诊断临床病原体检查PPT教学课件

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➢ 多瓶接种 ①厌氧菌菌血症占菌血症5-15%, ②有10%菌血症不是单一微生物引起, ③长 期使用抗生素患者可呈现L型菌. ④免疫低 下患者易发生真菌感染；根据情况做二种 血培养瓶的培养,需氧和厌氧或需氧和L型 培养。
➢ 标本采集操作 应注意严格无菌操作，避免 污染杂菌。
➢ 标本送检 接种血液样本的培养瓶应立即送 检，如因某种原因不能立即送检时，勿放 冰箱存放。
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药物敏感试验
1.纸片扩散法（K-B法） ➢ 菌液浓度：0.5麦氏浊度（1.5×108CFU/mL） ➢ 琼脂平板厚度：4mm（9cm，25ml；15cm，60ml) ➢ 抗生素纸片：9cm，6-7张（4张左右）；15cm，
12张 ➢ 培养温度、时间：35℃，18-20小时 ➢ 判断标准：NCCLS当年版
➢ 产酶株不能单独采用青霉素类和三代头孢 治疗。
5.血清学检测 检测病原体刺激机体产生的抗体， IgM型抗体检出为新近感染指标。
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细菌耐药性检查
抗菌药物的作用机制 ➢ 干扰细菌细胞壁的合成，使细菌不能生长繁殖。 ➢ 影响细菌细胞蛋白质的合成，使细菌丧失生长
繁殖的物质基础。 ➢ 破坏核酸的代谢，阻碍遗传信息的复制。
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➢ 创伤、组织和脓肿标本 首先清创，用无菌拭 子取材。
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二.检查方法
１.显微镜检查 ➢ 悬滴法用于病原体的动力观察，暗视野或
相差显微镜用于病原体的生长、形态、运 动方式。 ➢ 染色检查：革兰氏染色用于细菌和真菌的 检查；抗酸染色用于结核菌及放线菌的检 查；墨汁染色用于新型隐球菌的检查。
➢ 产生灭活酶或钝化酶 这些酶可使抗生素失活。 如产生β-内酰胺酶、氨基糖苷类钝化酶、氯霉 素乙酰基转移酶等。
➢ 作用靶位的改变 作用靶位改变后使抗生素失 去作用位点。如甲氧西林耐药的葡萄球菌可以 产生一种新的青霉素结合蛋白，使细菌与β-内 酰胺类抗生素的亲和力降低而导致耐药。
➢ 主动外排机制 如铜绿假单胞菌对多种常用的 抗生素耐药,主要是由于其外膜存在着独特的 药物泵出系统。
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104 cfu/ml
2.液体稀释法
mg/ml 4
2
1
0.5 0.25 0.125 0
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耐药菌监测试验
1.耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)检测 ➢ 包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和
耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCoN)。 ➢ 不能使用青霉素和头孢菌素类抗生素治疗。
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标本的采集、运送和检查方法
一．标本的采集和运送
➢ 所有采集标本均置于无菌或清洁容器中，不能 接触消毒剂和抗菌药物。
血液：一般在发热初期和高峰期采集，如已用抗 生素，则在下次用药之前采集。成人采血量为 每次10-20毫升，儿童和婴儿为1.5-5毫升。专用 血培养瓶。
➢ 血标本采集次数 根据研究，仅采血一次分离率 约占80%，培养2次分离率约占90%，而培养三次 的分离率约占99%。
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2.病原体特异性抗原检测 主要用于不易培养的 微生物的快速诊断，用已知抗体，利用免疫荧 光、酶联免疫技术等检测标本中的抗原。
3.病原体核酸的检测 主要是PCR和DNA探针杂交 检测标本中的病原体。
4.病原体分离培养和鉴定 细菌培养，将标本接 种相应的培养基上，根据菌落形态、生化反应 鉴定细菌；不易培养的微生物进行细胞培养。
➢ 染色体介导的耐药 为细菌本身所固有的耐药， 一般具有种属特异性,如肠球菌耐头孢菌素， 一些革兰阴性杆菌耐万古霉素等。
➢ 质粒介导的耐药 耐药基因易于传播,目前该 类耐药在临床上占有重要地位。如由质粒介导 的产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的大肠埃希 菌和肺炎克雷伯菌。
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2.生物化学机制
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2.青霉素耐药的肺炎链球菌（PRSP）
➢ 青霉素是治疗肺炎链球菌的首选药物，耐 药菌株对青霉素治疗无效。
➢ 应用苯唑西林纸片检测。
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3. 超广谱β-内酰胺酶（ESBL）的检测
➢ 主要由革兰阴性杆菌产生，质粒介导的对 青霉素和三代头孢菌素以下类抗生素广泛 耐药。
感染性疾病实验诊断程序
➢ 正确、规范采集和运送标本 ➢ 通过直接显微镜查见病原体，或检出病原
体抗原成分，或通过分子生物学方法检测 到病原体核酸，结合病人病史、症状、体 征，可作出初步诊断 ➢ 同时，进一步对病原体进行分离和鉴定， 确定感染病原体的类型 ➢ 对细菌和真菌感染要进行抗生素敏感试验
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➢ “敏感”即表示测试菌可被测定药物常规剂量 给药后在体内达到的血药浓度所抑制；
➢ “耐药”即表示测试菌不能被在体内感染部位 可能达到的抗菌药物浓度所抑制，临床治疗无 效。
➢ “中介”者提示该细菌对常规用量体液或组织 中的药物浓度的反应性低，使用高于正常给药 量有疗效。
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尿液 常用清洁中段尿。对于厌氧菌采用膀胱 穿刺法收集、无菌厌氧小瓶运送。
粪便 取脓、血、粘液送检，排便困难及婴幼 儿可用直肠拭子采集，根据检验目的选用不同 的运送培养基及分离培养基提高检出率。
呼吸道标本 鼻咽拭子、痰、纤支镜采集物，经 气管采集分泌物可避免正常菌群污染，是确定 下呼吸道感染的理想标本。
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➢ 抗生素的广泛使用所造成的抗生素的 选择性压力使医院感染控制面临严峻 挑战，因此对细菌耐药性的发生机制 和耐药监测便成为临床微生物检测中 的一项重要工作。
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抗菌药物的选择性压力
耐药菌株极少
抗生ห้องสมุดไป่ตู้暴露
耐药菌株为 主
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细菌的耐药性及其发生机制
1.遗传学机制
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➢ 脑脊液及其它体液 对于脑脊液常见病原菌如 脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌， 抵抗力弱，采集后应立即接种。对于胸、腹水 和心包积液由于含菌量少宜接种量大或按血培 养处理。
➢ 眼、耳标本 用无菌拭子采样，可用角膜刮屑。
➢ 泌尿生殖道标本 可用尿道口分泌物、外阴糜 烂面分泌物、宫颈口分泌物和前列腺液等。