六双波长分光光度法

典型实验教学案例简介

案例x 双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中两组分含量

药物的含量测定是药物质量控制的重要方面。紫外分光光度法以其准确度、灵敏度高，简便快速等特点，成为药物含量测定的重要方法。紫外法测定含量时，常选择被测组分的最大吸收波长最为测定波长，以提高检测的灵敏度。当用紫外法测定复方制剂多组分中一种组分的含量时，共存组分常常也会有吸收干扰，此时，消除干扰就成为准确测定的关键环节。双波长分光光度法作为计算分光光度法的一种，就是消除干扰、实现多组分含量同时测定的一种有效手段。本实验就以复方磺胺甲噁唑片为实验对象，通过双波长分光光度法测定其两组分的含量，从而达到学习双波长法的原理和操作的目的。

一、实验目的

1．掌握双波长分光光度法的测定原理。

2．熟悉双波长分光光度法在复方制剂分析中的应用。

二、实验原理

当吸收光谱重叠的a、b两组分共存时，若要消除a组分的干扰测定b组分，可在a组分的吸收光谱上选择两个吸收度相等的λ1和λ2，测定混合物的吸光度差值。然后根据ΔA值计算b的含量。

SMZ在257nm波长处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在304nm波长附近有一等吸收点，故选定257nm为SMZ的测定波长（图1），在304nm波长附近选择参比波长。

TMP在239nm波长处有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在295nm波长附近有一等吸收点，故选定239nm为测定波长（图2），并规定在此波长附近选择供测定的参比波长。由于参比波长对测定影响较大，故采用对照品溶液来确定。此波长可因仪器不同而异，测定时应仔细选择。

三、仪器与试剂

1.主要仪器：紫外-可见分光光度计；100mL 容量瓶

2.主要试剂：磺胺甲噁唑和甲氧苄啶对照品；0.4%氢氧化钠溶液；0.1mol/L 盐酸溶液；氯化钾

四、实验步骤

1．磺胺甲噁唑的含量测定

（1）平均片重测定：10片，精密称定。 （2）供试品溶液配制：

图2 TMP 紫外吸收图谱

1. TMP(5.0μg/ml);

2.SMZ(25.0μg/ml);

3. SMZ+TMP;

4. 辅料

图l SMZ 紫外吸收图谱

1. TMP(0.2μg/ml);

2.SMZ(10.0μg/ml);

3. SMZ+TMP;

4. 辅料

精密称取片粉

(约50mg SMZ, 10mg TMP)

片剂 乙醇

溶解、定容

过滤 研磨

100m

（3）对照品溶液配制

（3）取对照品溶液（2）的稀释液，以257nm 为测定波长（λ2），在304nm 波长附近（每间隔0.5nm ）选择等吸收点波长为参比波长（λ1），要求ΔA= A λ2

（2）

－A λ1（2）= 0，再在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶

液（1）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA ），计算，即得。

2．甲氧苄啶的含量测定

（1）稀释液配制：取上述供试品溶液与对照品溶液(1)、(2)各5.00mL ，分别置于100mL 容量瓶中，各加HCl-KCl 溶液（0.1mol/LHCl 75mL + 6.9gKCl ，加水至1000mL ），稀释至刻度，摇匀。

（2）参比波长选定：取对照液(1)的稀释液，以239nm 为测定波长(λ2)，在295nm 附近（每间隔0.2nm ）选择等吸收点波长为参比波长(λ1) ，使ΔA=A λ2（1）－A λ1（1）= 0。

（3）双波长测定：在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（2）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA ），计算，即得。

3．结果计算

100⨯⨯⨯⨯⨯∆∆标示量

平均片重被测药物标示量％＝W D Cs A A s

u

式中ΔA u 为供试液的ΔA 值，ΔA s 为对照液的ΔA 值，C s 为对照液浓度（mg/mL ），D 为稀释倍数，W 为取样量。

五、注意事项

乙醇

100mL

精称 105 ℃干至恒重

10mg TMP 对照品

50mg SMZ 对照品

乙醇

定容

定容 对照液(1) 对照液(2) 2.00ml

L

0.4%NaOH

100mL

2.00ml L

0.4%NaOH

1.测定之前应先检查仪器波长是否准确。

2.仔细寻找等吸收点波长

3.注意供试品溶液和对照品溶液的准确配制

六、思考题

1．双波长分光光度法是如何消除干扰的？

2．应用双波长分光光度法应如何选择测定波长和参比波长？