蝴蝶兰的组培

蝴 蝶 兰 种 子 的 无 菌 培 养
实践操作：
材料选择和消毒
生根培养
花梗消毒和接种
花梗侧芽培养
壮苗培养
初代培养
诱导原球茎
继代增殖
外植体的选择与消毒：
（1）材料：取已过盛花期带休眠芽的花梗作为外植体材料。 （2）材料消毒与接种 切下其带芽茎段,长约2 - 3cm ,用自 来水清洗干净,在饱和漂白粉上清液中浸泡15 min ,浸泡时不 断搅动,浸泡后的茎段用流水冲洗干净,置于超净工作台上,先 用75 %的酒精消毒30 s ,无菌水清洗1 次,再用0. 1 %的升汞 浸泡10 min ,经无菌水冲洗数次,将带芽茎段接种到经设计的 不同激素组合的诱导培养基上。 （3）培养基的配制 花梗腋芽诱导培养基为1/ 2MS +BA2. 5 mg/L + NAA0. 2 mg/L 。 增殖培养基为1/ 2 MS + BA3. 5 mg/L + KT1. 0 mg/L + NAA0. 5 mg/L + 椰乳10 %。 生根培养基为1/ 2MS + BA1. 5 mg/L +NAA0. 3 mg/L + 80 g/L 香蕉泥 以上培养基p H 均为5. 5
生根与炼苗：
1、生根： MS+IAA0.5 70多天 后，具4～5条根 的 小苗，可出瓶种植。
2、炼苗：置于室温 7～10d后，打开瓶 盖2天，取出小苗假 植于水苔上。
任务目标：
任务1 由蝴蝶兰花梗诱导腋芽 任务2 对初代培养物诱导形成原球茎 任务3 对试管苗进行试管内生根培养 任务4 对生根苗进行驯化和移栽
所需物品：
1、超净工作台 2、高压灭菌锅 3、培养瓶 4、培养框 5、恒温室 6、培养室
7、试管 8、酒精灯 9、镊子 10、剪刀 11、培养皿 12、三角瓶
原球茎Hale Waihona Puke Baidu养：
1、原球茎诱导 试管苗的嫩叶：MS+BA 4～6mg/l+IBA 0.5～
1mg/l+胰蛋白胨2g/l+椰乳40g/l 25～28℃，1500～2000lx，光照10h/d，逐
渐出现愈伤组织状的早期原球茎。
2、原球茎继代培养 将原球茎切割长数小块， 继代培养50～
60d转接一次，增殖倍数为10～12，实现蝴蝶兰 生产的工厂化育苗。
蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧芽，花似蝴蝶，色泽
丰富，形态美妙，花期长达3-4个月，深受各国人民欢迎。
蝴蝶兰组培技术的研究进展：
兰花的组织培养在国外研究较早。 1949年利用花梗休眠芽在无菌条件下发育成完整的植株,此法经改进后曾一 度成为蝴蝶兰的主要繁殖方式,但因限于外植体数量繁殖系数难以提高； 1960年成功进行了兰花的茎尖培养并得到小植株,在此基础上进一步研究了 较容易的无性繁殖兰花苗的方法； 1956年后在美国、法国、日本先后出现了利用组培繁殖兰花的专业种苗商； 1974年利用蝴蝶兰茎尖诱导出原球茎状体,再分化成植株; 1975年日本学者田中以兰花实生苗叶片为外植体诱导出原球茎,然后形成再 生苗; 1992年Kundson首次使兰花种子在无菌条件下发芽并良好生长。 这些研究都为以后通过组织培养快繁蝴蝶兰打下了基础。
蝴蝶兰属的拉丁学名是由Phala（蛾蝶）和Opsis（模样） 组成，意指花外形似蛾蝶。该属植物约有4个原生种，主要 分布在南北纬度23度之间，从喜马拉雅山经印度、缅甸、 中国南部、马来西亚、菲律宾、澳大利亚和新几内亚。我 国云南南部、西藏南部、广东南部、海南和台湾一线为该 属植物的最北分布界限。
蝴蝶兰属热 带气生兰植 物，原生种 有70多种， 原产于我国 台湾、菲律 宾、印度尼 西亚等地。
培养：
1、选材与消毒:75%酒精30S，0.1%升汞5min ①种子 ： MS+BA0.5㎎/L +NAA0.1㎎/L+3%蔗糖。 60天。 ②花梗：1/2MS+BA5.0㎎/L +NAA0.5㎎/L培养基。 培养4周左右。 2、初代培养 ①种子： MS+BA5.0㎎/L 培养基上。60天，4cm高 实生苗 ②花梗：MS+BA5.0㎎/L 培养基上。4w苞叶处丛生 小芽
此后兰花的快繁技术发展很快,目前已有70 个属200～300种兰花可通过组织培养方式进 行快速繁殖,形成了规模宏大的“兰花工业”。 国内对蝴蝶兰的组织培养研究起步较晚,20 世纪80年代才开始有少量报道,近年来出现
了不少以蝴蝶兰的茎尖、花梗、叶片、根尖 等外植体进行组培快繁的报道,但快繁效果不 甚理想,尚有许多环节需要改进。
13、烧杯 14、量筒 15、酒精 16、A4纸 17、蝴蝶兰外 植体 18、培养基
蝴蝶兰组培的意义：
蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株上极少 发育侧枝，比其他种类的兰花更难于 进行常规无性繁殖。组织培养是建立 蝴蝶兰快速繁殖无性系的重要手段。
技术路线：
为了大量繁殖，实现大规模的商业化生产， 采用蝴蝶兰的组织培养。取用蝴蝶兰新鲜、 侧芽饱满的花梗进行无菌培养，产生单株小 苗。再进行试管苗茎尖培养，诱导为原球茎 体。经原球茎培养，继代扩大增殖，可培养 成蝴蝶兰小植株。
蝴蝶兰的组织培养
14级生物制药
小组成员：张静 刘小佳 王爱霞 张耀儒 刘丙泉
田伟
此方案由小组成员协作完成。 分工如下：
1、张静、王爱霞负责方案内图片的 收集； 2、刘丙泉负责外植体消毒与培养； 3、张耀儒、田伟负责培养基的配置； 4、刘小佳负责材料的整理。
简介：
蝴蝶兰：兰科，蝴蝶兰属； 别 名：蝶兰，拉丁名： Phalaenopsis amabilis 蝴蝶兰是单茎性附生兰，茎 短，叶大，花茎一至数枚， 花大，因花形似蝶得名。其 花姿优美，颜色华丽，为热 带兰中的珍品，有“兰中皇 后”之美誉。
蝴 蝶 兰 腋 芽 萌 发
叶基部、叶中段、叶尖部
MS+BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L+苹果汁 80g/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L+活性 炭1g/L为好。 培养条件：25℃，600lx pH5.4~5.6 以基部0.5~1.0cm，上表面朝上平 放为好。
试管苗茎尖的培养：
材料: 试管苗茎尖0.3mm左右 培养基: MS+BA 3～6mg/l+椰乳 温度: 25～28℃ 光强: 光照时间8～10h/d 14d后茎尖膨大，呈浅绿色半球状，3个 月后，可诱导原球茎。