。
其中，溶剂分配法是一种常用的纯化方法，通过溶剂的不同极性和沸点差异，实现苦参中生物碱的纯化。
硅胶柱层析法是一种较为经典的纯化方法，通过利用硅胶的吸附和解吸作用，将苦参中生物碱与其他杂质分离。
高效液相色谱法是一种高效、快速的纯化方法，已经得到了广泛应用。
值得注意的是，纯化工艺的选择需要根据苦参中生物碱的性质和目标纯度的要求来确定。
总的来说，针对苦参中生物碱的提取和纯化工艺，目前已有多种方法和技术可供选择。
然而，仍然存在一些问题需要进一步研究和改进，如提取效果和纯化效果的提高、环境友好性等。
苦参碱的含量测定方法
苦参碱的含量测定方法苦参碱（Matrine）是一种从苦参中提取得到的天然生物碱，具有广泛的药理活性，被广泛用于药物研发和临床治疗。
为了保证苦参碱的质量和安全性，准确测定其含量非常重要。
下面将介绍十种常用的苦参碱含量测定方法，并详细描述其原理和操作步骤。
这些方法包括二氧化硅柱层析法、高效液相色谱法、气相色谱法、红外光谱法、紫外分光光度法、差示扫描量热法、核磁共振法、质谱法、比色法和比重法。
1. 二氧化硅柱层析法原理：利用苦参碱与二氧化硅柱的亲和作用差异，通过洗脱移除非目标化合物，然后定量检测苦参碱峰。
操作步骤：1）样品准备：采用适当的溶剂将苦参提取物溶解，过滤除去杂质。
2）装柱：将提取液加入装有二氧化硅的柱子，柱子上部用砂芯填塞。
3）洗脱：用适当的溶剂冲洗柱子，将非目标化合物洗脱。
4）检测：用合适的检测方法检测苦参碱峰进行定量。
2. 高效液相色谱法原理：利用样品在高效液相色谱柱中的分离性，通过检测样品峰面积或峰高来定量苦参碱。
操作步骤：1）样品制备：将苦参提取物溶解并过滤除去杂质。
2）色谱条件：选择适当的色谱柱、流动相和检测波长，保证样品分离效果和检测信号。
3）进样：用合适的进样器将样品注入色谱柱。
4）检测：采用紫外检测器检测样品峰面积或峰高，进而定量苦参碱。
3. 气相色谱法原理：将样品中的苦参碱转化为易于挥发的衍生化物，然后通过气相色谱柱的分离、检测来定量苦参碱。
操作步骤：1）样品制备：将苦参提取物溶解并经过适当的衍生化反应。
2）色谱条件：选择合适的气相色谱柱、进样方式和检测条件，确保样品分离和检测的可行性。
3）进样：将衍生化后的样品注入气相色谱柱。
4）检测：采用化学检测器或质谱检测器检测苦参碱的峰面积或峰高。
4. 红外光谱法原理：苦参碱的分子结构中含有特定的红外吸收峰，通过红外光谱仪测定样品中的红外吸收峰强度来定量苦参碱。
操作步骤：1）样品制备：将苦参提取物溶解并制备适当的样品片。
2）光谱扫描：将样品片放入红外光谱仪中，进行光谱扫描，记录样品的红外吸收峰。
实验三苦参总生物碱提取
实验三苦参总生物碱提取05应用化学1班陈志文200530790103一、目的要求：掌握应用离子交换法提取苦参总生物碱的方法和操作。
二、实验原理：苦参为豆科植物苦参（Sophora flavescens Ait.）的根。
主要含有苦参碱、氧化苦参碱等9种生物碱。
苦参生物碱可溶于水及有机溶剂，具有生物碱通性，能与酸结合成盐，在水中可离子化，利用此性质，可用酸水提取，然后用离子交换法使其与其它非离子化成分分离。
三、实验方法：1、离子交换树脂的选择与处理选择磺酸氢型聚苯乙烯树脂，交联度以1%较为适宜，用蒸馏水（去离子水也可）使树脂充分膨胀（约浸泡24小时）后装入层析柱内，开启活塞放水使液面约在树脂层上2~3厘米，用约相当于树脂量10倍的6~8%盐酸溶液冲洗树脂，使树脂转为氢型（市售树脂为钠型），然后用蒸馏水冲洗树脂至近中性。
再用10倍树脂量6~8%氢氧化钠冲洗树脂，使其又转为钠型，用蒸馏水冲洗树脂至流出液近中性，最后用6~8%盐酸将树脂转为氢型并用蒸馏水冲洗至流出液近中性备用。
2、苦参总生物碱提取与交换取苦参粗粉100克，加适量0.1%盐酸水溶液浸泡12小时，过滤，取一半的滤液（约75mL）以3~4毫升/分钟速度通过离子交换树脂柱，待滤液全部通过树脂后，将树脂倒入烧杯中，用蒸馏水洗涤数次，于布氏漏斗上抽干，然后将树脂倒入表面皿晾干。
3、总生物碱的洗脱将晾干的树脂置烧杯中，加适量浓氨水（使树脂均匀湿润即可）搅拌均匀。
放置20分钟，装入索氏提取器中，用氯仿回流洗脱至洗脱液无生物碱反应（约6小时），氯仿提取液加无水硫酸钠干燥后回收氯仿。
残渣即为总生物碱。
4、重结晶，测定熔点用适量丙酮加热溶解重结晶，冷却析出晶体，过滤干燥，称量，测定化合物熔点，与文献值比较，保留产品下次实验使用四、实验结果与分析1、总生物碱经过洗脱后得到的残渣很少，用适量的丙酮加热溶解重结晶，产品几乎析不出来。
冷却后过滤得到很少的白色物质，无法称量。
苦参碱实验
实验一 氧化苦参碱的提取分离和鉴定一．实验目的与要求1. 掌握渗漉法的原理、操作与影响因素，了解离子交换树脂的结构、性质及使用方法。
2. 掌握连续回流提取法的原理、特点及仪器的使用方法。
3. 学习粗提物的纯化方法，学会分析纯化过程中所应用的原理。
4. 进一步理解对粗品进行检识的意义及方法。
5. 学习制备性薄层色谱及闪柱色谱的操作，了解色谱条件的选择方法及影响分离度的因素。
二．实验方法（一）概述中药苦参是豆科植物苦参(Sophora flavescens Ait)的干燥根，有清热燥湿、杀虫、利尿之功效。
苦参在临床上用于杀虫、治疗痢疾、肝炎、荨麻疹、湿疹、气管炎等。
药理实验证明苦参总生物碱有抗心律失常及抗癌活性等。
苦参中主要含生物碱和黄酮类成分。
苦参中主要生物碱有：苦参碱(1)、氧化苦参碱(2)、槐定(3)、槐果碱(4)，结构如图1。
氧化苦参碱有抗癌、抗衰老等作用。
氧化苦参碱13C-NMR 数据：68.7(C-2), 17.0(C-3), 25.9(C-4), 34.3(C-5), 66.6(C-6), 42.4(C-7), 24.4(C-8), 17.0(C-9), 69.1(C-10), 52.8(C-11), 28.3(C-12), 18.5(C-13), 32.7(C-14), 169.8(C-15), 41.6(C-17)。
苦参碱 氧化苦参碱 槐定 槐果碱表11-1 主要苦参生物碱的理化性质中英名称 分子式 性状 mp(℃) 旋光 溶解度 N N O苦参碱(matrine) C15H24N2O白色针状结晶76 +39.11°易溶于醇、氯仿，溶于乙醚、苯，难溶于水氧化苦参碱(oxymatrine) C15H24N2O2白色方晶207-208 +47.7°易溶于水、乙醇、甲醇、氯仿，不溶于乙醚、苯槐定(sophoridine)C15H24N2O 白色棱晶106-108槐果碱(sophocarpine)C15H22N2O 白色棱晶80-81 -29.44°同上从苦参中提取生物碱一般用水、酸水或醇提法，粗提物用树脂法或酸碱法纯化，分离方法多用氧化铝或硅胶柱层色谱。
苦参碱的提取与含量测定
苦参碱的提取与含量测定摘要：本论文通过单因子试验，研究了乙醇浓度、浸泡时间、浸泡温度、提取次数和液料比对苦参中苦参碱提取率的影响；采用紫外可见分光光度法测定该成分含量，作为评价指标。
目的是为了优选苦参中苦参碱的提取条件，测定苦参中苦参碱的含量。
最佳条件是：乙醇浓度为60%、浸泡时间为2.5小时、浸泡温度为60℃、提取次数为2次、液料比为12：1，在此最佳工艺条件下苦参碱含量与提取率均较高，苦参中苦参碱的得率为8.89%。
优选得到的提取工艺条件，简便易行且稳定性好。
关键词：苦参；苦参碱；提取条件；含量测定Matrine Extraction and DeterminationAbstract: In this paper, single-factor experiment was conducted to study the ethanol concentration, soaking time, soaking temperature, frequency and fluid extraction than expected rate of extraction of matrine in matrine impact; using UV-visible spectrophotometric determination of the ingredients, as the evaluation indicators. The purpose of optimization of the extraction of matrine in matrine conditions, the determination of matrine in matrine content. The best conditions are: 60% ethanol concentration, soaking time of 2.5 hours, soaking temperature of 60 ℃, for 2 times the number of extraction and liquid feed ratio of 12:1, the optimum conditions in the concentration and extraction of matrine rates are higher in Matrine Kushen a rate of 8.89 percent. The optimized extraction conditions, simple and good stability.Key Words: Kushen; Matrine; extraction conditions; Determination目录1 前言 (1)1.1 苦参碱的特点 (1)1.2 研究苦参碱的目的和意义 (2)1.3 国内外研究的状况 (3)1.3.1 国外研究概况 (3)1.3.2 国内研究概况 (3)1.4 本文的研究内容 (5)1.5 本文的研究目的及意义 (5)2 实验部分 (5)2.1 实验仪器及药品试剂 (5)2.1.1 主要仪器 (5)2.1.2 药品试剂 (5)2.2 实验方法 (6)2.2.1最大吸收波长的选择 (6)2.2.2标准曲线绘制 (6)2.2.3样品的测定 (7)3 结果与分析 (7)3.1 苦参碱的最大吸收波长选择与标准曲线绘制 (7)3.2 单因素试验 (9)3.2.1乙醇浓度对苦参中苦参碱得率的影响 (9)3.2.2提取次数对苦参中苦参碱得率的影响 (10)3.2.3浸泡时间对苦参中苦参碱得率的影响 (11)3.2.4浸泡温度对苦参中苦参碱得率的影响 (11)3.2.5液料比对苦参中苦参碱得率的影响 (12)3.3 验证试验 (13)3.4 苦参中苦参碱理化性质的分析结果 (14)4 结论 (14)参考文献 (15)致谢 (16)1 前言生物碱是指从植物中分离出的一类含氮杂环的有机物，具有碱性和显著的生理活性。
苦参实验
实验内容
• 酸水渗漉 • 树脂交换
操作
• 1. 配制0.1%盐酸 1500ml；（浓盐酸浓度为 37％） • 2.称取苦参 (100g) ；（粗粉粗细搭配？） • 3. 苦参加入0.1%盐酸200ml拌匀，湿润半 小时；
• • • • • •
4.固定渗漉筒；（试验台上） 5.固定树脂柱；（地上，可接渗漉液） 6.装湿重60g(约60ml)的阳离子交换树脂 ； 7.湿润苦参装入渗漉筒； 8.以0.1%盐酸1400ml渗漉，速度2滴/秒； 9.渗漉液经阳离子树脂，速度2滴/秒；注意 测定并记录不同交换时间pH值的变化，交换 液弃去。 • 10.交换结束后，将树脂倒入烧杯中，以蒸 馏水洗至洗液无色， pH为中性；抽滤至干 后，将树脂平铺于培养皿中，作标记，室温 晾干。
注意
• • • • • • 渗漉筒的固定和药材装入方法； 树脂的定量方法； 树脂柱的固定和树脂装入方法； 树脂柱必须保持液面，以免干柱！！！ 试验用水均为蒸馏水； 试验成绩：操作，结果，报告，卫生！
60ml
纱布
棉花
石块
O N
N
O
苦参碱
氧化苦参碱
苦参醇碱
性质
• 苦参碱有四种形态，可溶于冷水、苯、乙 醚或二硫化碳，难溶于石油醚，用H2O2处 理可转变为氧化苦参碱。 • 氧化苦参碱为无色柱状结晶，可溶于水、 氯仿、乙醇，难溶于乙醚、石油醚，用SO2 处理可转变为苦参碱。
实验原理
• 苦参生物碱有一定碱性，可与酸结合成盐， 因此用酸水提取后，总生物碱呈阳离子状 态而被阳离子交换树脂所交换，再用氨水 碱化后使生物碱游离，以有机溶剂回流提 取。
苦参中生物碱 －－ 提取、分离、鉴定
• 目的要求 • 1、掌握用离子交换法提取生物碱的原理和 方法。 • 2、掌握生物碱的常规定性检识方法。
苦参中提取生物碱提取分离工艺流程
苦参中提取生物碱提取分离工艺流程苦参中生物碱的提取分离，那可真是个有趣的事儿呢！一、苦参生物碱的简介。
苦参里的生物碱可是好东西。
它们有很多种类，像苦参碱、氧化苦参碱之类的。
这些生物碱有着各种各样的功效，在医药方面可有着不小的贡献呢。
比如说，它们对某些疾病的治疗有着独特的作用，就像守护健康的小卫士一样。
二、提取的准备工作。
咱要提取生物碱，得先把苦参准备好。
这苦参呀，得是质量还不错的。
你要是拿那种看起来就病恹恹的苦参，那肯定不行啦。
然后呢，还得准备好提取用的设备和试剂。
设备嘛，就像是我们战斗的武器，像提取罐之类的。
试剂呢，就像是魔法药水，像乙醇之类的溶剂那是必不可少的。
三、提取的方法。
1. 溶剂提取法。
这是一种很常用的方法哦。
把苦参放到乙醇里，就像是把苦参放进一个温暖的小浴缸里。
乙醇就开始和苦参里的生物碱亲密接触啦。
它们相互作用，生物碱就慢慢地从苦参里跑到乙醇里去了。
这个过程就像是一场小小的迁移，生物碱们从苦参这个老家搬到乙醇这个新家里。
不过这个过程也不是一下子就完成的，得给它们一点时间，就像小火慢炖一样，慢慢地让生物碱充分地溶解到乙醇里。
2. 渗漉法。
这个方法也挺好玩的。
就像是让乙醇一滴一滴地穿过苦参。
想象一下，乙醇就像一个个小探险家，一点一点地渗透过苦参的每一个角落，把生物碱都给带出来。
这种方法呢，有时候能提取得更充分一些，因为它比较细致，就像慢慢翻找东西一样，不会错过那些藏在角落里的生物碱。
四、分离的过程。
1. 酸碱处理法。
提取出来的溶液里可不光是生物碱，还有其他的杂质呢。
这时候酸碱处理法就登场啦。
通过调节溶液的酸碱度，生物碱就会表现出不同的性质。
比如说，在酸性条件下，生物碱可能会变成一种比较容易分离的状态。
就像是给它们设定了一个特殊的规则，只有符合这个规则的生物碱才能留下来，其他的杂质就被淘汰掉啦。
这个过程就像是一场选拔比赛，生物碱们要通过酸碱度这个关卡才能进入下一轮。
2. 柱色谱法。
这可是分离生物碱的一个大招呢。
苦参碱的提取,分离与鉴定
中药苦参是豆科植物苦参(Sophors Flavescens Ait)的干燥根,味苦,性寒,有清热燥湿,杀虫等作用.临床上用于治疗痢病,黄胆和皮肤瘙痒症.近年还发现具有抗肿瘤,升白,抗病毒性肝炎等药理作用,苦参中主要含生物碱,此外还有黄铜类成分.一, 苦参中主要已知生物碱的结构和性质1.氧化苦参碱（oxymarrine）C12H24N2O2，白色棱晶，易溶于水，甲醇，乙醇，氯仿，不溶于乙醚，苯。
溶点：207～208℃（不含结晶水）162～163℃（含一个结晶水）77～78℃（含多个结晶水）结晶水可在145～150℃／0。
002mmHg下除去，可于许多金属离子如Fe2＋ Cu2+ Cr3+等生成沉淀，［α］？？＋47.7℃(乙醇).2.苦参碱(matrine)C15H24N2O在轻石油醚中结晶时，由于温度等条件不同，可以得到αβδ三种结晶（溶点分别为76℃ 87℃ 84℃）和一种流体即γ型。
通常室温下结晶得到的是α型，易溶于水，甲醇，乙醇，氯仿，溶于苯，在乙醚中溶解度小。
［α］？？＋39.11[乙醇]3.脱氢苦参碱(槐果碱)（sophocarpine）C15H24N2O白色棱晶。
溶点80～81℃，易溶于甲醇乙醇氯仿，略溶于苯和乙醚，在水中溶解度小。
［α］？-29.44(乙醇)4.槐定(sophoridine)C15H24N2O白色棱晶，溶点106～108℃，为苦参碱的一种空间异构体。
二．实验目的与要求（1）通过苦参生物碱的提取掌握用渗滤法和离子交换法提取生物碱的方法。
（2）掌握沙氏提取器的使用方法。
（3）掌握氧化铝吸附薄层层离法和柱层层离法鉴定和分离生物碱的方法。
三．原理氧化苦参碱为喹诺里西汀类生物碱，叔胺氮氧化合物与酸成盐溶于水与非生物碱分开，提取的生物碱盐的阳离子部分与H+型树脂发生交换生物碱吸附在柱上，吸附有生物碱的树脂，碱化呈游离生物碱，可被氯仿等有机溶剂提取。
R-SO3-Na+ ＋ H+CL- ――>R-SO3-H+ + NaCLSO3Na + H2O生物碱四. 实验方法.1 酸水提取和离子交换（1）渗漉法取苦参碱400克,加入适量0.5%(g/v)的盐酸湿润后放置一小时，装入渗滤液的PH值及生物碱反应，使渗滤液通过离子交换脂柱，待经过树脂柱的滤液生物碱反应或微弱的反应时，停止交换，将树脂倒入烧杯中，酮蒸馏水洗涤几次，滤干，树脂放入搪瓷盘中自然晾干。
苦参碱的提取与分离
实验二苦参碱与氧化苦参碱的提取与分离一、简介中药苦参是豆科植物苦参Sophora flavescens Ait. 的干燥根，味苦，性寒，有清热燥湿，杀虫等作用。
苦参中主要含有生物碱、黄酮等化学成分。
苦参碱和氧化苦参碱是中药苦参含有的主要生物碱。
药理实验和临床用药证明它们具有多种生理活性。
临床上主要用于治疗癌症、病毒性肝炎、病毒性心肌炎及某些皮肤疾患。
二、目的学会用硅胶柱层析方法分离生物碱三、原理RSO3-. Na+ + HCl →R-SO3-. H+ + NaClRSO3-. H+ + [BH]+. Cl- →RSO3-. [BH]+ + HClRSO3-. [BH]+ +NH3·H2O →RSO3-. [NH4]+ + B- + H2O四、仪器与试剂1、仪器：层析住、烧杯、锥形瓶、普通漏斗、抽滤瓶、布氏漏斗、玻璃棒2、试剂：阳离子交换树脂，苦味酸试剂，鞣酸试剂，硅钨酸试剂，碘化铋钾试剂五、过程1、合并、过滤提取液2、沉淀反应3、湿法装柱4、加入需过滤提取液5、流出液的定性检测（15-30min/次），6、取出树脂并清洗至pH=5~77、抽滤干燥六、讨论1、装柱时，一定要注意保持树脂的湿润（湿法装柱），否则树脂内存在气泡，不仅影响对生物碱的吸收同时影响流出液的流出速度。
离子交换时也同样要保证树脂的上层有一定深度的提取液。
2、流出液的碘化铋钾反应一直显阴性，我们的树脂一直都没有饱和，原因可能是柱中的树脂较多，而提取液中所含生物碱量过少。
3、关于离子交换树脂的一些注意事项：离子交换树脂在长期使用中易受悬浮物质、胶体物质、有机物、细菌、藻类和铁、锰等的污染，使离子交换能力降低甚至失去。
因此，需根据情况对树脂进行不定期的活化处理。
活化方法可根据污染情况和条件而定，一般阳树脂在软化中易受Fe3+污染，可用盐酸浸泡后逐步稀释。
阴树脂易受有机物污染，可用10%NaCl+2-5%NaOH混合溶液浸泡或淋洗。
从苦参中提取分离生物碱的方法及工艺流程
从苦参中提取分离生物碱的方法及工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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苦参的提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习并掌握从苦参中提取有效成分的基本原理和方法。
2. 了解有机溶剂在提取过程中的作用。
3. 通过实验操作，提高对有机化学实验技能的掌握。
二、实验原理苦参（Sophora flavescens Ait.）是豆科植物，其根含有多种生物活性成分，如苦参碱、氧化苦参碱等。
本实验采用溶剂提取法，利用有机溶剂（如乙醇、甲醇等）将苦参中的有效成分提取出来。
三、实验材料与仪器材料：- 干燥苦参根- 乙醇- 甲醇- 无水硫酸钠- 滤纸- 烧杯- 热水浴锅- 分析天平- 离心机- 冷却结晶器四、实验步骤1. 称量与浸泡：准确称取干燥苦参根10g，置于烧杯中，加入适量乙醇（约50mL），浸泡过夜。
2. 回流提取：将浸泡好的苦参根与乙醇混合液置于热水浴锅中，加热回流提取1小时。
3. 过滤：提取完毕后，用滤纸过滤混合液，收集滤液。
4. 浓缩：将滤液倒入蒸发皿中，在热水浴锅中蒸发浓缩至一定体积。
5. 冷却结晶：将浓缩后的溶液置于冷却结晶器中，冷却至室温，使有效成分结晶析出。
6. 离心分离：将结晶后的溶液用离心机离心分离，收集沉淀。
7. 干燥：将沉淀用无水硫酸钠干燥，得到苦参提取物。
五、实验结果与分析1. 提取率：通过称量干燥苦参根和得到的苦参提取物，计算提取率。
\[ 提取率 = \frac{提取物的质量}{苦参根的质量} \times 100\% \]2. 纯度分析：通过紫外-可见光谱法或高效液相色谱法对提取得到的苦参提取物进行纯度分析，确定有效成分的含量。
六、实验总结本次实验成功从苦参中提取出有效成分，实验过程中操作规范，数据处理准确。
通过本次实验，加深了对有机溶剂提取法原理的理解，提高了实验操作技能。
七、实验讨论1. 提取过程中，溶剂的选择对提取效果有很大影响。
本实验中，乙醇作为溶剂，提取效果较好。
2. 提取过程中，控制好温度和回流时间是关键。
过高或过低的温度都可能影响提取效果。
3. 实验过程中，应注意安全操作，防止有机溶剂挥发和污染。
苦参提取生物碱
三、苦参的化学成分
苦参所含生物碱主要是苦参碱和氧化苦参碱。 此外还含有羟基苦参碱、氧化苦参碱、N-甲基金雀 花碱、安那吉碱、巴普叶碱和去氢苦参碱等。这些 生物碱都属于喹诺里西啶类衍生物，除N-甲基金雀 花碱外，均由两个喹诺里西啶环骈合而成。其分子 均有两个氮原子，一个是叔胺氮，另一个是酰胺氮。 其分子式为C15H24N2O,分子量为245. 37 。 苦参碱有4 种形态: A- 苦参碱为针状或柱状结晶, 熔 点为76 e ;B- 苦参碱为斜方晶状, 熔点为87 e ;C- 苦 参碱为液体, 沸点为223e ; D- 苦参碱是柱状结晶, 熔点为84e . 常用的是A- 苦参碱。 苦参碱能溶于水、 苯、氯仿、甲醇、乙醇, 微溶于石油醚。
苦参的研究进展
小组成员： 丁力 徐莹 刘文驹 王林 • • • 简介 药理作用及临床应用 化学成分 苦参的提取与纯化 苦参碱的检识 总生物碱的测定 实验设计 小结
二、药理作用及临床应用
《神农本草经》, 卜记述：“ 苦参性苦、寒”,“ 主心腹 结气、症痛积聚”。历代本草亦相继记载苦参能“安五脏、 平胃气, 疗恶疮, 利九窍, 令人嗜食轻身, 定志益精。” 苦参类生物碱主要为喹诺里西啶类生物碱，该类生物 碱主要属于苦参碱型、金雀花碱型、奥豆碱型（鹰爪豆碱 型）和羽扇豆碱型，此外，MurakoshiI等从其苦参花中还 分离得到了两个胡椒啶碱型的生物碱。 国内外学者对其中所含的喹诺里西啶类生物碱的药理 作用作了深入的研究，发现它们具有抗肿瘤、抗心律失常、 升白细胞等多方面的药理作用。
表面活性剂有降低表面张力及增溶作用。在提取剂中 加入表面活性剂，一方面相互聚集形成胶束，从而增加了 提取剂对药材的浸提能力；另一方面可降低提取剂与药材 间的界面张力，促进润湿，在胶束作用下有效成分易被解 吸、提取。应用表面活性剂于苦参碱的提取，一般选用毒 性相对较小，对皮肤刺激性较低的非离子型表面活性剂吐 温类。鲁传华等以多种浓度的乙醇、稀盐酸溶液、胶束分 散系及水为提取溶剂，常温浸渍法提取苦参中苦参碱，考 察表面活性剂吐温80的水及醇溶液正向胶束体系提取苦参 碱的效 率。结果表明，含有表面活性剂的提取剂能更快地 达到最大提取量，提高生产率。李晓梅在提取溶剂(水或乙 醇)中分别加入0.2%吐温20或吐温80提 取苦参碱，以苦参 碱含量为考核指标，考察非离子型表面活性剂在苦参碱提 取中的实际应用价值。 结果表明，在苦参碱提取中应用吐温20和吐温80，可 以降低药 材与溶剂之间的表面张力，增加药材中细胞渗透 性，使溶剂最大限度地溶解或增溶药材中有效成分，显著 增加苦参碱提取率，降低成本，提高经济效益。
苦参碱的提取研究
2018/10/21
分离方法
4 碱性醇提取法工艺步骤 4.1 将苦参根干燥粉碎，粒度60目，1：6～1：10的重量比例 与60%乙醇溶液（含有0.02%氨水）混合，80°C搅拌过夜。 4.2 过滤除去不溶物，提取液于80°C蒸干。 4.3取上述干粉0.5g，精密称定，置于锥形瓶中，加入氯仿 25ml浓氨试剂0.3ml，称定重量，摇匀，室温放置过夜，再称 定重量，补足损失的溶剂，摇匀。过滤。精密量取10ml，置 水浴蒸干，残渣加5ml乙醚。置水浴上加热至完全溶解并除尽 乙醚。加蒸馏水15ml，甲基红指示液2滴，用氢氧化钠滴定液 （0.02mol\L）滴定至黄色，即得。每毫升硫酸滴定液相当于 4.967mg的苦参碱。
2018/10/21
分离方法
2 浸泡超声提取法生产工艺步骤
2.1 将苦参根干燥粉碎，粒度60目，1：6～1：10的重量比例 与60%乙醇溶液混合，25°C搅拌过夜。 2.2 以19～200kHz频率超声振荡30min；过滤除去不溶物，提 取液于80°C蒸干。 2.3 取上述干粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加 入氯仿25mL，浓氨试液0.3mL，称定重量，摇匀，室温放置 过夜（16h以上），再称定重量，补足损失的溶剂量，振摇后 放置，用滤纸滤过。精密量取滤液10mL，置水浴蒸干，残渣 加乙醚5mL放置。精密加硫酸滴定液（0.01mol· l-1）10 mL， 摇匀，置水浴上加热使残渣完全溶解并除尽乙醚，放冷。加新 沸后放冷的蒸馏水15mL与甲基红指示液2滴，用氢氧化钠滴定 液（0.02mol· l-1） 滴定至黄色，即得。每1mL的硫酸滴定液 （0.01mol· l-1） 相当于4.967mg的苦参碱。
2018/10/21
检测中的分离方法
实验三 苦参生物碱的提取与鉴识
实验三苦参生物碱的提取与鉴识
1. 实验背景
苦参（Sophora alopecuroides L.）是一种著名的中药材，其含有多种生物碱，如马钱子碱、鸦胆子碱、喹啉碱等。
这些生物碱具有多种药理作用，如止痛、镇痛、消炎、抗癌等。
因此，苦参及其生物碱在中药及医药领域具有重要应用价值。
2. 实验原理
苦参生物碱的提取与鉴识是通过萃取和化学反应实现的。
（1）苦参制备
将干燥的苦参粉末放入量杯中，加入适量的80%乙醇，用研钵研磨，使苦参与乙醇充分混合。
（2）提取苦参生物碱
用玻璃棒将苦参浆液过滤，过滤液收集于锥形瓶中。
将过滤液浸泡在浓盐酸中，搅拌1小时，然后用分液漏斗将沉淀分离出来。
分离的上层液体中含有苦参碱。
将卡耐氏试剂溶解于乙醇中，用滴管滴入苦参碱的上层液体中，观察其颜色变化。
苦参碱与卡耐氏试剂反应后产生红色沉淀，如实验结果与标准不符可用其他试剂检验。
3. 实验步骤
（2）将苦参浆液过滤，收集过滤液于锥形瓶中。
（3）将过滤液浸泡在浓盐酸中，搅拌1小时，分离出沉淀。
（4）用滴管向沉淀中滴入卡耐氏试剂，观察颜色变化。
4. 实验结果分析
若实验结果与标准相符，则可证明提取的苦参生物碱中含有苦参碱。
5. 实验注意事项
（1）苦参和苦参生物碱有毒，实验时应注意安全。
（2）实验过程中应佩戴手套，避免苦参粉末及液体接触皮肤。
（3）苦参生物碱在80%乙醇中的溶解度较低，需充分搅拌。
（4）浓盐酸腐蚀性强，需注意安全。
（5）卡耐氏试剂对眼睛有刺激作用，操作时应小心。
苦参总碱的提取方法
苦参总碱的提取方法一、苦参总碱提取的基础知识苦参总碱是从苦参这种植物里提取出来的东西。
苦参呢，在好多地方都能找到，它可是个好东西，里面的苦参总碱有着很多药用价值，所以我们才想要把它提取出来。
二、常见的苦参总碱提取方法1. 溶剂提取法原理这是一种比较常用的方法哦。
就是利用苦参总碱在不同溶剂里的溶解度不一样的原理。
比如说，苦参总碱在某些有机溶剂里溶解度比较大，我们就可以用这种有机溶剂把它从苦参里溶出来。
像乙醇就是一种比较常用的溶剂。
把苦参碾碎或者切成小块，然后放到乙醇里浸泡一段时间，苦参总碱就会慢慢跑到乙醇里面去啦。
操作步骤首先得把苦参处理一下，把它清洗干净，去掉泥土杂质这些东西。
然后可以把它晾干或者烘干，让它没有多余的水分。
接下来把苦参弄碎，可以用粉碎机或者手工碾碎，弄成粉末或者小颗粒状。
然后把处理好的苦参放到合适的容器里，加入乙醇，乙醇的量要合适哦，不能太多也不能太少。
一般来说，乙醇的量要能完全浸泡住苦参。
之后就把容器密封好，放在一个合适的地方，比如说常温下或者稍微有点温度的地方，让它浸泡一段时间，这个时间可能会比较长，可能要好几个小时甚至几天呢。
浸泡完了之后，就可以把含有苦参总碱的乙醇溶液过滤出来，把苦参的残渣去掉，这样就得到了初步含有苦参总碱的溶液啦。
2. 酸水提取法原理苦参总碱在酸性水溶液里也能有一定的溶解性。
我们利用酸水来破坏苦参的细胞结构，让苦参总碱能够释放出来并且溶解在酸水里。
操作步骤先把苦参处理干净，和前面溶剂提取法的前期处理差不多。
然后把苦参放到酸水里，酸水的酸度要调节好，一般可以用稀盐酸之类的。
把苦参放到酸水里之后，要不断搅拌，这样可以让苦参总碱更快地溶解到酸水里。
搅拌的时间也不能太短，要保证大部分的苦参总碱都能溶解出来。
搅拌完了之后，也是要进行过滤，把苦参的残渣去掉，得到含有苦参总碱的酸水溶液。
不过这个溶液里面还含有很多杂质呢，还需要进一步的提纯处理。
3. 超临界流体萃取法原理这个方法就比较高科技啦。
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实验三苦参生物碱的提取与鉴识背景1.1苦参的化学成分苦参,又名苦骨(见《本草纲目》川)、川参(见《贵州民间方药集》、凤凰爪(见翌广西中兽医药植))、牛参(见《湖南药物志》),陶宏景谓:“叶极似槐叶,花黄色,子作荚,根味至苦恶。
”李时珍谓:“苦以味名,参以功名。
”lz]始载于((神农本草经》,列为中品。
为豆科(Leg姗z'n 口sae)植物苦参(￡叩加rafla。
escensAz't.)的干燥根。
分布于我国南北各地Is],春秋两季采挖,除去根头及小支根,洗净,干燥、或趁鲜切片,干燥。
苦参性味苦寒,归心、肝、胃、大肠、膀肤经。
功能清热燥湿、祛风杀虫、利尿通淋。
用于热痢、便血、黄疽尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、湿疮、皮肤癌痒、疥癣麻风等诸多病症。
苦参中含有多种有效成分,目前已知的主要有生物碱类、黄酮类、挥发油类化合物,还含有少量醒类、皂试类及氨基酸等其它化合物。
下面分别介绍各类化合物的主要成分。
1.LI生物碱国内外学者从苦参根、苦参茎和叶及其花【4一l0]中共分离出26种生物碱。
苦参生物碱大多数是哇诺里西咤类(quinolizidine一type),极少数为双呱陡类(dipiperidine--tyPe)。
喳诺里西陡生物碱多数为苦参碱型生物碱,另有两种金雀花碱型(eytisine一type)生物碱,两种无叶豆碱型(Sparteine一type)生物碱,一种羽扇豆碱型(lupinine一type)生物碱。
包括苦参碱(matrine),氧化苦参碱(oxymatrine),槐果碱(sophoearpine)、氧化槐果碱(N一oxysophoearpine)、异槐果碱(isosoph。
Carpine)、异苦参碱(isomatrine)、7,11一去氢苦参碱(7,11一dehydromatrine)、槐胺碱(Sophoramine)、异槐胺碱(isosophoramine)、新槐胺碱(neosophoramine)、■'3一去氢槐胺碱(■`3一dehydrosophoramine)、■`一去氢槐胺碱(■7-dehydrosophoramine)、槐醇(sophoranol),9。
一经基槐胺碱(9。
一hydroxysophoramine)、5。
,9。
一二轻基苦参碱(5。
,ga一dehydroxymatrine)、氧化槐醇(sophoranolN一oxide)、雀花碱(lupanine)、臭豆碱(anagyrine)、膺靛叶碱(baptifoline)、Mamanine,Kuraramine、1sokuraramine等。
1.1.2黄酮类化合物从苦参根和狭叶苦参根分离的黄酮类化合物己有29种[ll,'2],多数为二氢黄酮和二氢黄酮醇类,少数为黄酮类、异黄酮类、查耳酮类和紫檀素类,其中仅有两种化合物为试,取代基除了常见的轻基、甲氧基外,多数化合物还具有异戊烯基(取代基A1.1.3挥发油成分王秀坤等!`4】对苦参中的挥发油成分进行了分析,采用苦参粗粉与水共蒸馏,乙醚处理,无水硫酸钠脱水干燥,回收乙醚得油状物,再经气相色谱、质谱分析,共鉴定出47个成分。
鉴定出的化合物以二十烷烃为主成分,占58.12%。
就结构类型看,以烯烃为主,其次为烷烃和醇类,尚含酸醛酮酚等。
1.1.4其它类型的化合物从苦参根中还分离得到一系列2一烷基色酮的衍生物I`5]、一种醒类化合物和两种三砧皂试l`6】。
王秀坤等llvl对苦参中的游离氨基酸成分进行了分析与鉴定,鉴定出巧种氨基酸,并计算了各成分的含量。
发现苦参中总游离氨基酸含量为162.51mg/l00ml,其中含量最高的为脯氨酸,107.51mg/l00ml,其次为天冬氨酸29.64mg/100ml。
张俊华等I`s]用色谱等方法分离,波谱等方法鉴定苦参中化学成分结构,分离得到5个化合物,分别为蔗糖、二十四碳酸、日一谷肖醇、芥子酸十六酷,伞形花内酷,均为首次从苦参中获得,其中芥子酸十六酷为新化合物。
一.实验目的1.本实验通过从苦参中提取苦参生物碱，考察盐酸的浓度和渗漉速度对提取产率的影响2.了解化学反应萃取分离在天然药物提取过程中的应用掌握渗漉法和离子交换提取生物碱的原理、方法与工艺过程，并熟悉用柱层析法分离生物碱。
二.实验原理利用苦参生物碱具有弱碱性，可与强酸结合成易溶于水的盐的性质，将总碱从药材中提取出来。
结合动态连接提取工艺过程，实现生物碱充分溶出。
然后，加碱碱化，即可得到苦参生物总碱。
渗滚法(percolation)的提取过程类似多次浸取过程,浸出液可以达到较高浓度,浸出效较好。
此法常温操作不需加热,溶剂用量少,过滤要求较低,使分离操作过程简化,尤其适用于热敏性、易挥发且有效成分含量较低或贵重药材提取。
采用0.5%的硫酸溶液对中药材黄连用渗辘法提取,收集7倍量渗媲液即可保证生物碱的提取率,与回流法比较,渗辘法提取物含杂质少、提取率高、使用溶剂量少即l。
渗渡法的操作技术要求较高,否则会影响提取效率,当提取物为薪性、不易流动的成分时,不宜使用该法。
三.实验流程鉴识:定性反应.薄层色谱等四.实验过程1.离子交换树脂的预处理将70g 聚苯乙烯磺酸型树脂(交联度3%)，放入烧杯中，加200ml 80℃的蒸馏水溶胀30 分钟，倾出蒸馏水后加入2mol/L 盐酸300ml，充分搅拌，放置半小时(静态转型)，后装入树脂柱(2cm×100cm)，并使全部酸水溶液通过树脂柱(动态转型)，流出液的速度以液滴不成串为宜。
后用蒸馏水洗至中性，待用。
注意从装柱到洗涤过程中始终保持液面高于树脂床。
2.总生物碱的提取和分离（1）动态连续提取①取苦参粗粉200g加一定浓度的盐酸，拌匀，放置30min,使生药膨胀。
②然后装入渗漉桶中，边加边压，层层加紧，全部装完后，药面压平，盖一层滤纸，滤纸上压一些洗净的玻璃塞。
③加入一定浓度的HCl溶液经过药面，以4~5mL/min的速度渗漉，收集渗漉液至无明显的生物碱反应为止，收集渗漉液约2500mL。
（2）交换①将收集的渗漉液置于阳离子交换树脂进行交换，如交换液有为交换的生物碱时，仍可以继续交换，直至流出液无生物碱反应为止。
②将树脂倾入烧杯中，用蒸馏水洗涤数次，除去杂质，于布氏漏斗中抽干，倒入唐磁盘中晾干。
（3）总生物碱的洗脱①将晾干的树脂，加浓氨水适量，搅匀，使湿润度适宜，树脂充分膨胀，盖好放置20min。
②装入索氏提取器中，加三氯甲烷300mL在水浴上回流洗脱，提至尽生物碱为止。
③回收三氯甲烷，得棕色粘稠物。
④加无水丙酮适量，加热溶解，过滤，减压蒸干。
必要时重复此操作，以脱除粗生物碱中的水，再在无水丙酮中重结晶。
3．氧化苦参碱的分离（1）柱色谱法取100目色谱用氧化铝50g，用漏斗缓慢加入色谱柱内（1cm×24cm，干法装柱），取苦参0.2g，加入适量氧化铝，搅匀，研细，装入色谱柱顶端，先用50ml三氯甲烷通过色谱柱，再用三氯甲烷-甲醇（9:1）洗脱，流速为1mL/min。
每10mL为一份（约收集15份），经薄层层色谱鉴定，相同流出成分合并，在水浴上挥发去溶剂，剩余物加无水丙酮溶解，放置，析出结晶为氧化苦参碱。
（2）溶解度差异法将苦参总碱溶于少量三氯甲烷中，加入10倍量乙醚，放置后有沉淀析出，过滤吸出的沉淀，滤液浓缩后再溶于少量三氯甲烷中，加入乙醚放置，再过滤析出沉淀，合并两次的沉淀物，用丙酮重结晶，即为氧化苦参碱。
4.苦参生物碱的沉淀反应取自制苦参总生物碱约0.1g 加1% 盐10ml 使溶解,过滤,取滤液分置于三支试管中,进行以下试验:(1)碘化铋钾试验:于上述一支试管中加入碘化铋钾试剂1~2 滴,立即有桔红色沉淀产生.(2)碘化汞钾试验:于上述另一支试管中加入碘化汞钾试剂2~3 滴,有白色沉淀产生.(3)碘－碘化钾试验: 于上述第三支试管中加入碘一碘化钾试剂2~3滴,有褐色或棕褐色沉淀产生.5．苦参生物碱的薄层层析鉴定(1)氧化铝薄层层析法吸附剂:中性氧化铝(Ⅱ级,过 160 目筛),干法铺板(软板). 样品:a. 自制苦参碱乙醇溶液;b. 苦参碱标准品乙醇溶液;c. 自制氧化苦参碱乙醇溶液;d. 氧化苦参碱标准品乙醇溶液;e. 自制苦参总生物碱乙醇溶液展开剂:①氯仿－甲醇 (19:1) 展开三次;②氯仿－甲醇－浓氨水(5:0.6:0.2)显色剂:喷雾改良碘化铋钾试剂,观察斑点颜色,并与标准品对照(2) 硅胶薄层层析法吸附剂:2%氢氧化钠溶液制备的硅胶 G 硬板,于 110℃烘干半小时.样品:同 (1) 项下展开剂:a. 先以甲苯－乙酸乙酯－甲醇－水(2:4:2:1) 展开,展距约 8cm, 取出,晾干,再以甲苯－丙酮－乙醇－浓氨试液(20:20:3:1)展开,展距第一次相同;b. 氯仿－甲醇－乙醚(44:0.6:3)显色剂:喷雾改良碘化铋钾试剂和亚硝酸钠乙醇液,观察斑点颜色,并与标准品对照五.思考题1. 叙述酸水法及离子交换法提取纯化生物碱的原理。
2. 应如何检查(1) 渗漉液中是否含有生物碱？(2) 渗漉液中生物碱是否被交换在树脂上？(3) 离子交换树脂是否已饱和？3. 简述索氏提取器提取原理及特点。
4.在收集渗漉液的过程中，溶液的颜色有何变化？在回流提取中，有何现象发生？5.制备性薄层色谱的特点是什么？六.主要参考文献1.胡晶红，苦参生物碱的提取和氧化苦参碱的纯化，山东大学硕士学位论文，20072. A．Ueno et al．Chem．Pharm．Bull．1978，26，18323.陈德昌．中药化学对照品工作手册．北京：中国医药科技出版社，2000：1424.杨云等．天然药物化学成分提取分离手册．北京：中国中医药出版社，2003：454另外的方案1.4.1.2浸渍浸渍法(maceration)可在常温或加热的条件下浸泡药材获取有效成分,操作简单易行,但所需时间长,溶剂用量大,有效成分浸出率低。
常温浸渍是较为常用的生物碱提取方法,如秦学功等圈]考察了苦豆子种子中生物的冷浸工艺条件,室温下用稀盐酸提取苦豆籽中的苦参总生物碱,研究不同条件下的总碱浸出率,最高可达3.7%以上。
陈月圆等Ivol以小聚碱为指标,对黄柏中的总生物碱提取方法进行了优化,分别用水、乙醇和酸作为溶剂,使用乙醇为溶剂的提取率为84.4%,远高于其它两种溶剂。
1.4.1.3回流回流法(circumfluence)是以乙醇等易挥发的有机溶剂为溶媒,对浸出液加热蒸馏,其中挥发性溶剂馏出后再次冷凝,重新回到浸出器中继续参与浸取过程,多采用索氏提取器完成。
此法操作简便,提取率较高。
龙德清等Ivll用酸性醇回流法提取魔芋中总生物碱,得到最佳的工艺条件为在pH值2一3的酸性醇中回流3h,总生物碱含量为0,39%。